Способ получения гаплоидов из микроспор злаков Советский патент 1989 года по МПК C12N5/00 A01H1/04 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для массового получения растений-регене- рантов в культуре пыльников, для размножения ценных генотипов лаков, а также для выяснения механизмов физиолого-биохимического регулирования процессов органогенеза.

Целью изобретения является увеличение выхода гаплоидов за счет более- полной реализации тртипотентности и потенциальной кустистости.

Способ охватывает все этапы пыль- никоврй культуры, начиная с посадки пыльников на питательную среду Присутствие растворимого крахмала и яблочной кислоты как компонентов клеток, сопровождаюпщх процесс вторичной дифференциации в первичной среде, усиливает индукцию новообразований.

регенерирующих в дальнейшем зеленые растения. Гибберелловая кислота как индуктор амилазной активности, крахмал и яблочная кислота в среде для регенерации позволяют и на втором этапе увеличить количество зеленых регенерантов. Перенос новообразований с зелеными растеньицами в жидкую питательную среду в условиях кор от- кого дня и пониженной температуры обеспечивает полноценное развитие всех начавших регенерировать зеленых растений и размножить каждое за счет реализации потенциальной кустистости на заключительном этапе пыльниковой культуры.

Пример. В первичную питательную среду на 1 л вносят 1 г растворимого крахмала и 25 г яблочной кис4 СО СП

оо

оо

3 . 1495373 оты. На эту среду высаживают пьть- .

НИКИ,

Полученные в процессе культивирования последних, новообразования переносят на регенерационную среду, содержащую 1 г растворимого крахмала, 25 мг яблочной и 0,5 мг гибберелловой кислот в 1 л. Новообразования, в которых появились зеленые регенеранты, Q переносят в колбы с жидкой питательной средой без гормонов и помещают в условия 10-часового дня и пониженной температуры, В дневные часы температура +12° С, ночью +9 С, Освещенность 5 2-2,5 тыс, люкс.

Влияние растворимого крахмала (1 г/л) и яблочной кислоты (25мг/л) на индукцию новообразований и зеленых регенерантов у тритикале и пшеницы 20 показано в табл,1; влияние добавок растворимого крахмала (1 г/л), яблрч- ной (25 мг/л) и гибберелловой (0,5 мг/л) кислот к регенерационной среде на выход зеленых растений три- 25 тикале и пшеницы - в табл,2; влияние короткого (10-часового) дня и пониженной ( - ночью, - днем) температуры на выход зеленых растений в жидкой среде без гормонов - в зо табЛоЗ.

На регенерационной среде многие новообразования слабо или совсем не регенерируют зеленые растения. При внесении в эту среду крахмала, яблочной и гибберелловой кислот количес гво зеленьк регенерантов заметно возрастает (табл,2), Б зависимости от генотипа увеличение составляет 117-225% от контроля. На заключительном этапе пыльниковой культуры часть начавпмх регенерировать зеленых растений слабо

35

40

Q 5

0 5 о

5

0

развивается и гибнет. При пересадке всех зеленых растений на жидкую среду без гормонов и помещение их в условия 10-часового дня и пониженной (9°С - ночью, - днем) температуры количество их резко возрастает (табл.3). Условия короткого дня и пониженной температуры обеспечивают хорошее развитие каждого растения и, особенно, проявление у них потенциальной кустистости, В результате увеличение количества растений по сравнению с контролем составляет в зависимости от генотипа 533-785%,

Формул аизобретения

Способ получения гаплоидов из микроспор злаков, включающий холодовую предобработку срезанных на одноядерной стадии микроспор колосьев, вычленение и помещение пыльников на первичную питательную среду, пересадку новообразований на питательную среду для регенерации в условиях длинного дня и повьш енной температуры с пересадкой на заключительном - этапе на жидкую питательную среду, о т. л и ч- а ю щ и и с я тем, что, с целью увеличения выхода гаплоидов за счет более полной реализации то- типотентности и потенциальной кустистости, в питательные среды вносят растворимый крахмал в концентрации 1-2 г/л, яблочную кислоту в концентрации 20-50 мг/л и гибберелловую кислоту в концентрации 0,5-1 мг/л, при этом гаплоидные растения в жидкой .среде на заключительном эгапе помещают в условия короткого дня и пониженной температуры,

Т а б л и ц а 1

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для массового получения растений-регенерантов в культуре пыльников для размножения ценных генотипов злаков. Целью изобретения является увеличение выхода гаплоидов за счет более полной реализации тотипотентности и потенциальной кустистости. Способ заключается в том, что на начальном этапе новообразования помещаются в условия длинного дня и повышенной температуры а на заключительном этапе растения-регенеранты помещаются в условия короткого дня и пониженной температуры, при этом в питательные среды вносятся растворимый крахмал, яблочная и гиббериловая кислоты. 3 табл.

Праг,46хТр, - пшеничный гибрид 6-78

АДЗ/5хТр.

105/83

144 133

1200

40

Тритикале 213/5-8РХ Ляско Тр.1137/ /82хЛяско Тр.47/82 X X Тр.1137/82 Тр. 1239 X X Тр.1137/82 Triple Dirk Centurk Лан

Прсд- олженгш табл. 1

130

3740

108

Таблкца2

Тр.47/82хТр. 1137/82

Тр.213/5 X

10

ТаблицаЗ

18

134

744