Ассоциированная вакцина против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек Российский патент 2024 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности, разработке ассоциированной вакцины против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек.

По данным исследования компании Mars Petcare, проведенного в 2021 г., число домашних животных в России с 2017 г. выросло на 12,1 млн., или на 23%, при этом количество кошек достигло 40,8 млн. особей [1]. В настоящее время количество домохозяйств, в которых содержится питомец, продолжает стабильно расти. Несмотря на то, что домашние кошки не являются экономически значимыми животными, моральные страдания владельцев, связанные с их болезнью и гибелью, трудно отрицать. Опыт ветеринарных врачей показывает, что в популяции кошек наиболее распространены такие инфекции, как панлейкопения, калицивироз и вирусный ринотрахеит. По данным Центра Ветеринарии в 2020-2022 гг. калицивироз регистрировали в 38,17% случаях, вирусный ринотрахеит в 35,23% случаев, панлейкопению - в 26,60% случаев инфекционных заболеваний кошек. Также определенную опасность для кошек, находящихся на свободном выгуле, представляет бешенство, очаги которого наблюдаются как в городской среде, так и в сельской местности. Бешенство является неизлечимым, 100%-летальным зоонозом, эпизоотическая ситуация по которому остается стабильно напряженной уже многие годы [2]. В настоящее время разработано и повсеместно применяется значительное количество отечественных и импортных ассоциированных вакцин для кошек, которые выпускает одно предприятие в РФ и множество предприятий за рубежом. Применение ассоциированных вакцин, включающих несколько иммуногенов, оптимальное решение, которое позволяет снизить стрессовые ситуации у вакцинируемых животных, создать напряженный иммунитет в сжатые сроки и уменьшить трудозатраты [3].

Панлейкопения кошек (FPV, feline panleukopenia virus) - высоко-контагиозное вирусное заболевание, характеризующееся лихорадкой, поражением желудочно-кишечного тракта, костного мозга, лейкопенией, обезвоживанием организма и высокой летальностью (до 90%) [4, 5]. Возбудитель панлейкопении кошек принадлежит к семейству Parvoviridae, роду Protoparvovirus, виду Protoparvovirus carnivoran 1 и представляет собой безоболочечный вирус с одноцепочечной ДНК и икосаэдрическим капсидом, [6, 7]. Форма вирионов полиморфная, преобладает сферическая. Внутренняя часть вириона представляет собой закрученную спиралью нить рибонуклеопротеида, который окружен оболочкой с радиально расположенными отростками. Размер вириона колеблется от 115 до 160 нм [4].

Вирус выделяется со всеми секретами и экскретами животного около двух дней после проявления клинических признаков, однако FPV можно обнаружить в фекалиях и моче до 6 месяцев после выздоровления [8]. Факторами передачи могут являться контаминированные предметы, обувь, одежда, поэтому высок риск заражения домашних невакцинированных кошек, даже не имеющих свободного доступа на улицу.

FPV был впервые обнаружен в 1928 году и выделен в культуре клеток в 1964 году. Несколько десятилетий вирус считался генетически стабильным, пока в 1978 г. не был выделен и изучен патогенный для собак возбудитель парвовирусного энтерита 2 типа (CPV-2 - Canine parvovirus-2), представляющий собой эволюционировавший из FPV вирус с 6 аминокислотными заменами в капсиде [9, 10, 11]. Отдельные исследования демонстрируют, что кошки восприимчивы как к классическому варианту FPV, так и к антигенным вариантам CPV-2 с возникновением вспышек инфекции в популяции, что показывает изменчивость данного вируса и потенциальную возможность заражения других видов животных [12]. В настоящее время Международная ветеринарная ассоциация мелких домашних животных (WSAVA - the World Small Animal Veterinary Association) рекомендует вакцинировать против панлейкопении всех кошек независимо от обстоятельств [13].

В настоящее время наиболее известны следующие производственные штаммы вируса панлейкопении кошек, которые применяются для производства средств специфической профилактики против данной болезни:

- Штамм «Шеба» [14]

- Штамм «LR 72» [15];

- Штамм «MW-1» [16];

- Штамм «PLI IV» [17];

- Штамм «Мяу» [4];

- Штамм «Snow Leopard» [18].

Штаммы «PLI IV», «MW-1», «LR 72», «Snow Leopard» входят в составы импортных биопрепаратов против болезней кошек, а штамм «Мяу» в состав отечественной вакцины. Однако, долгое время не изучались молекулярно-генетические свойства полевых штаммов вируса панлейкопении кошек и эффективность против них существующих вакцин на основе известных штаммов. Ежегодный рост заболеваемости панлейкопенией кошек может свидетельствовать о снижении эффективности зарубежных и отечественных вакцин против циркулирующих на данный момент в популяции кошек полевых штаммов. Кроме того, в настоящее время имеются определенные трудности с поставками импортных вакцин, а поступающие на отечественный рынок препараты имеют высокую стоимость.

Калицивироз кошек (калицивирусная инфекция кошек, Feline calicivirus, FCV) - высококонтагиозное заболевание вирусной этиологии, характеризующееся преимущественно язвенным поражением слизистой ротовой полости, верхних дыхательных путей, а в тяжелых случаях артритами и пневмонией [4, 19, 20]. Вирус поражает домашних кошек всех пород и возрастов, а также зоопарковых и диких представителей семейства кошачьих. Согласно некоторым исследованиям, FCV обнаруживали в 18-30% случаев заболеваний, связанных с поражением органов респираторного тракта [21, 22, 23]. Наиболее часто калицивироз кошек протекает с симптомами язвенного стоматита, ринита и конъюнктивита, однако, можно встретить и такие редкие симптомы, как артриты, отеки подкожной клетчатки, пневмонию, некроз слизистых ротовой полости, расстройства желудочно-кишечного тракта, системное поражение внутренних органов [19, 20]. Изучение генетической структуры штаммов FCV, циркулирующих на территории РФ, значительно облегчит разработку средств специфической профилактики, обеспечивающих надежную защиту от данной инфекции.

Возбудитель заболевания принадлежит к виду Feline calicivirus (FCV), семейству Caliciviridae, роду Vesivirus. Вирионы без суперкапсидной оболочки, кубического типа симметрии, состоят из 32 капсомеров, диаметр вирионов составляет 37-40 нм.

В настоящее время известны следующие штаммы вируса калицивироза кошек, которые применяются для диагностики FCV, а также производства вакцин против данного заболевания:

- Штамм «Перс» [24].

-Штамм «Фауна» [25].

- Штамм «F-9» [26].

- Штамм «Ларс» [27].

- Штамм «Эшли» [28].

Генетически штаммы калицивируса крайне разнообразны. Генетическое разнообразие сопровождается антигенным разнообразием, хотя перекрестная реактивность достаточна, чтобы все изоляты считались принадлежащими к одному серотипу. Однако, антигенное разнообразие штаммов значительно снижает эффективность вакцинации, что, согласно некоторым исследованиям, верно в отношении штамма «F-9» (и альтернативного ему «F-255»). Из-за высокой изменчивости калицивируса, данные штаммы в составе вакцин не могут обеспечить эффективную защиту от заражения новыми штаммами. Штамм калицивирусной инфекции «Эшли» является диагностическим запатентован и не применяется для изготовления вакцин [28]. Штамм «Ларс» используется для изготовления отечественной ассоциированной вакцины «Мультифел», однако, литературные данные об изучении молекулярно-генетических свойств данного штамма отсутствуют.

Вирусный ринотрахеит кошек (feline viral rhinotracheitis, FHV-1, FHV, инфекционный ринотрахеит кошек) - контагиозное вирусное заболевание, характеризующееся поражением органов респираторного тракта, конъюнктивитами и кератитами, а также в некоторых случаях пневмонией и гастритом [4, 29].

