Способ повышения биологической активности вирусов гриппа Советский патент 1993 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской вирусологии, и может быть использовано в научных исследованиях для повышения биологической активности вирусов гриппа и изучения коррелирующих с ней признаков, а также в научно-практической работе для получения высокорепродуктивных вакцинных штаммов.

Целью изобретения является повышение биологической активности (инфекционной и иммуногенной) вирусов гриппа типов А и В.

Это достигается путем предварительного пассирования в присутствии сублетальной дозы химиопрепарата специфического действия (ремантадина - для типа А и адап- ромина для типа В) вирусов гриппа.

Способ осуществляется следующим образом.

В куриные эмбрионы 10-дневного возраста вводят ремантадин или адапромин из расчета 200 мкг/мл (2 мг на эмбрион) ремантадина для вирусов гриппа А или 500 мкг/мл (5 мг на эмбрион) адапромина для вирусов

гриппа типа В. Эмбрионы после этого выдерживают в термостате в течение 1,5-2 часов, затем вводят вирусы гриппа и инкубируют в термостате в течение 48-72 часов в зависимости от типа вируса гриппа. Проводят 2 пассажа с интервалом 3 дня. Инфекционный титр определяют методом предельных разведении и выражают в Ig ЭИДбо,

Пример 1. Для повышения биологической активности вируса гриппа в куриный эмбрион вводится ремантадин для вируса гриппа типа А или адапромин для вируса гриппа типа В, через 1,5-2 часа проводят заражение эмбрионов вирусами - по 0.2 мл десятикратных разведении вирусосодержа- щей жидкости. Инкубацию проводят в течение 48 часов при температуре 35,5° для вирусов гриппа типа А и 72 часа при температуре 33° для вирусов гриппа типа В. Полученную вируссодержащую жидкость титруют на куриных эмбрионах методом предельных разведении и определяют инфекционный титр в Ig ЭИДбо. Параллельно проводится титрование вирусов, пассирооэ

о о

00

О

Ы

ванных без добавления химиопрепаратов. Средние данные, полученные после 3 опытов представлены в таблице. Кроме эталонных вирусов, исследовались экспериментально полученные варианты с различной иммуногенной активностью (4/1-Хабаровск, 5/М-Виктория, 5/1-В/Ленинград),;

После 2 пассажей в присутствии хими- опрепаратов (ремантадина или ада промина) инфекционные титры всех изученных вирусов типа А ( и Н3№2) и типа В возрастают от 1,5 до 4,0 Ig ЭИДбо.

П р и м. е р 2. Полученными после 2 пассажей в присутствии химиопрепаратов вирусами, а также исходными штаммами проводят внутрибрюшинную иммунизацию белых мышей. Животных иммунизируют под эфирным наркозом по 0,3 мл вирусами с одинаковым гемагглютинирующим титром 1:64. Титры антигемагглютининов в сыворотках крови животных исследуют через 21 день после иммунизации. V вирусов, прошедших 2 пассажа в присутствии химиопрепаратов, иммуногенная активность превышает имму- ногенность исходных штаммов в 1,89-3,12 раза.

0

5

0

5

Таким образом, пассирование вирусов гриппа в присутствии химиопрепаратов можно применять для получения высокоиммунных сывороток лабораторных животных, используемых при проведении научных исследований, а также при подготовке вакцинных штаммов для повышения их инфекционной и иммуногенной активности.

Формула изобретения .

Способ повышения биологической активности вирусов гриппа, включающий введение противовирусного препарата в биологический материал, заражения его вирусом, инкубирование с последующим пассированном в присутствии противовирусного препарата, отличающийся тем, что, с целью повышения инфекционно- сти и иммуногенной активности вирусов, в качестве биологического материала используют куриные эмбрионы, а в качестве проти- вовирусного препарата используют ремантадин в дозе 2 мг на эмбрион вируса гриппа А или адапромин в дозе 5 м- на эмбрион для вируса гриппа В, при этом пассирование осуществляют 2-3 раза,

Использование: вирусология, биотехнология. Сущность изобретения: биологическую активность вирусов гриппа повышают путем пассирования в присутствии противовирусных препаратов. Для вируса гриппа А используют ремантадин в дозе 2 мг на эмбрион, а для вируса гриппа В - адапромин в дозе 5 мг на эмбрион. 1 табл.

Влияние культивирования вирусов в присутствии химиопрепаратов на их инфекционного.