ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА РОГАТОГО СКОТА Советский патент 1995 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к получению вакцины для профилактики некробактериоза рогатого скота.

Цель изобретения получение эффективной вакцины, обеспечивающей создание длительного напряженного иммунитета у крупного рогатого скота и овец против некробактериоза.

Поставленная цель достигнута благодаря тому, что в вакцину дополнительно вводят экзотоксин F. necrophorum, представляющий собой белок с мол.м. 18000-20000 Д, разрушающийся 0,5%-ным трипсином через 30-40 мин, вызывающий гибель кроликов при внутривенном введении (0,5 мл) через 14-16 ч, вызывающий гемолиз эритроцитов барана, лошади и кролика; эндотоксин F.necrophorum, представляющий собой белок с мол.м. 12000-15000 Д, стабильный при нагревании до 70-75^оС в течение 30 мин, при инкубации с 0,5%-ным трипсином при внутрикожном введении кролику (0,5 мл) вызывает дермонекротическую реакцию, вызывает лизис эритроцитов барана, лошади и кролика; инактиватор формалин, а в качестве адъюванта берут легкое минеральное масло и безводный ланолин в соотношении 85:15-83:17, при этом компоненты, входящие в состав вакцины берут соответственно (на 1 л вакцины), мл: Антиген возбудителя некробактериоза, содер- жащий 5,5-6,0 мг. экзо- токсина на физиологи- ческом растворе 55,0-60,0 2,5-3,0 мг. эндоток- сина на физиологичес- ком растворе 25,0-30,0 Формалин 3,0-4,0 Адъювант: Легкое минеральное масло (ТУ 38-101-307-72) 415,0-425,0 Ланолин безводный 85,0-75,0 Физиологический раствор Остальное
П р и м е р 1. Для изготовления вакцины брали штамм возбудителя некробактериоза, который был выделен из пораженной конечности северного оленя совхоза "Ярсилинский" Ямало-Ненецкого автономного округа в ноябре 1986 года. Штамм высевали в пробирки со средой Китт-Тароцци и культивировали при температуре 37^оС в течение 24-36 ч. Рост штамма отмечали визуально и световой микроскопией. Из выросшего штамма делали расплодку. После культивирования отделяли бактериальные тела центрифугированием при 3500 об/мин в течение 25 мин. Полученный осадок бактериальных тел ресуспендировали в физиологическом растворе (рН 7,2-7,4). После этого для получения эндотоксина бактериальные тела дезинтегрировали на ультразвуковой установке МSE в течение 30 мин. Разрушенные клеточные стенки отделяли центрифугированием при 3500 об/мин в течение 25 мин. В полученной фракции определяли общий белок по Лоури.

В культуральной жидкости, после отделения бактериальных тел, также определяли общий белок, после чего для концентрирования нативного экзотоксина добавляли сухой сульфат аммония из расчета 40-45% к объему жидкости. Полученный экзотоксин диализировали против физиологического раствора (рН 7,2-7,4). Раствор меняли трижды по истечении 4-5 ч. После определения по общепринятым методикам токсичности экзотоксина и эндотоксина их инактивировали добавлением 0,3-0,4% и повторно через сутки 0,1-0,2 формалина и выдерживали одновременно в термостате при температуре 41-42^оС в течение 14-15 сут.

Для изготовления одного литра вакцины брали, мл:
5,0 мг. экзотоксина на физиологическом растворе 50,0
2,5 мг. эндотоксина на физиологическом растворе 25,0 Формалина 4,0 Легкое минеральное масло 415,0 Ланолин безводный 85,0 Физиологический раствор Остальное
Вакцину эмульгировали в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 15-20 мин.

Полученную вакцину апробировали на 125 гол. крупного рогатого скота. Эффективность вакцины составила 85%
П р и м е р 2. Для изготовления вакцины брали штамм возбудителя некробактериоза, который был выделен из пораженной конечности крупного рогатого скота, принадлежащего Госконзаводу "Сторожилово" Сторожиловского района Рязанской области в январе 1989 года.

Вакцину готовили аналогично примеру 1.

На один литр вакцины брали, мл:
6,0 мг. экзотоксина на физиологическом растворе 60,0
3,6 мг. эндотоксина на физиологическом растворе 30,0 Формалин 3,5
Легкое минеральное масло 425,0 Ланолин безводный 75,0 Физиологический раствор Остальное
Полученную вакцину апробировали на 96 гол. крупного рогатого скота. Эффективность составила 87%
П р и м е р 3. Для изготовления вакцины брали штамм возбудителя некробактериоза, который был выделен из пораженной конечности северного оленя одного из хозяйств Магаданской области в июне 1989 года.