Возбудителем вирусного ринотрахеита кошек является вирус, принадлежащий к семейству Herpesviridae, роду Varicellovirus, виду Alphaherpesvirus 1 (FHV-1 - Feline alphaherpesvirus-1) [30]. Размер вирионов от 120 до 180 нм, они состоят из ядра, содержащего двухцепочечную ДНК, икосаэдрического капсида, слоя оболочки, окружающего капсид, и липидного бислоя [31]. FHV-1 был впервые выделен в США в 1957 году от кошки c симптомами заболевания верхних дыхательных путей [32].

Вирусный ринотрахеит распространен повсеместно и регистрируется в половине случаев заболеваний верхних дыхательных путей у домашних кошек [32]. К инфекции восприимчивы как взрослые кошки всех пород, так и котята, но у молодых животных, зараженных FHV-1, нередок летальный исход в результате осложнения пневмонией [33]. Также FHV-1 регистрировали у многих диких представителей семейства кошачьих [34]. После острой фазы заболевание часто переходит в латентную форму с пожизненным вирусоносительством [29].

В настоящее время известны следующие штаммы вируса инфекционного ринотрахеита кошек, которые применяются для диагностики FHV-1, а также производства вакцин против данного заболевания:

- Штамм «FVRm» [18].

- Штамм «F-2» [15].

- Штамм «G 2620A» [16].

- Штамм «Гранд» [35].

- Штамм «Лавр» [36].

Все штаммы FHV-1 считаются генетически стабильными, хотя для некоторых штаммов зафиксированы незначительные изменения в аминокислотном составе [4, 32].

Бешенство (RABV) - вирусная зоонозная природно-очаговая инфекционная болезнь, характеризующаяся прогрессирующим поражением центральной нервной системы и в большинстве случаев заканчивающаяся летально, т.к. лечение не разработано [4, 37]. Возбудитель принадлежит к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus и имеет глобальное распространение и долгую историю изучения.

В настоящее время известно огромное количество зарубежных и отечественных штаммов RABV (в т.ч. используемый в данном изобретении штамм «ВНИИЗЖ») с различными свойствами, применяемых для конкретных диагностических и производственных работ:

• Pasteur RIV [38]

• CVS [39]

• Era [40]

• Щелково-51[41] и др.

В настоящее время на рынке представлено огромное разнообразие ассоциированных вакцин с различной валентностью и комбинацией штаммов отечественного и импортного производства против вирусных болезней кошек: панлейкопении, инфекционного ринотрахеита и калицивироза.

Зарубежной биопромышленностью выпускаются следующие вакцины:

• Фелоцел (Felocell) CVR-С, производитель Zoetis LLC 601 W (США) - лиофилизированная масса и раствор для инъекций. Вакцина изготовлена из аттенуированных вирусов ринотрахеита (штамм «FVRm» - 10^5,7 ЭИД₅₀), калицивирусной инфекции (штамм «F-9» - 10^6,2 ЭИД₅₀), панлейкопении кошек (штамм «Snow Leopard» - 10^3,0 ЭИД₅₀), Chlamydia psittacci (штамм Baker) с добавлением гентамицина в качестве консерванта и стабилизатора (в состав которого входят: казеин, желатин, сахароза) [18];

• Пуревакс (Purevax) RCPCh - содержит в своем составе: аттенуированный штамм вируса инфекционного ринотрахеита кошек FHV «F-2», комбинацию двух инактивированных штаммов вируса калицивироза кошек «FCV 431» и «FCV G1», аттенуированный штамм вируса панлейкопении кошек «PLI IV» и аттенуированный штамм хламидиоза кошек 905 [15];

• Лейкофелиген (Leucofeligen) - двухкомпонентная вакцина. Первый компонент содержит аттенуированный вирус панлейкопении (штамм «LR 72» FPV, мин. 10^3.7 - 10⁴ TCID₅₀/мл); калицивирус (штамм «F-9» FCV, мин. 10^4,6 - 10^6,1 TCID₅₀/мл); вирус ринотрахеита (штамм «F-2» мин. 10⁵ - 10^6,6 TCID₅₀/мл). Второй компонент содержит инактивированный вирус лейкемии кошек (очищенный белок р45 антиген > 102 мкг/мл), и вспомогательные компоненты: гидроксид алюминия, очищенный экстракт мыльного дерева и изотонический раствор до 1 мл [17];

• Нобивак Трикет Трио (Nobivac Tricat Trio) - сухая живая вакцина получена из культуральной жидкости перевиваемой линии клеток FEF, инфицированных аттенуированными (ослабленными) штаммами вирусов. В
1 мл вакцина содержит 5,2 lg БОЕ единиц вируса ринотрахеита штамма «G 2620A», 4,6 lg БОЕ единиц калицивируса кошек штамма «F-9» и 4,3 lg ТЦД₅₀ единиц вируса панлейкопении кошек штамма «MW-1», а также стабилизаторы: гидролизованный желатин, сорбитол, панкреатический гидролизат казеина и буферный раствор гидрофосфата калия дигидрата [16];

• Нобивак Дукет (Nobivac Ducat) - сухая живая вакцина против ринотрахеита и калицивироза кошек. Вакцина изготовлена из культуральной жидкости перевиваемой линии клеток FEF, инфицированной вирусами ринотрахеита (штамм «G 2620А») и калицивироза (штамм «F-9») кошек, с добавлением стабилизаторов (гидролизованного желатина, сахарозы) и натрия гидрофосфата дигидрата [42];

• Феловакс (Fel-O-Vax) - вакцина содержит инактивированный вирус панлейкопении кошек, два штамма калицивируса кошек, инактивированный вирус ринотрахеита кошек и Chlamydia psittaci. В качестве консервантов содержит тимеросал, неомицин, полимиксин В и амфотерицин В [43];

• Биофел PCH (Biofel PCH) - вакцина для профилактики панлейкопении, калицивирусной, герпесвирусной инфекций кошек. Вакцина изготовлена из инактивированных штаммов вируса панлейкопении (штамм FPV), калицивируса (штамм FCV F), герпесвируса (штамм FITV-1) и вируса бешенства (штамм Vnukovo-32), с добавлением вспомогательных веществ (тиомерсал, масляный адъювант, эмульгаторы: производные сорбита, глицерида, глицерола) 10% [44].

Из российских вакцин на рынке предлагается Мультифел - 4 - вакцина из инактивированных формалином производственных штаммов вирусов панлейкопении, инфекционного ринотрахеита, калицивируса кошек, Chlamydia psittaci и адъюванта в количестве 10% от объема вакцины [45].

Вышеперечисленные вакцины профилактируют панлейкопению, калицивироз, инфекционный ринотрахеит, хламидиоз, но не защищают кошек от бешенства. Большинство отечественных и зарубежных производителей ветпрепаратов имеют в линейке выпускаемой продукции вакцины против бешенства, которые допускается использовать совместно с вышеперечисленными вакцинами, что указано в инструкции по применению. Однако, подобная процедура связана с дополнительными манипуляциями и стрессом для кошек. Оптимальным решением является применение ассоциированных вакцин, содержащих в своем составе несколько иммуногенов, что позволяет снизить трудозатраты и уровень стресса для животных. Такие вакцины представлены на зарубежном рынке и являются наиболее близкими предполагаемому изобретению по совокупности существенных признаков:

• Квадрикат (Qadricat) - вакцина против панлейкопении, респираторных вирозов и бешенства кошек состоит из двух компонентов, которые смешиваются непосредственно при применении:

- лиофилизированной вакцины «Рабиффа-Фелиниффа», представляющей собой смесь аттенуированного вируса панлейкопении кошачьих с инактивированным вирусом бешенства - это сухая однородная масса белого цвета в виде таблетки;

- жидкой вакцины «Корифелин», представляющей собой масляный раствор гликопротеиновой фракции кошачьего герпесвируса с очищенным антигеном кошачьего калицивируса. По внешнему виду это маслянистая жидкость молочно-белого цвета [46].

