Способ получения инактивированного антигена вируса бешенства для постановки серологических реакций Советский патент 1993 года по МПК A61K39/205 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к способу получения неинфекционного антигена вируса бешенства животных, и рекомендовано для использования его в иммунобиологических реакциях, например в реакции энзим-меченых антител (РЭМА), в реакции длительного связывания комплемента (РДСК) и других.

Целью изобретения является разработка способа получения неинфекционного антигена вируса бешенства, исключающего риск заражения бешенством лабораторных работников, обладающего высокой иммуно- генной активностью для использования его в Иммунобиологических реакциях: РЭМА, РДСК и др.

Цель достигают путем инактивации суспензии вируса бешенства акролеином - химическим соединением щадящего действия на вирус в концентрации 0,5-1 %. Акролеин (акриловый альдегид, пропенал) с химической формулой CHz СНСНО представляет

собой брсцветную жидкость с молекулярным весом 56,07, легко воспламеняющуюся, с температурой кипения 52,5°С, растворяющейся в этаноле, эфире, воде (40%).

П р и м е р 1. Антиген вируса бешенства получают из мозга зараженных белых мышей вирусом бешенства шт Овечий ГНКИ. полученным из Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов (паспорт от 21.IV.1981 г прилагается) Результаты титрования вируса бешенства шт Овечий ГНКИ до инактивации представлены на табл 1.

Последовательная технология получения антигена

Для приготовления инактивированного антигена вируса бешенства используют следующую методику. Мозг экспериментально зараженных белых мышей штамм Овечий ГНКИ тщательно растирают в ступке пестиком и готовят 10%-ную суспензию на 0 85%00

ю Ј

ю о

ном растворе хлорида натрия. Суспензию экстрагируют в течение 18ч при 4°С, центрифугируют.при 3000 об/мин в течение 15 мин. В надосадочную вируссодержащую жидкость добавляют 0,5% акролеина, если инактивируют при 22°С, в течение 4 часов, и 1% акролеина, если инактивируют при 37°С в течение 30 мин.

П р и м е р 2. Опыты по определению иммунологической активности антигена в зависимости от концентрации акролеина, времени инактивации и температуры. Результаты представлены в табл. 2.

Из таблицы следует, что оптимальная концентрация акролеина, надежно инакти- вирующая вирус бешенства при 22°С в течение 1-4 час, составляет 0.5%, а при 37°С в течение 30 мин - 1%. Титр инактивирован- ного акролеином антигена вируса бешенства в РЭМА составляет 1:3200 {0.5%, 22°С, npc6aNfe4)n 1:6400(1%.37°С, проба № 14).

Из таблицы видно, что при тепловой инактивации антигена активность его в РЭМА и РДСК снижается в 4-8 раз по сравнению с предложенным способом инактивации. Титр вирусного антигена в РЭМА при тепловой инактивации составил 1:800(КСп-2.58).

При инактивации фенолом не обеспечивается полная утрата инфекционности вируса бешенства (пробы 11 и 25), а также снижается активность антигена вируса бешенства в серологических реакциях. Титр антигена в РЭМА составил 1:800 (проба № 26).

Инактивация акролеином антигена вируса бешенства позволяет использовать этот антиген в РДСК, т,к. после инактивации антиген не обладает антикомплементарными свойствами и его активность снижается очень незначительно (пробы с 16 по 20, с 24 по 26 и 31).

0

П р и м е р 3. Опыты по определению безвредности, токсичности акролеина.

Для определения безвредности и токсичности акролеина 10%-ную взвесь мозга от клинически здоровых мышей обрабатывали акролеином в концентрации 4% и вводили интрацеребрально по 0,03 мл 10 белым мышам. Белые мыши в течение наблюдения за ними 25 дней были внешне здоровы, что свидетельствует о безвредности и отсутствии токсичности акролеина.

Технико-экономическая эффективность изобретения заключается в том, что: а) разработан простой и технологичный по

5 исполнению способ приготовления инакти- вированного акролеином антигена вируса бешенства; б) указанный способ дает возможность получить антиген с высоким титром в РЭМА (1:3200-1:6400) в отличие от

0 прототипа (1:800): в) приготовленный антиген неинфекционен и, следовательно, безопасен при использовании его в иммунобиологических тестах; г) приготовленный антиген может быть применен а РЭМА.

5 РДСК и других серологических реакциях.

Формула изобретения Способ получения инактивированного антигена вируса бешенства для постановки

0 серологических реакций, включающий получение суспензий из мозга белых мышей, экспериментально зараженных вирусом бешенства - штамм овечий ГНКИ, инактивиро- вание вируса, отличающийся тем. что,

5 с целью снижения инфекционности антигена вируса и повышения его иммунологической активности, вирусную суспензию инактивируют 0,5%-ным раствором акролеина при 22°С в течение 60 мин или 1 %-ным

0 раствором акролеина при 37°С в течение 30 мин.

Т а б л и ц а 1

Область использования: ветеринария, вирусология Сущность изобретения: предложен способ инактивации вируса бешенства акролеином в концентрациях 0,5% при 22°С в течение 60 мин или 1% при 37°С в течение 30 мин. Предлагаемый способ инактивации позволяет получить антиген вируса бешенства утрачивающий инфекционность и сохраняющий специфическую активность в серологических реакциях энзим-меченых антител и длительного связывания комплемента. 2 табл

Примечание: П- пал; В - выжил. Цифры обозначают количество зараженных вирусом бешенства мышей. Титр инфекционности составил в ЛДзо/О.ОЗ мл -

Таблица 2

Продолжение табл. 2