СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ФЕРМЕНТА ГЛЮКОЗООКСИДАЗЫ Советский патент 1966 года по МПК C12N9/04 

В связи с организацией промышленного производства фермента глюкозооксидазы вопрос разработки эффективного способа получения препарата этого фермента приобретает актуальное значение.

В лабораторных условиях препараты фермента глюкозооксндазы получают поверхностным способом выращивания особого штамма пенициллина Реп. vitale. Однако промышленное производство глюкозооксидазы поверхностным способом требует больших плошадей, громоздкого оборудования, трудно поддается механизации.

Способ получения препарата фермента глюкозооксидазы путем глубинного выращивания ее продуцентов на сахаросодержащей - питательной среде также известен. Причем при работе по известному способу добавляют стимуляторы роста Н осуществляют аэрацию, а затем, получив культуральную жидкость, выделяют из нее препарат ферментов одним из известных приемов.

Предлагаемый способ получения препарата фермента глюкозооксидазы путем глубинного выращивания предупреждает инактивацию ферментов. Следовательно, такой способ эффективнее известного глубинного и обеспечивает выход фермента, близкий к выходу при поверхностном способе, суть которого заключается в том, что аэрацию при выращивании

фермента ведут только в начальной стадии процесса. Причем аэрировать следует преимущественно в течение 12 час при общей продолжительности процесса около 60-72 час. Количество воздуха целесообразно постепенно сокращать с. 0,75 объема в минуту на 1 объем среды в первые часы до 0,25 объема в минуту в последующие часы процесса аэрации.

Посевной материал выращивают в посевных аппаратах на среде, в которую в качестве стимуляторов роста вводят биологически активные вещества, например кукурузный экстракт, в количестве от 0,5 до 0,75% (в пересчете на сухое вещество). В этом случае становится

5 возможным уменьшить количество сахара в среде на 25%. Затем посевной материал передают в ферментаторы. Процесс ферментации ведут при аэрировании в течение первых 12 час, количество поступающего при этом воздуха постепенно сокращают с 0,75 объема его (в минуту) на 1 объем среды в первые часы до 0,25 объема воздуха на 1 объем среды в последующие часы аэрирования. Дальнейшую ферментацию ведут без доступа воздуха при

5 механическом перемешивании и заканчивают спустя 60-72 час с момента внесения в ферментатор посевного материала.

содержанием белка 95-100% и активностью по Q о, 220000-250000, что соответствует содержанию в 1 г препарата 185000-195 000 ед. фермента.

Выделяют ферменты из культуральной жидкости и очищают одним из известных способов.

Предмет изобретения

I. Способ получения препарата фермента глюкозооксидазы путем глубинного выращивания ее продуцентов на сахаросодержащей питательной среде с добавлением стимуляторов роста и осуществлением аэрации и последующего выделения препарата из культуральной

жидкости, отличающийся тем, что, с целью предупреждения инактивации фермента, аэрацию ведут только в начальной стадии процесса, а окончание процесса выращивания проводят в анаэробных условиях.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что аэрацию проводят преимущественно в течение 12 час при общей продолжительности процесса около 60-72 час.

3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что количество воздуха, подаваемого в процессе аэрации, постепенио сокращают с 0,75 объемов в минуту на 1 объем среды в первые часы до 0,25 объемов в минуту в последующие часы процесса аэрирования.