• Биофел PCHR (Biofel PCHR) - вакцина для профилактики панлейкопении, калицивирусной, герпесвирусной инфекций и бешенства кошек. Вакцина изготовлена из инактивированных штаммов вируса панлейкопении (штамм FPV), калицивируса (штамм FCV F), герпесвируса (штамм FITV-1) и вируса бешенства (штамм Vnukovo-32), с добавлением вспомогательных веществ (тиомерсал, масляный адъювант, эмульгаторы: производные сорбита, глицерида, глицерола) 10% [47].

Существенным недостатком вышеуказанных иммунобиологических препаратов является их высокая стоимость, а также то, что они созданы на основе производственных штаммов вирусов, полученных за рубежом и длительное время не актуализированных. Также представленные импортные комбинированные поливалентные ассоциированные вакцины (Пуревакс, Нобивак) содержат в своем составе живые аттенуированные вирусы. Их использование приводит к выделению вирусных частиц животными в течение некоторого времени, что может привести к заражению других животных, бессимптомному вирусоносительству и, возможно, возобновлению патогенных свойств ослабленных штаммов вирусов.

Поэтому проблема получения высокоэффективной ассоциированной вакцины против основных возбудителей вирусных болезней кошек и бешенства остается актуальной и основным направлением исследований по созданию искомого препарата.

В связи с этим задачей изобретения является создание безопасной и эффективной вакцины против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства, содержащей сбалансированные в антигенном и иммуногенном отношении вирусные антигены, обеспечивающие формирование устойчивого иммунитета по отношению к вирусу панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек.

Отечественная ассоциированная вакцина против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек в РФ не зарегистрирована. По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, в частности, состав компонентов - штаммы микроорганизмов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Технический результат изобретения заключается в расширении арсенала ассоциированных вакцин, использующихся для профилактики панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства, в получении стабильной вакцины, повышении антигенной и иммуногенной активности вакцины, а также в усилении напряженности иммунитета у вакцинированных животных за счет получения компонентов вакцины с полным спектром антигенов.

Технический результат изобретения достигается путем использования в составе вакцины новых производственных штаммов вируса панлейкопении, двух штаммов вируса калицивироза, штамма вирусного ринотрахеита кошек, штамма бешенства с высокой антигенной и иммуногенной активностью, и образования синергетической композиции поливалентной ассоциированной вакцины при объединении антигенов вирусов новых производственных штаммов.

Технический результат изобретения также достигается путем использования в составе вакцины адъюванта, который усиливает воздействие фармацевтической субстанции (антигенов) на иммунную систему вакцинируемых животных, инициируя каскад иммунных реакций и обеспечивая выработку напряженного иммунитета.

Указанный технический результат достигнут созданием ассоциированной вакцины против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек, охарактеризованной нижеуказанной совокупностью признаков.

Сущность изобретения заключается в следующем: предлагаемая ассоциированная вакцина против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек содержит в качестве активного вещества смесь из:

• инактивированного очищенного антигенного материала штамма «Шеба» панлейкопении кошек;

• инактивированного очищенного антигенного материала штамма «Перс» вируса калицивироза кошек;

• инактивированного очищенного антигенного материала штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек;

• инактивированного очищенного антигенного материала штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек;

• инактивированного очищенного антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства,

взятых в эффективных количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность в организме кошки после введения ей целевого препарата.

В качестве целевой добавки предлагаемая вакцина содержит адъювант гидроокись алюминия (производство «ВНИИЗЖ»).

В предлагаемой вакцине активное вещество и целевая добавка объединены в соотношении: об. %: 90,0÷10,0.

Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана:

1. Вакцина ассоциированная против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек;

2. Активное вещество в виде смеси из инактивированного очищенного антигенного материала из штамма «Шеба» вируса панлейкопении, семейства Parvoviridae, рода Protoparvovirus, вид Protoparvovirus carnivoran 1, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №455 - деп / 23-5 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ»; из инактивированного очищенного антигенного материала из штамма «Перс» вируса калицивироза кошек, семейства Caliciviridae, рода Vesivirus, вида Feline calicivirus, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №458 - деп / 23-8 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ»; из инактивированного очищенного антигенного материала из штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек, семейства Caliciviridae, рода Vesivirus, вида Feline calicivirus, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №471 - деп / 23-21 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ»; из инактивированного очищенного антигенного материала из штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита семейства Herpesviridae, рода Varicellovirus, вида Alphaherpesvirus 1, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №457 - деп / 23-7 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ; из инактивированного очищенного антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства семейства Rhabdoviridae, рода Lyssavirus, вида Lyssavirus rabies, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: «ВНИИЗЖ» - ДЕП фиксированного вируса бешенства.

3. Целевые добавки.

Существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит смесь из инактивированных очищенных антигенных материалов из штамма «Шеба» вируса панлейкопении, штаммов «Перс» и «Фауна» вируса калицивироза, штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек, штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:

1. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек (FPV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, в эффективном количестве.

2. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек (FPV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой вирусную суспензию с гемагглютинирующей активностью до инактивации не менее 9 log₂ НА, в количестве 18,0 об. %.

3. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Перс» вируса калицивироза кошек (FCV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой суспензию в эффективном количестве.

4. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Перс» вируса калицивироза кошек (FCV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой вирусную суспензию с инфекционной активностью до инактивации не менее 7,75±0,25 lg ТЦД₅₀/см³, в количестве 18, 0 об. %.

5. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек (FCV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой суспензию в эффективном количестве.

6. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек (FCV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой вирусную суспензию с инфекционной активностью до инактивации не менее 7,25±0,25 lg ТЦД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %.

5. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек (FHV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, в эффективном количестве.

6. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек (FHV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой вирусную суспензию с инфекционной активностью до инактивации не менее 6,5±0,25 lg ТЦД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %.

7. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства (RABV), полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, в эффективном количестве.

8. Инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства (RABV), полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой вирусную суспензию с инфекционной активностью до инактивации не менее 7,0 lg ККИД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %.

9. Из целевых добавок вакцина содержит гидроокись алюминия.

10. 3%-ный гель гидроокиси алюминия.

11. Вакцина содержит 3%-ный гель гидроокиси алюминия в количестве не менее 10,0 об. %.

12. Смесь из инактивированных и очищенных антигенных материалов из штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек, из штамма «Перс» вируса калицивироза кошек, из штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек, из штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек, из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства и целевую добавку: адъювант гидроокись алюминия в количестве (об. %):

- Антигенный материал из штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек 18,0 - Антигенный материал из штамма «Перс» вируса калицивироза кошек 18,0 - Антигенный материал из штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек 18,0 - Антигенный материал из штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек 18,0 - Антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства 18,0 - Адъювант 3%-ный гель гидроокиси алюминия 10,00

В результате проведенных исследований авторы определили важнейшие технологические показатели, позволившие создать препарат, в котором отсутствует конкуренция между антигенами, входящими в состав предлагаемой вакцины, а его иммуногенные свойства были сравнимы с таковыми после применения монопрепаратов. Высокий иммунологический эффект в отношении специфических антигенов, входящих в состав вакцины, был достигнут путем получения вирусных компонентов в составе вакцины, обладающих безвредностью, иммуногенностью и антигенной активностью, а также подобран вариант оптимального их соотношения в составе вакцины, обеспечивающих выработку защитного уровня антител, т.е. создание напряженного иммунитета к вирусным болезням у кошек.

Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вирусов панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек, циркулирующих на территории Российской Федерации.

