ВСЕСОЮЗНАЯ J Советский патент 1972 года по МПК C12N9/34 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству ферментных препаратов микробного происхождения.

Известен способ получения глюкоамилазы путем выраидивавия дрожжей Endomycopsis на питательной среде, содержащей крахмал, вытяжку из солодовых ростков, сульфат аммония, однозамещенный фосфат калия, с последующим отделением клеток дрожжей, концентрированием культуральной жидкости и осаждением ферментов сульфатом аммония.

|Цель изобретения - интенсификация процесса биосинтеза.

Для этого в качестве продуцента дрожжей используют щтаММ Endomycopsis fibuliger R-313, а в питательную среду дополнительно вводят дрожжевой автолизат в количестве 1--3% от общего состава среды и 0,2- 0,6 г/л нитрата калия.

Сульфат аммония и однозамещенный фосфат калия целесообразно вводить в среду в количестве, соответственно равном (г/л) 3-О и 1,5.

Для снижения себестоимости препарата дрожжевой автолизат получают из биомассы продуцента.

Производят выращивание дрожжей Endomycopsis fibuliger R-313 на питательной среде, содержащей 0,5% клейстеризованного крахмала, 3,0 г/л сульфата аммония, 1,5 г/л

однозамещенного фосфата калия, 0,4 г/л нитрата кальция, 10 мл/л дрожжевого автолизата и 50 Л1л/л вытяжки из солодовых ростков при рН среды 7,0-8,0. После выращивания клетки дрожжей отделяют фильтрованием и фильтрат концентрируют на вакуум-выпарных установках, а затем выделяют ферменты путем осаждения их спиртом или сульфатом аммония. Для получения препарата для кормовых целей, культуральную жидкость подвергают последовательному обезвоживанию в вакуум-выпарных аппаратах, а затем сущат на сублимационной сушилке. .Пример. Применяется штамм Endomycopsis fibuliger R-313 со следующей характеристикой:

Морфология. Средняя величина клеток суточной культуры на среде Ридера, в которой в качестве источника углерода применяется

крахмал в количестве 0,5-1% от общего состава среды и дрожжевой автолизат в количестве 10-25 МЛ/Л, диаметр клеток 4,8- 6,0 мк, длина 5,5-12 мк. Преобладающая форма овальная, при отсутствии интенсивноветвленный белый мицелий, легко разделяющийся на клетки.

Органические среды, сусловая жидкая среда. На поверхности среды образуется влажная пленка. Через 5 дней на той же среде при 30°С образуется толстая пленка, покрывающая 1ВСЮ поверхность.

Агаризованная сусловая среда. При 35°С образует бархатистые белые колонки, рост обильный, края ровные, возвышений нет.

Нитраты. Не восстанавливает в нитриты.

Отиошение к азоту. Как источник азота использует соли аммония, слабо использует нитраты и мочевину.

Отношение к углеводам. Как источник углерода использует крахмал, мальтозу, лактозу, фруктозу; слабо использует глюкозу, сахарозу, парафин; не использует органические кислоты.

Молоко. Молоко свертывает и пептонизирует.

Биохимические свойства. Является активным продуцентом глюкоамилазы. Через 12- 15 час глубинного культивирования при интенсивной аэрации достигается глюкоамилазная активность в 8120 единиц на 100 мл при определении глюкооксидазным способом.

Штамм Endmycopsis fibuliger R-313 культивировался на лабораторном стенде с сопло-конусными ферментаторами емкостью 4 л. При этом питательная среда содержала от

общего количества, %:

0,3 (NH4)2S04 Са(ЫОз)2

0,04

0,15

КН2Р04

0,5

растворимый крахмал

1 млсрелы дрожжевой автолизат вытяжка из солодовых

млПОО мл среды. ростков

Культивирование проводится при 30°С, рН 7,0. Посевной материал размножается В течение 24 час на вышеуказанной среде, его количество 8%. В микроскопе культура чистая, гомогенная. Полученный препарат (биомасса) содержит 48,7% условного белка, влажность 12,3%, глюкоамилазная активность на 100 мл 8120 единиц. При этом культуральная жидкость после ферментации упаривается при 38-40°С и высушивается в распылительной сушилке.

Предмет изобретения

1. Способ получения глюкоамилазы путем выращивания дрожжей Endomycopsis на питательной среде, содержащей крахмал, вытяжку из солодовых ростков, слуьфат аммония, однозамещенный фосфат калия, с последующим отделением клеток дрожжей, концентрированием культуральной жидкости и осаждением ферментов, напри.мер, сульфатом аммония, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса биосинтеза, в качестве продуцента дрожжей используют штамм Endomycopsis fibuliger R-313, а в питательную среду дополнительно (Вводят дрожл евой автолизат в количестве 1-3% от общего состава среды и 0,2-0,6 г/л нитрата кальция.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что сульфат аммония, однозамещенный фосфат калия вводят в среду в количестве соответственно равном (г/л) 3,0 и 1,5.

3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью снижения себестоимости препарата, дрожжевой автолизат получают из биомассы продуцента.