Способ получения сорбента для аффинной хроматографии Советский патент 1993 года по МПК B01J20/22 

Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к способу получения производных целлюлозы и гепарина, которые могут найти применение в качестве сорбента в аффинной хроматографии.

Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения сорбента для аффинной хроматографии, включающем обработку гидроксилсодержащего полимера водным раствором гепарина и выделение целевого продукта, в качестве гидроксилсодержащего полимера используют целлюлозу и обработку гепарином проводят в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы гепари на и глутарового альдегида ():(1-5):(1-7) и дополнительно проводят обработку этанолом в присутствии серной кислоты при 60-75°С и рН 3,5-4,5.

Пример 1.0,14 г гепарина растворяют в 3,6 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида рН 5. 0,14 г целлюлозы в виде трикотажного

полотна помещают в приготовленный раствор при модуле 30.

Массовое соотношение на 1 стадии реакции целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 1:1:1 соответственно. Реакцию проводят при 75°С в течение 40 мин.

Сорбент, полученный на 1 стадии реакции, отжимают и помещают в раствор этилового спирта, содержащего концентрированную серную кислоту, при рН 4,5.

Вторую стадию реакции проводят 20 мин при 75°С. Затем оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1%-ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором.

Полученный сорбент высушивают на воздухе и проверяют на содержание иммобилизованного гепарина по цветной реакции с синим красителем азуром 1. Сорбент содержит 150 мг гепарина на 1 г носителя.

П р и м е р 2. 0,70 г гепарина растворяют в 3,6 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида при рН 5. 0,14 г целлюлозы в виде медицинской марли помещают в приготовленный раствор при модуле 30.

00

00

Ј

со

Массовое соотношение целлюлозы, ге- парина и глутарового альдегида равно 1:5:1. Реакцию проводят при 70°С в течение 50 мин.

Сорбент, полученный на первой стадии реакции, отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 3,5. Вторую стадию реакции проводят 30 мин при 65°С. Затем серную кислоту нейтрализуют 1 %-ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе. Содержание гепарина 250 мг на 1 г носителя.

П ри м ерЗ. 0,14 г гепарина растворяют в 0,5 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида при рН 5. 0,14 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором до привеса 450%.

Соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 1:1:1 соответственно. Реакцию проводят при 60°С в течение 50 мин. Полученный сорбент отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 4.

Вторую стадию реакции проводят 30 мин при 60°С. Серную кислоту нейтрализуют 1 %-ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Затем сорбент высушивают на воздухе, содержание иммобилизованного гепарина проверяют по цветной реакции с синим красителем азуром 1. Сорбент содержит 150 мг гепарина на 1 г носителя.

Пример 4. 4г гепарина растворяют в 18 мл дистиллированной воды и в 12 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида при рН 5.

3 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и отжимают на вальцах до привеса 450%.

Соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 3:1:3. Реакцию проводят при 75°С в течение 10 мин.

Сорбент, полученный на 1 стадии реакции, отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 4. Вторую стадию реакции проводят 30 мин при 70°С. Оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1 %-ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе. Содержание иммобилизованного гепарина в сорбенте составляет 160 мг гепарина на 1 г носителя.

Пример 5. 1 г гепарина растворяют в 40 мл дистиллированной воды и в 20 мл

25%-ного раствора глутарового альдегида при рН 5.

5 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и отжимают на вальцах до привеса 400%. Массовое соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 5:1:5. Реакцию проводят при80°С в течение 45 мин. Полученный сорбент отжимают и

помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 4.

Вторую стадию реакции проводят 25 мин при 70°С. Затем оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1 %-ным раствором

бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе. Содержание иммобилизованного гепарина составляет 140 мг на 1 г носителя.

Пример 6.1 г гепарина растворяют в 42 мл дистиллированной воды и в 28 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида при рН 5.

7 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и отжимают до привеса 400%.

Массовое соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 7:1:7. Реакцию проводят 50 мин при-80°С. Сор- бент, полученный на 1 стадии реакции, отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 4. Вторую стадию реакции проводят 30 мин при 65°С, Оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1 %-ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе и проверяют на содержание иммобилизованного гепарина.

Сорбент содержит 110 мг гепарина на 1 г носителя.

Формула изобретения

Способ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий обработку гидроксилсодержащего полимера водным раствором гепарина и выделение целевого продукта, отличающийся

тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, в качестве гидроксилсодержащего полимера используют целлюлозу и обработку епарином проводят в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида (1-7):(1-5):(1-7) и дополнительно проводят обработку этано- лом в присутствии серной кислоты при 60- 75°С и рН 3,5-4,5,

Сущность изобретения: целлюлозу обрабатывают водным раствором гепарина в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида, равном (1-7):(1-5):1- 7 при 60-80°С с последующей обработкой этанолом в присутствии серной кислоты при 60-70°С и рН 3,5-4,5.