Дополнительный технический результат от использования предлагаемого изобретения достигается за счет того, что для повышения иммуногенности вируссодержащих материалов используют гидроокись алюминия (ГОА) производства «ВНИИЗЖ», что позволяет значительно снизить трудо- и энергозатраты на изготовление вакцины и повысить качество антигенных материалов, а также доступно на территории РФ на данный момент.

Дополнительный технический результат предлагаемого изобретения достигается за счет того, что в состав ассоциированной вакцины входят новые производственные штаммы вируса панлейкопении, вирусного ринотрахеита, два штамма калицивироза кошек и штамм бешенства.

Сущность изобретения отражена на графических материалах:

Фиг. 1 - Дендрограмма, отражает филогенетическое взаимоотношения штаммов FPV «Шеба» с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса панлейкопении кошек. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностях VP₂-гена.

Фиг. 2 - Дендрограмма, отражает филогенетическое взаимоотношения штаммов FCV «Перс» и «Фауна» с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса калицивироза кошек. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностях гена, кодирующего белок VP₂.

Фиг. 3 - Дендрограмма, отражает филогенетическое взаимоотношения штаммов FHV «Лавр» с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса инфекционного ринотрахеита кошек. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностях гена, кодирующего белок гликопротеин E.

Фиг. 4 - Дендрограмма, отражает филогенетическое взаимоотношения штаммов RABV «ВНИИЗЖ» с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса бешенства. Дендрограмма основана на сравнении нуклеотидных последовательностях G-гена кДНК вируса бешенства.

Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:

SEQ ID NO: 1 - Последовательность нуклеотидов VP₂-гена ДНК вируса панлейкопении кошек штамма «Шеба» (Feline panleukopenia Virus).

SEQ ID NO: 2 - Последовательность аминокислот VP₂-белка ДНК вируса панлейкопении кошек штамма «Шеба» (Feline panleukopenia Virus).

SEQ ID NO: 3 - Последовательность нуклеотидов ORF1-гена штамма «Перс» вируса калицивироза кошек (Feline calicivirus).

SEQ ID NO: 4 - Последовательность аминокислот белка, который кодируется ORF1-гена штамма «Перс» вируса калицивироза кошек (Feline calicivirus).

SEQ ID NO: 5 - Последовательность нуклеотидов ORF1-гена штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек (Feline calicivirus).

SEQ ID NO: 6 - Последовательность аминокислот белка, который кодируется ORF1-гена, штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек (Feline calicivirus).

SEQ ID NO: 7 - Последовательность нуклеотидов гена US4 кДНК вируса инфекционного ринотрахеита кошек (Feline alphaherpesvirus-1) штамма «Лавр»;

SEQ ID NO: 8 - Последовательность аминокислот, которые кодируются геном US4 кДНК вируса инфекционного ринотрахеита кошек (Feline alphaherpesvirus-1) штамма «Лавр».

SEQ ID NO: 9 - Последовательность нуклеотидов G-гена вируса бешенства штамма «ВНИИЗЖ» генотипа RabV (Rabies Virus).

SEQ ID NO: 10 - Последовательность аминокислот гликопротеина, который кодируется G-геном вируса бешенства штамма «ВНИИЗЖ» генотипа RabV (Rabies Virus).

Исходный вирус для получения штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек получен из проб патологического материала (тонкий отдел кишечника), полученных от погибшего котенка, содержавшегося в центре животных ВООО ЦЖ «Валента» г. Владимира Владимирской области РФ в 2021 г. Методом предельных разведений вирус был адаптирован к репродукции в перевиваемой культуре клеток почки кошки (КК CRFK).

Штамм «Шеба» вируса панлейкопении кошек депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №455 - деп / 23-5 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Штамм «Шеба» вируса панлейкопении кошек характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки

Вирус панлейкопении кошек обладает морфологическими признаками, характерными для представителей парвовирусов: безоболочечные вирусы с одноцепочечной ДНК и икосаэдрическим капсидом.

Антигенные свойства

Антигенно FPV родственен парвовирусу песцов (BFP), вирусу энтерита норок (MEV) и парвовирусу собак (CPV-2) [4]. Антитела, которые образуются у переболевших животных в сыворотках крови, выявляются в реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

Гено- и хемотаксономические характеристики

FPV представляет собой одноцепочечный ДНК-вирус с геномом объемом 5,1 кб, кодирующим 2 основных гена, неструктурные (NS) и структурные белковые гены. Ген NS кодирует белки NS₁ и NS₂, участвующие в репликации ДНК, сборке капсида и внутриклеточном транспорте, тогда как структурный ген кодирует белки VP₁ и VP₂ вирусного капсида. Вирусный капсид состоит из 60 белковых субъединиц (~10% VP₁ и 90% VP₂), расположенных в икосаэдрической симметрии.

Была проведена генетическая идентификация полученного вируса и сравнительный анализ последовательности кДНК. Использовали обратную транскрипцию и полимеразную цепную реакцию (ОТ-ПЦР). Для идентификации и филогенетического анализа осуществляли секвенирование.

Редактор выравнивания последовательностей BioEdit использовался для анализа необработанных последовательностей. Выравнивания, содержащие полногеномные последовательности, были построены с использованием программы Clustal_W. Эволюционная история была выведена с использованием критерия максимального правдоподобия, основанного на 3 параметрах классической модели Tamura. Дерево было нарисовано в масштабе, с длиной ветвей, измеренной в количестве замен на сайт. Эволюционный анализ был проведен в MEGA7. Выравнивание аминокислотных последовательностей проводили с использованием Clustal X.

Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей VP₂-гена ДНК вируса панлейкопении кошек (FPV) (был взят участок длиной 1752 п.н.). Штамм «Шеба» имеет большое количество нуклеотидных отличий от других заявленных штаммов (степень сходства не более 42%), при этом относится к геногруппе 1 вида Protoparvovirus carnivoran (Фиг. 1).

Биотехнологические характеристики

Штамм «Шеба» вируса панлейкопении кошек репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK), а также в первично-трипсинизированной и субкультуре клеток почки котенка (ПК). Инфицированная вирусом панлейкопении культура клеток (CRFK или ПК) инкубируется в термостате при температуре (37,5±0,5)°С в течение 5 суток. Репродукция вируса в культуре клеток ПК и CRFK не сопровождается специфическим цитопатическим действием. Биологические свойства характеризовали путем определения гемагглютинирующей активности вируса каждого пассажа методом РГА. При культивировании вируса гемагглютинирующая активность штамма «Шеба» составляет не ниже 9 log₂ HA. Исходные характеристики сохраняются при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения).

Устойчивость к внешним факторам

Вирус высокоустойчив к фенолу, эфиру, хлороформу, кислотам, трипсину, 0,2%-ному раствору дезоксихолата натрия, рН 3,0. При температуре 4-25°С сохраняется до 13 месяцев. При температуре 60°С погибает за 60 мин. Хорошо сохраняется в 50%-ном глицерине с pH 7,2. Переносит двукратное размораживание и оттаивание.

Дополнительные признаки и свойства

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Безвреден для кроликов, морских свинок, белых мышей при внутримышечном и подкожном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемой культуре клеток CRFK.

Для получения антигенного материала в культуру клеток CRFK, выращенную в культуральных флаконах, предварительно слив с них ростовую среду, вносят вируссодержащий материал с гемагглютинирующей активностью не ниже 7 log₂ HA. Флаконы помещают на один час в термостат при температуре (37,0±0,5)°С для контакта клеток культуры с вирусом. После этого вносят поддерживающую среду ПСС с добавлением 2% сыворотки крови КРС. Инфицированную культуру инкубируют при (37,0±0,5)°С в течение 5 дней, затем замораживают при минус (45,0±5,0)°С. Стерильный инфицированный монослой дезагрегировал с рабочей поверхности флаконов путем его разморозки при температуре (20,0±2)°С и периодического встряхивания. По окончании разморозки интенсивным встряхиванием остатки монослоя удаляют с рабочей поверхности, затем, соблюдая условия асептики, инфицированную суспензию собирают в общую емкость. Из собранного материала отбирают пробу для контроля. Контроль посевного материала штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек осуществляют по показателю отсутствия контаминации грибами, бактериями и микоплазмами. Контроль контаминации грибами и бактериями посевного материала штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек проводили по ГОСТ 28085 [48]. Контроль контаминации микоплазмами осуществляли в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2997-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15) [49].

