Способ индукции новообразований и регенерантов в культуре пыльников IN VIтRо у озимых гексаплоидного тритикале и пшеницы Советский патент 1993 года по МПК A01H4/00 

Ј

Использование: биотехнология, культивирование тканей и клеток растений, андро- генез. Сущность изобретения: новообразования и регенеранты гексапло- идного тритикале и пшеницы получают путем выращивания донорных растений, эксплантации пыльников на питательную среду и дальнейшего культивирования, при этом семена донорных растений облучают радиацией в дозе 5-10 кР. 6 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетике и селекции, и может быть использовано для ускоренного получения дигаплоидных линий, а также при создании исходного материала для селекции растений.

Цель изобретения - повышение индукции новообразований и зеленых регенеран- тов.

Поставленная цель достигается тем, что в способе индукции новообразований и регенератов в культуре пыльников у озимых гексаплоидного тритикале и пшеницы, включающим выращивание донорных растений и посадку пыльников на питательную преду, семена донорных растений облучают /-лучами в дозе 5-10 кР.

По сравнению с прототипом техническое решение включает облучение семян донорных растений у -лучами в дозе 5-10 кР,

что соответствует критерию изобретения новизна.

В предлагаемом способе обработку семян зерновых культур у -лучами проводят при выращивании донорных растений для культуры пыльников In vitro с целью повышения выхода новообразований и зеленых растений.

Пример. Семена гомозиготной линии Л160 и гибридной комбинации (Fj) ГК340 озимого гексаплоидного тритикале, а также озимой пшеницы Л1 по 100 семян каждого образца были облучены перед посевом у-луча- ми в дозах 5 кР -10 кР на установке Л МД-у-1 М (цезий 137) мощностью 3000 Р/мин. В качестве контроля были высеяны необлученные семена.

Колосья с пыльниками на одноядерной стадии срезали и выдерживали в течение 5 дней при температуре +4°С. Затем матери00

ю

hO О 00 00

ал стерилизовали 3% хлороцине и высаживали пыльники не среду Potato II, для каждого варианта высаживали не менее 300 пыльников (табл. 1).

После посадки пыльники культивировали в темноте гфи температуре 3t°C до появленияновообразований. Новообразования переносили на среду для регенерации, в качестве которой использовали среду Р8 (модификация среды Гамбор- га В-5) (6) без гормональных добавок:

Микроэлементымг/л

КМОз2500

CaCl2 -2Н2О150

MgS04 -7Н20250

(NH4)2S04134

NaH2P04 HzO150

Kl 0,0,75

НзВОз3.10

MnS04 H2010,00

ZnS04 -7H202,00

Na2Ma04 -2H2O0.25

CuS04 -5H200.025

CoCI2 -6H200,025

Na2 ЕДТА -2H2037,23

FeS04 -7H2027,80 Сахароза ЗОООО мг/л

Иноэитол100.0

НУК1 мг/л

Кинетин1 мг/л

Витамин Е0,1 мг/л

Агар0,6

рН5,7 Витамины по Стаба

Фолиевая кислота5 мг

Рибофлавин5 мг

Биотин10 мг

10мг 10мг 10мг 20мг 0,015 мг

0

5

0

5

0

5

Растворить в 100 мл, для приготовления 1 л среды брать 5 мл раствора.

Приведенные результаты дисперсионного анализа подтверждают положительное влияние у-облучения на регенерацию зеленых растений (табл. 6).

Так как наблюдалось значительное варьирование по выходу растений в зависимости от генотипа и дозы облучения, то рекомендуется использовать полный спектр приведенных доз у-облучения для определения наиболее оптимальной для испытываемого генотипа.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет увеличить выход новообразований при дозе 5 кР и долю зеленых рэстений- среди регенерантов при дозах 5-10 кР в зависимости от генотипа, что повышает эффективность метода получения гаплоидных растений через культуру пыльников.

Формула изобретения Способ индукции новообразований и регенерантов в культуре пыльников In vitro у озимых гексаплоидного тритикале и пшеницы, включающий выращивание донорных растений, эксплантацию пыльников на питательную среду и культивирование, отличающийся тем, что, с целью повышения частоты индукции новообразований и выхода зеленых растений, семена донорных растений облучают у-лучами в дозе 5-10 кР.

Таблица 1

518226836

Таблица 2 Выход новообразований при различных дозах облучения семян донорных растений, %

Результаты дисперсионного анализа по выходу новообразований при культивировании пыльников

Таблица 3

Доля зеленых растений среди общего числа регенератов в зависимости от дозы облучения, %

Выход зеленых регенерантов в зависимости от дозы облучения семян у гомозиготной линии озимого гексаплоидного тритикале Д160

Таблица в

Результаты дисперсионного анализа по выходу зеленых растений

Таблица Л

Таблица 5