Штамм культивируемых клеток растений UNGeRNIa VIстоRIS - продуцент алкалоидов группы галантамина и ликорина Советский патент 1993 года по МПК C12N5/04 

500,0 0,3-0,5

0.9-1,1 0,9-1,1

0,9-1,1

1 R-2 2

29000,0-31000,0

6000,0-8000,0

До 1 л

5,8-6,2

Кинетин1,0

а-НУК2,0

Мезоинозит75,0-85.0

Гидролизат

казеина

Тиамин-хлорид

Аскорбиновая

кислота ,.

Пиридоксин

хлорид

Никотиновая

кислота

L-Тирозин

Сахароза

Агар

Н20

рН

Сосуды для выращивания и объем питательной среды в них:

банки для расфасовки сметаны объемом 200 мл, содержащие 50-60 мл среды или пробирки большие биологические 210x20, объем среды 20 мл, кратность рассева: 5-9.

Цитологическая характеристика, .

Каллусные клетки паренхимного типа, диаметр клеток 80-300 мкм, средний диаметр 184,3 мкм. Средний диаметр ядер 13,2 мкм. Ядерно-плазменное отношение 0,0850. Митотическая активность 60% в начале фазы стационарного роста,

Кариологическая характеристика.

Пределы варьирования по числу хромосом, модальный класс 18-24: 22.

Размеры хромосом: l-ая пара хромосом 19,2 мкм, Xll-ая пара 7,8 мкм, IV-ая и Vl-ая пары хромосом содержат спутники.

Маркерные признаки:

а) содержание галантамина - 6,6%, ли- корина - 58%; нарведина - 6,2% от суммы алкалоидов

б) электрофоретический спектр неспецифических эстераз - 14 изоформ (чертеж).

в) IV и VI пары хромосом имеют спутники;

г) свечение каллусной ткани в УФ.

Способность к морфогенезу пониженная.

Штамм культивированных клеток Ungernla vlctorls (Vved) V-l N 39 является продуцентом алкалоидов группы галантамина и ликорина.

Алкалоидный состав изучали методами: цитохимическим, люминесценции, тонкослойной хроматографии, УФ-спектроско- пии. Люминесцентный анализ показал, что ткань обладает слабым свечением, Цитохи- мическое исследование клеток унгернии показало наличие положительных реакций на общеосадочные реактивы алкалоидов. Тонкослойная хроматография и спектроскопия выявили наличие алкалоидов в количестве 0,04-0,06%.

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

Для хранения штамма используют метод пересевов (продолжительность цикла выращивания - 30-40 суток). П р и м е р 1.

Инокулятный материал в количестве 0,20 г помещают в большую биологическую пробирку с 20 мл питательной среды следующего состава, мг.л:

МНдНОз1650,0 КМОз 1920,0 CaCI2 -2Н20 450,0 MgS04.7H20 370,0 KH2PO j б/в 170,0 НзВОз . 6,20 ZnSO -4Н20 8,60 MnS04 -4H20 22,30 KI 0,83 Na2Mo04 -2H20 0,25 CuSCM -5Н20 0,025 CoCI2 -6Н20 0,025 Трилон Б 37,375 FeSCM -7H20 27,85 Кинетин 1,0 «-НУК 2iO Мезоиноэит 80,0 Гидролизат казеина 500.0 Тиамин-хлорид 0,4 Аскорбиновая кислота 1,0 Пиридоксин 1,0 Никотиновая кислота 1,0 L-Тирозин 2,0 Сахароза 30000,0 Агар 7000,0 Н20 до 1 л рН 6,0 Выращивают 36 суток при t 24-26°C в темноте. Вес полученной биомассы составляет 1,74 г (87 г/л), сухой вес 0,1148 г (5 г/л). Суммарная алкалоидная фракция 0,042% от сухого веса.

Пример 2. Инокулятный материал в количестве 1,0 г помещают в банку для расфасовки сметаны с 50 мл питательной среды. Выращивают в условиях по примеру 1 в течение 31 суток. Вес снятой сырой биомассы 6,3 г (126 г/л), сухой вес 0,4914 г (9,8 г/л). Суммарная алкалоидная фракция 0,051 % от сухого веса.

Заявляемый штамм является первым для культивируемых клеток Ungernla Vlctorls {Vved) семейства Amaryllldaceae перспективен для выращивания в промышленных условиях с последующим получением из него биологически активного препарата медицинского назначения.

Формула изобретения Штамм культивируемых клеток растений Ungernla vlctoris BCKK-BP № 39 - продуцент алкалоидов группы галантамина и ликорина.