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами - штамм «Шеба» не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Контроль гемагглютинирующей активности штамма «Шеба» FPV проводили согласно «Методическим рекомендациям по титрованию возбудителя панлейкопении кошек» [50]. Сущность метода заключается в способности FPV гемагглютинировать эритроциты свиньи. За титр вируса принимали его наибольшее разведение, вызывающее полную агглютинацию эритроцитов. Гемагглютинирующая активность вируса до инактивации составила 9,33±0,57 log₂ НА в РГА.

Для инактивации штамма «Шеба» FPV использовали аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), который добавляли в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,05% с экспозицией 24 часов при температуре (37,0±0,5)°С. По окончании инактивации полученный материал помещали в холодильник при температуре (2-8)°С.

Инактивированный очищенный вируссодержащий материал штамма «Шеба» FPV с гемагглютинирующей активностью не ниже 9 log₂ HA использовали для изготовления вакцины, в количестве 18,0 об. %.

Изолят вируса калицивироза кошек, послуживший источником для получения штамма «Перс» был выделен из патологического материала, полученного от кота, поступившего на лечение в ветеринарную клинику ВООО Центра животных «Валента» г. Владимир, в 2021 г.

Изолят вируса калицивироза кошек, послуживший источником для получения штамма «Фауна» был выделен из патологического материала из проб клинического материала (смывы с ротовой полости), полученного от кошки, поступившей на лечение в ветеринарную клинику «Фауна» г. Вологда Вологодской области РФ.

Для получения штаммов «Перс» и «Фауна» вируса калицивироза кошек, обладающих оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали перевиваемую культуру клеток почки кошки (CRFK). В результате проведения серии последовательных пассажей на данной культуре клеток из ранее выделенных изолятов был получен штамм «Перс» и штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек, имеющих стабильные биотехнологическими свойства и пригодных для использования при проведении лабораторных исследований и изготовления диагностических препаратов и препаратов специфической профилактики данного заболевания. Штаммы адаптированы к перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK), что позволяет в промышленных масштабах получать вирусный материал штамма «Перс» и «Фауна» вируса калицивироза кошек с титрами инфекционной активности от 7,00 до 8,25 lg ТЦД₅₀/см³.

Штаммы «Перс» и «Фауна» вируса калицивироза кошек характеризуются следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки

Штаммы «Перс» и «Фауна» вируса калицивироза кошек относятся к семейству Caliciviridae, роду Vesivirus, виду Feline calicivirus и обладают морфологическими признаками, характерными для представителей калицивирусов: диаметр вирионов составляет 37-40 нм, вирионы без суперкапсидной оболочки, кубического типа симметрии, состоят из 32 капсомеров.

Антигенные свойства

В антигеном и генетическом отношении FCV отличается от калицивируса собак [4]. Все циркулирующие штаммы представляют собой единый серотип. У переболевших кошек в сыворотках крови образуются антитела, выявляемые в реакции нейтрализации (РН). Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой в РН в культуре клеток CRFK.

Гено- и хемотаксономические характеристики

Геном FCV представляет собой 7,7 кб одноцепочечной РНК положительной полярности с тремя открытыми рамками считывания (ORF). ORF1 кодирует неструктурные белки, ORF2 кодирует основной капсидный белок VP₁, а ORF3 кодирует второстепенный капсидный белок VP₂. ORF2 разделен на шесть областей (A-F) и обычно используется для филогенетической дифференцировки изолятов FCV. Геномные области A, B, D и F в значительной степени консервативны, в то время как области C и E более вариабельны [37]. Рекомбинация является распространенным механизмом эволюции FCV. Большинство зарегистрированных событий рекомбинации в геноме FCV происходят в генном участке VP₂, который взяли за основу дифференциации штаммов данного вируса [20].

Проведена генетическая идентификация полученного вируса и сравнительный анализ последовательности кДНК. Использовали обратную транскрипцию и полимеразную цепную реакцию (ОТ-ПЦР). Для идентификации и филогенетического анализа осуществляли секвенирование.

Редактор выравнивания последовательностей BioEdit использовался для анализа необработанных последовательностей. Выравнивания, содержащие полногеномные последовательности, были построены с использованием программы Clustal_W. Эволюционная история была выведена с использованием критерия максимального правдоподобия, основанного на 3 параметрах классической модели Tamura. Дерево было нарисовано в масштабе, с длиной ветвей, измеренной в количестве замен на сайт. Эволюционный анализ был проведен в MEGA7. Выравнивание аминокислотных последовательностей проводили с использованием Clustal X.

Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей ORF1-гена ДНК возбудителя калицивироза кошек (FCV) (был взят участок длиной 5289 п.н.). Штамм «Перс» имеет большое количество нуклеотидных отличий от других заявленных штаммов (степень сходства не более 52%), при этом относится к генотипу I кластеру 1 вида Feline calicivirus (Фиг. 2).

Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей ORF1-гена ДНК возбудителя калицивироза кошек (FCV) (был взят участок длиной 5289 п.н.). Штамм «Фауна» имеет большое количество нуклеотидных отличий от других заявленных штаммов (степень сходства не более 44%), при этом относится к генотипу II вида Feline calicivirus (Фиг. 2).

Биотехнологические характеристики

Штаммы «Перс» и «Фауна» вируса калицивироза кошек репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK). Репродукция вируса в культуре клеток CRFK сопровождается специфическим цитопатическим действием, приводящим к округлению клеток и деструкции монослоя через 24-48 ч культивирования. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой культуре клеток CRFK. При культивировании вирус штамма «Перс» накапливается в титре не менее 7,75±0,25 lg ТЦД₅₀/см³ и сохраняет исходные характеристики при пассировании в течение не менее 5 пассажей (срок наблюдения). При культивировании вирус штамма «Фауна» накапливается в титре не менее 7,25±0,25 lg ТЦД₅₀/см³ и сохраняет исходные характеристики при пассировании в течение не менее 5 пассажей (срок наблюдения).

Устойчивость к внешним факторам

Вирус достаточно устойчив во внешней среде. На поверхностях при температуре (22±2)°С сохраняет активность в течение 24 ч, а при температуре 10°С и ниже - в течение 30 дней. Относительно стабилен в кислой среде при pH 4,0. Практически не чувствителен к эфиру, хлороформу. Чувствителен к формальдегиду, глутаровому альдегиду, хлорсодержащим дезинфицирующим средствам. Переносит двукратное размораживание и оттаивание.

Дополнительные признаки и свойства

Патогенность - патогенны для естественно-восприимчивых животных.

Вирулентность - вирулентны для естественно-восприимчивых животных при интраназальном заражении.

Безвредны для кроликов и белых мышей при внутримышечном и подкожном заражении.

Стабильность - сохраняют исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемой культуре клеток CRFK.