На один литр вакцины брали, мл:
5,7 мг. экзотоксина на физиологическом растворе 57,0
2,8 мл эндотоксина на физиологическом растворе 28,0 Формалин 3,0 Легкое минеральное масло 425,0 Ланолин безводный 75,0 Физиологический раствор Остальное
Полученная вакцина была применена на 133 гол. овец. Эффективность составила 87%
П р и м е р 4. Для изготовления вакцины брали штамм возбудителя некробактериоза, который был выделен от павшего ягненка (печени), принадлежавшего совхозу "Акушинский" Акушинского района Дагестанской АССР в апреле-мае 1989 года.

На 1 л вакцины брали, мл: 5,8 мг. экзотоксина на физиологическом растворе 58,0 2,7 мг. эндотоксина на физиологическом растворе 27,0 Формалин 4,0 Легкое минеральное масло 420,0 Ланолин безводный 80,0 Физиологический раствор Остальное
Вакцина была испытана на 56 гол.овец. Эффективность составила 85%
Штаммы возбудителя некробактериоза, отраженные в примерах по биологическим свойствам эндотоксинов и экзотоксинов были близко родственны.

Вакцина имеет следующие отличия и преимущества:
в состав вакцины входят эндотоксин и экзотоксин возбудителя некробактериоза;
вакцина создает напряженный иммунитет в течение 3,5-4 мес у крупного и мелкого рогатого скота;
вакцину готовят из отечественных штаммов.

Вакцину применяют в неблагополучных по некробактериозу хозяйствах двукратно с интервалом 4-6 недель и вводят подкожно крупному рогатому скоту в область средней трети шеи в дозе: первый раз 2,0-2,2 мл, второй раз 3,0-3,2 мл; мелкому рогатому скоту в область внутренней поверхности бедра в дозе: первый раз 1,0-1,2 мл, второй раз 1,5-1,7 мл.

Вакцина найдет применение в неблагополучных по некробактериозу крупного рогатого скота комплексах, откормочных площадках, в овцеводческих хозяйствах и позволит резко сократить процент данного заболевания, а следовательно, повысить выход мяса, молока и шерсти в стране, что является одной из важнейших проблем на современном этапе.

Использование: биотехнология, вакцина против некробактериоза рогатого скота, профилактика некробактериоза. Сущность изобретения: вакцина дополнительно содержит инактивированный формалином экзотоксин возбудителя некробактериоза, в качестве адъюванта легкое минеральное масло и безводный ланолин, а также белок эндотоксина возбудителя некробактериоза. Вакцина обеспечивает создание напряженного иммунитета против некробактериоза крупного рогатого скота и овец, удобна в применении и транспортировке.

ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА РОГАТОГО СКОТА, содержащая эндотоксин из Fusobacterium necrophorum, формалин, адъювант и физиологический раствор, отличающаяся тем, что, с целью повышения длительности и напряженности иммунитета, вакцина дополнительно содержит экзотоксин Fusobacterium necrophorum, представляющий собой белок с мол.м. 18000 20000 Д, разрушающийся 0,5%-ным трипсином через 30 40 мин, вызывающий гибель кроликов при внутривенном введении через 14 16 ч, вызывающий гемолиз эритроцитов барана, лошади и кролика; из эндотоксинов содержит белок эндотоксина Fusobacterium necrophorum с мол. м. 12000 15000 Д, стабильного при нагревании до 70 75^oС в течение 30 мин, при инкубации с 0,5%-ным трипсином при внутрикожном введении кролику (0,5 мл) вызывает дерматонекротическую реакцию, вызывает лизис эритроцитов барана, лошади и кролика; в качестве адъюванта легкое минеральное масло и ланолин безводный в соотношении 85 15 83 17 при следующемсоотношении компонентов (на 1 л вакцины), мл:
Белок экзотоксина Fusobacterium necrophorum с мол. м. 18000 20000 Д в физиологическом растворе в количестве 5,5 6,0 мг% 55,0 60,0
Белок эндотоксина Fusobacterium necrophorum с мол. м. 12000 15000 Д в физиологическом растворе в количестве 2,5 3,0 мг% 25,0 30,0
Формалин 3,0 4,0
Легкое минеральное масло 415,0 425,0
Ланолин безводный 75,0 85,0
Физиологический раствор До 1 л