Для получения антигенного материала в культуру клеток CRFK, выращенную в культуральных флаконах, предварительно слив с них ростовую среду, вносили вируссодержащий материал в дозе 0,001 ТЦД₅₀/кл. Флаконы помещали на один час в термостат при температуре (37,0±0,5)°С для контакта клеток культуры с вирусом. После этого вносили поддерживающую среду ПСС с добавлением 2% сыворотки крови КРС. Инфицированную культуру инкубировали при (37,0±0,5)°С до появления ЦПД вируса. При поражении площади монослоя не менее 80% культуральные флаконы подвергали замораживанию при температуре минус (45,0±0,5)°С. Стерильный инфицированный монослой дезагрегировали с рабочей поверхности флаконов путем его разморозки при температуре (20±2)°С и периодического встряхивания. По окончании разморозки интенсивным встряхиванием остатки монослоя удаляли с рабочей поверхности, затем соблюдая условия асептики инфицированную суспензию собирали в общую емкость. Из собранного материала отбирали пробу для контроля. Контроль контаминации грибами и бактериями посевного материала штаммов «Перс» и «Фауна» вируса калицивироза кошек проводили по ГОСТ 28085 [48]. Контроль контаминации микоплазмами осуществляли в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2997-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15) [49].

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами - штаммы «Перс» и «Фауна» не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Контроль инфекционной активности штаммов «Перс» и «Фауна» FCV проводили согласно «Методическим рекомендациям по титрованию вируса калицивироза микрометодом» [51]. Контроль инфекционной активности проводили в перевиваемой культуре клеток CRFK путем определения титра биологической активности штамма «Перс». Сущность титрования основана на определении цитопатогенного действия (ЦПД) вируса, которое проявлялось в культуре клеток CRFK через 48-72 ч. Титром вируса считают последнее его разведение, вызывающее 50% эффект, который рассчитывают по формуле Кербера. Инфекционная активность вируса до инактивации составила 8,33±0,57 lg ТЦД₅₀/см³ и 8,05±0,46 lg ТЦД₅₀/см³ соответственно.

Для инактивации штаммов «Перс» и «Фауна» FCV использовали аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), который добавляли в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,05% с экспозицией 24 часов при температуре (37,0±0,5)°С. По окончании инактивации полученный материал помещали в холодильник при температуре (2-8)°С.

Для изготовления ассоциированной вакцины используют инактивированный очищенный антигенный материал из штамма «Перс» FCV, полученный в перевиваемой культуре клеток почки кошки (KK CRFK), с активностью 8,33±0,57 lg ТЦД₅₀/см³ в количестве 18,0 об. %.

Для изготовления ассоциированной вакцины используют инактивированный очищенный антигенный материал из штамма «Фауна» FCV, полученный в перевиваемой культуре клеток почки кошки (KK CRFK), с активностью 8,05±0,46 lg ТЦД₅₀/см³ в количестве 18,0 об. %.

Изолят вируса инфекционного ринотрахеита кошек, послуживший источником для получения штамма «Лавр», был выделен из патологического материала, полученного от кота, поступившего на лечение в ветеринарную клинику ВООО Центра животных «Валента» г. Владимир, в 2021 г.

Штамм «Лавр» FHV депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ», под регистрационным номером: №457 - деп / 23-7 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ.

Штамм «Лавр» FHV характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки

Штамм «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек относится к семейству Herpesviridae, роду Varicellovirus, виду Alpaherpesvirus 1 и обладает морфологическими признаками, характерными для представителей герпесвирусов: размер вирионов от 120 до 180 нм, они состоят из ядра, содержащего двухцепочечную ДНК, икосаэдрического капсида, слоя оболочки, окружающего капсид, и липидного бислоя, из которого выступают шипы гликопротеина.

Антигенные свойства

Все циркулирующие штаммы представляют собой единый серотип. У переболевших кошек в сыворотках крови образуются антитела, выявляемые в реакции нейтрализации (РН). Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой в РН в культуре клеток CRFK. Инокуляция в организм животного штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек сопровождается образованием вируснейтрализующих антител в крови в титре от 6 log₂ SN₅₀ до 8,00 log₂ SN₅₀ у кроликов.

Гено- и хемотаксономическая характеристики

Геном вируса имеет размер приблизительно 135 800 п.н., который состоит из уникальных длинных (UL) и уникальных коротких (US) последовательностей, обрамленных областями инвертированных повторов, известными как терминальный и инвертированный длинный повтор (TRL, IRL) и инвертированный и терминальный короткий повтор (IRL, TRS), соответственно. Рекомбинация является распространенным механизмом эволюции FHV. Большинство зарегистрированных событий рекомбинации в геноме FHV происходят в различных участках.

Была проведена генетическая идентификация полученного вируса и сравнительный анализ последовательности кДНК. Использовали обратную транскрипцию и полимеразную цепную реакцию (ОТ-ПЦР). Для идентификации и филогенетического анализа осуществляли секвенирование.

Редактор выравнивания последовательностей BioEdit использовался для анализа необработанных последовательностей. Выравнивания, содержащие полногеномные последовательности, были построены с использованием программы Clustal_W. Эволюционная история была выведена с использованием критерия максимального правдоподобия, основанного на 3 параметрах классической модели Tamura. Дерево было нарисовано в масштабе, с длиной ветвей, измеренной в количестве замен на сайт. Эволюционный анализ был проведен в MEGA7. Выравнивание аминокислотных последовательностей проводили с использованием Clustal X.

Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена US4 ДНК возбудителя инфекционного ринотрахеита кошек (был взят участок длиной 1302 п.н.). Штамм «Лавр» имеет большое количество нуклеотидных отличий от других заявленных штаммов (степень сходства не более 48%), при этом относится к генотипу I вида Feline alphaherpesvirus-1 (Фиг. 3).

Биотехнологические характеристики.

Штамм «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK). Репродукция вируса в культуре клеток CRFK сопровождается специфическим цитопатическим действием, приводящим к округлению клеток и деструкции монослоя через 48-72 ч культивирования. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой культуре клеток CRFK. При культивировании вирус штамма «Лавр» накапливается в титре не менее 6,5±0,25 lg ТЦД₅₀/см³ и сохраняет исходные характеристики при пассировании в течение не менее 5 пассажей (срок наблюдения).

Устойчивость к внешним факторам

Вирус довольно устойчив во внешней среде. Чувствителен к сильнокислым и слабощелочным значениям рН, при температуре 56°С инактивируется за 3-4 минуты, при температуре 37°С - за 36 часов, медленно инактивируется в формалине, устойчив к этиловому спирту. Разрушают оболочку вируса стандартные дезинфектанты (гипохлорит, четвертичные аммонийные соединения). Переносит двукратное размораживание и оттаивание.

Дополнительные признаки и свойства

Патогенность - патогенен для естественно-восприимчивых животных.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при интраназальном заражении.

Безвреден для кроликов, морских свинок и белых мышей при внутримышечном и подкожном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемой культуре клеток CRFK.

Для получения антигенного материала в культуру клеток CRFK, выращенную в культуральных флаконах, предварительно слив с них ростовую среду, вносили вируссодержащий материал в дозе 0,001 ТЦД₅₀/кл. Флаконы помещали на один час в термостат при температуре (37,0±0,5)°С для контакта клеток культуры с вирусом. После этого вносили поддерживающую среду ПСС с добавлением 2% сыворотки крови КРС. Инфицированную культуру инкубировали при (37,0±0,5)°С до появления ЦПД вируса. При поражении площади монослоя не менее 80% культуральные флаконы подвергали замораживанию при температуре минус (45,0±0,5)°С. Стерильный инфицированный монослой дезагрегировали с рабочей поверхности флаконов путем его разморозки при температуре (20±2)°С и периодического встряхивания. По окончании разморозки интенсивным встряхиванием остатки монослоя удаляли с рабочей поверхности, затем, соблюдая условия асептики, инфицированную суспензию собирали в общую емкость. Из собранного материала отбирали пробу для контроля. Контроль посевного материала штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек осуществляли по показателю отсутствия контаминации грибами, бактериями и микоплазмами. Контроль контаминации грибами и бактериями посевного материала штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек проводили по ГОСТ 28085 [48]. Контроль контаминации микоплазмами осуществляли в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2997-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15) [49].

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами - штамм «Лавр» не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Контроль инфекционной активности штамма «Лавр» FHV проводили согласно «Методическим рекомендациям по титрованию вируса инфекционного ринотрахеита кошек микрометодом» [52]. Контроль инфекционной активности проводили в перевиваемой культуре клеток CRFK путем определения титра биологической активности штамма «Лавр». Сущность титрования основана на определении цитопатогенного действия (ЦПД) вируса, которое проявлялось в культуре клеток CRFK через 96-120 ч. Титром вируса считают последнее его разведение, вызывающее 50% эффект, который рассчитывают по формуле Кербера. Инфекционная активность вируса до инактивации составила 6,75±0,25 lg ТЦД₅₀/см³.

Для инактивации штамма «Лавр» FHV использовали аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), который добавляли в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,05% с экспозицией 24 часов при температуре (37,0±0,5)°С. По окончании инактивации полученный материал помещают в холодильник при температуре (2-8)°С.

Для изготовления ассоциированной вакцины используют инактивированный очищенный антигенный материал из штамма «Лавр» FHV, репродуцируемого в перевиваемой культуре клеток почки кошки (КК CRFK), с инфекционной активностью 6,75±0,25 lg ТЦД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %.

Изолят вируса бешенства, послуживший источником для получения штамма «ВНИИЗЖ», был получен путем адаптации производственного вакцинного штамма «Щелково-51» вируса бешенства к суспензионной культуре клеток ВНК-21/2.

Штамм «ВНИИЗЖ» вируса бешенства депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ», под регистрационным номером: «ВНИИЗЖ» - ДЕП фиксированного вируса бешенства.

Штамм «ВНИИЗЖ» вируса бешенства (RabV) характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки

Штамм «ВНИИЗЖ» вируса бешенства относится к семейству Rhabdoviridae, подсемейству Alpharhabdovirinae, роду Lyssavirus, виду Lyssavirus rabies и обладает морфологическими признаками, характерными для представителей лиссавирусов: вирионы пулевидной формы, размер 180×80 нм, нуклеокапсид окружен белково-липидной оболочкой, от которой отходят шиповидные отростки.

Антигенные свойства

Вирион вируса бешенства штамма «ВНИИЗЖ» содержит 2 основных антигена: гликопротеин (G-белок) вирусной оболочки и внутренний нуклеопротеин (N-белок) вириона. G-белок индуцирует формирование вируснейтрализующих антител и определяет развитие гуморального иммунитета у животных против вируса бешенства.

Штамм «ВНИИЗЖ» и большинство других штаммов и полевых изолятов вируса бешенства, выделенных на различных континентах, содержат общий нуклеопротеиновый антиген, который обнаруживается с помощью реакции иммунофлуоресценции (РИФ), или методом флуоресцирующих антител (МФА), а также в реакции диффузной преципитации (РДП). Нуклеопротеиновый антиген обладает способностью стимулировать перекрестные реакции между изолятами вируса бешенства. N-белок играет важную роль в формировании клеточного иммунитета, в частности, взаимодействует с Т-хелперами, активирует CD4+ и CD8+ -клетки. Нуклеопротеин способен стимулировать иммунную систему без осуществления внутриклеточного процессинга и сплайсинга, при этом формируется потенциально протективный иммунный ответ на высококонсервативные эпитопы N-белка (позиции 404-418).

Антигенное родство штамма «ВНИИЗЖ» с производственными штаммами «RV-97», «SAD B19», «Щелково-51» вируса бешенства, а также с полевыми изолятами из разных географических групп на территории РФ:
RV 257 Omsk, 24/2010 Tuva, 1634/2008 Saratov (Европейская группа), 1352/2008 Krasnodar, RV 308 Georgia, 18/2005 Krasnodar (Кавказская группа), 33/2005 Bryansk, 552/2010 Kaliningrad (Северо-Европейская группа), 211/2010 Vladimir, 110/2009 NNovgorod, 705/2009 Moscow (Центральная группа), 304c Chita, SG 21 Yakutia, 1410/2008 Komi (Арктическая группа) изучено в реакции нейтрализации. В качестве исходного контрольного штамма при постановке реакции нейтрализации использовали референтный штамм «CVS-27», адаптированный к культуре клеток (ANSES, Nancy, France). Референтной сывороткой служила сыворотка против штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства с титром 2,5 МЕ/см³ (ФГБУ «ВНИИЗЖ»). Изучение антигенного родства (матчинг) в реакции нейтрализации выполняли в соответствии с рекомендациями МЭБ (OIE). Значение коэффициента антигенного родства (r₁) вычисляли по формуле:

При значении r₁>0,30 исследуемые штаммы являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r₁<0,30 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не обеспечит защиту от полевого изолята.

Коэффициенты r₁ для штаммов составили «CVS-27» - 0,41; «RV-97» - 0,65; «SAD B19» - 0,42; «Щелково-51» - 0,71; RV 257 Omsk - 0,40; 24/2010 Tuva - 0,45; 1634/2008 Saratov - 0,51; 1352/2008 Krasnodar - 0,48; RV 308 Georgia - 0,58; 18/2005 Krasnodar - 0,51; 33/2005 Bryansk - 0,39; 552/2010 Kaliningrad - 0,46; 211/2010 Vladimir - 0,65; 110/2009 NNovgorod - 0,62; 705/2009 Moscow - 0,53; 304c Chita - 0,61; SG 21 Yakutia - 0,64; 1410/2008 Komi - 0,62. Таким образом, представленный штамм «ВНИИЗЖ» вируса бешенства показывает перекрестные серологические реакции с представителями первой филогенетической линии генетической группы RabV и позволяет обеспечить защиту от заражения изолятами вирусом бешенства данной группы.

Гено- и хемотаксономическая характеристики

Штамм «ВНИИЗЖ» вируса бешенства является РНК-содержащим несегментированным одноцепочечным спирально негативным вирусом длиной около 12000 н.о. В последовательности закодированы следующие белки: N, P, M, G, L.

Белок G имеет наибольшую молекулярную массу 65-70 кД, представлен гликопротеином. Обладает способностью индуцировать образование вируснейтрализующих антител, антигемагглютининов и создает иммунитет к заражению вирусом бешенства.

Белок N имеет молекулярную массу 57 кД - групповой антиген практически для всех представителей лиссавирусов. Вступает в перекрестные реакции между различными родственными ему вирусами, выявляется при помощи МФА, РСК и РДП N.

NS и L белки являются компонентами транскриптазы, обеспечивают транскрипцию и репликацию. NS также выполняет конформационную роль.

М белок находится вплотную к нуклеокапсиду и является негликолизированным белком вирусной оболочки.

Белки вириона распределены следующим образом: G - 47%, M₁ 8,5%, M₂ 10,5%, рибонуклеопротеид - 34%. «Ядро» вириона представлено 12,5% G-белка, 59,4% белка нуклеокапсида, 12,5% М₁ и 15,6% М₂.

При генетической идентификации полученного вируса и сравнительного анализа последовательности кДНК использовали обратную транскрипцию и полимеразную цепную реакцию (ОТ-ПЦР). Для идентификации и филогенетического анализа осуществляли секвенирование.

Редактор выравнивания последовательностей BioEdit использовался для анализа необработанных последовательностей. Выравнивания, содержащие полногеномные последовательности, были построены с использованием программы Clustal_W. Эволюционная история была выведена с использованием критерия максимального правдоподобия, основанного на 3-параметрической классической модели Tamura. Дерево было нарисовано в масштабе, с длиной ветвей, измеренной в количестве замен на сайт. Эволюционный анализ был проведен в MEGA7. Выравнивание аминокислотных последовательностей проводили с использованием Clustal X. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей G-гена кДНК вируса бешенства (исследовали последовательность кДНК с длиной 1572 н.о. и аминокислотную последовательность, которая ей соответствует размером 524 а.о.) (Фиг. 4).

Биотехнологические характеристики.

Культивируется вирус бешенства в перевиваемой культуре клеток почки сирийского хомячка ВНК-21 с использованием среды Игла в качестве поддерживающей.

Устойчивость к внешним факторам

При низких температурах вирус несколько месяцев сохраняется в замороженном мозге, в гниющем материале остается жизнеспособным в течение 2-3 недель. При температуре +50°С инактивируется через 1 час, при +60°С через 5-10 мин., +70°С - мгновенно. Солнечный свет при 5-6°С обезвреживает его за 5-7 дней. УФ-лучи - 5-10 мин., глицерин при +4°С консервирует до 900 дней. Вирус быстро инактивируется при воздействии дезинфицирующих растворов: формалин (1-5%) - 5 мин., сулема (0,1%) - 2-3 ч., фенол (1%) - 2-3 нед., соляная кислота (3-5%) - 5 мин., эфир - 80-120 ч.

Дополнительные признаки и свойства:

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - низкопатогенен для естественно-восприимчивых животных.

Вирулентность - слабо вирулентен для естественно-восприимчивых животных при внутрибрюшинном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 (почки сирийского хомячка).

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами - штамм «ВНИИЗЖ» не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» RABV используют преимущественно перевиваемую культуру клеток почки сирийского хомячка (КК ВНК-21).

Для инактивации штамма «ВНИИЗЖ» RABV используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), который добавляют в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,05% с экспозицией 24 часов при температуре (37,0±0,5)°С.

Полноту инактивации вируса бешенства определяют методом интрацеребрального введения антигена мышам. Остаточную инфекционность RABV штамм «ВНИИЗЖ» определяют титрованием инактивированной суспензии вируса на белых мышах.

Для изготовления ассоциированной вакцины используют инактивированный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» RABV, репродуцируемого в перевиваемой культуре клеток почки сирийского хомячка (КК ВНК-21), с инфекционной активностью не менее 7,0 lg ККИД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1. Приготовление предлагаемой ассоциированной вакцины

Для приготовления ассоциированной вакцины против панлейкопении, калицивироза и вирусного ринотрахеита и бешенства кошек использовали следующие штаммы вирусов: штамм «Шеба», штамм «Перс», штамм «Фауна», штамм «Лавр», штамм «ВНИИЗЖ».

Технологический процесс состоит из следующих технологических этапов:

• получение вирусных суспензий штаммов «Шеба», «Перс», «Фауна», «Лавр», «ВНИИЗЖ»;

• определение активности каждой суспензии;

• инактивация вируссодержащих жидкостей штаммов «Шеба», «Перс», «Фауна», «Лавр», «ВНИИЗЖ» каждой отдельно;

• объединение полученных инактивированных суспензий вирусов;

• добавление адъюванта к смеси инактивированных вирусов;

• расфасовка готового продукта.

Посевной материал, используемый для изготовления вакцины, получали в перевиваемых культурах клеток.

Для изготовления вакцины ассоциированной против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек использовали культуральный аттенуированный вирус штамма «Шеба»; культуральный вирус штамма «Перс»; культуральный вирус штамма «Фауна»; культуральный вирус штамма «Лавр»; культуральный вирус штамма «ВНИИЗЖ», выращенные в культуральных флаконах.

Предлагаемая вакцина имеет оптимальный компонентный состав, об. %:

1. Антигенный материал из штамма «Шеба» FPV, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток почки кошки KK CRFK, с гемагглютинирующей активностью 9,33±0,57 log₂ HA, в количестве 18,0 об. %.

2. Антигенный материал из штамма «Перс» FCV, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток почки кошки KK CRFK, с инфекционной активностью 8,33±0,57 lg ТЦД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %.

3. Антигенный материал из штамма «Фауна» FCV, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток почки кошки KK CRFK, с инфекционной активностью 8,05±0,46 lg ТЦД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %.

4. Антигенный материал из штамма «Лавр» FHV, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток почки собаки KK CRFK, с инфекционной активностью 6,75±0,25 lg ТЦД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %.

5. Антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» RABV, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток почки сирийского хомячка KK ВНК-21, с инфекционной активностью 7,00±0,44 lg ККИД₅₀/см³, в количестве 18,0 об. %.

6. Адьювант 3%-ный гель гидроокиси алюминия в количестве не менее 10,0 об. %.

Содержимое антигенных материалов в предлагаемой вакцине в указанных выше концентрациях является их эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата от использования изобретения.

Полученная вакцина представляет собой: жидкость оттенков розового цвета с осадком. При встряхивании осадок легко разбивается в гомогенную взвесь.

Содержимое сосудов с инактивированным очищенным антигенным материал из штамма «Шеба» FPV, из штамма «Перс» FCV, из штамма «Фауна» FCV, из штамма «Лавр» FHV, из штамма «ВНИИЗЖ» RABV сливали в отдельные емкости и охлаждали при температуре (2-8)°С, освобождая от клеточного детрита при помощи низкоскоростного центрифугирования. Освобожденная от детрита суспензия должна иметь вид полупрозрачной жидкости оттенков розового цвета.

Затем из емкостей отбирали пробы для контроля вирусного сырья.

Серия вирусной суспензии штамма «Шеба» FPV имела гемагглютинирующую активность 9,33±0,57 log₂ НА;

Серия вирусной суспензии штамма «Перс» FCV имела инфекционную активность 8,33±0,57 lg ТЦД₅₀/см³.

Серия вирусной суспензии штамма «Фауна» FCV имела инфекционную активность не менее 8,05±0,46 lg ТЦД₅₀/см³.

Серия вирусной суспензии штамма «Лавр» FHV имела инфекционную активность не менее 6,5±0,25 lg ТЦД₅₀/см³.

Серия вирусной суспензии штамма «ВНИИЗЖ» RABV имела инфекционную активность 7,00±0,44 lg ККИД₅₀/см³.

Для инактивации вирусной суспензии штаммов использовали аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), который добавляли в каждую очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,05% с экспозицией 24 часов при температуре (37,0±0,5)°С.

По окончании инактивации антигенный материал каждого штамма охлаждали до температуры (2-8)°С и отбирали пробы для определения рН, стерильности и полноты инактивации.

Для нейтрализации АЭЭИ в вирусную суспензию антигенного материала добавляли тиосульфат натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ.

Полученный антигенный материал из штаммов «Шеба», «Фауна» и «Перс», «Лавр», «ВНИИЗЖ» использовали для изготовления ассоциированной вакцины против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек. Для этого инактивированный антигенный материал тщательно смешивали с 3%-ным гелем гидроокиси алюминия в количественном соотношении 18,0 : 18,0 : 18,0 : 18,0 : 18,0 : 10,0 соответственно.

Вакцину контролировали на стабильность, стерильность и антигенную активность.

Стерильность вакцины определяют в соответствии с ГОСТ 28085-89 «Препараты биологические. Методы биологического контроля стерильности». Сущность метода заключается в определении отсутствия роста бактериальной и грибной микрофлоры в посевах из образцов вакцины на питательные среды.

Вакцину контролировали на полноту инактивации (авирулентность), безвредность и фасовали в стерильные флаконы.

Полноту инактивации препарата определяли общеизвестным способом, аналогично определению безвредности.

Вакцина должна быть стерильной, авирулентной и безвредной.

Безвредность и реактогенность вакцины изучали на группе хорьков, кошек и мышей, которым вводили двукратный прививной объем вакцины. Период наблюдения за животными составил 10 суток. У опытных животных угнетенного состояния, снижения аппетита или отказа от корма не наблюдалось. Лишь у одной мыши на 2 день наблюдалось образование незначительной припухлости диаметром до 0,2 см на месте инъекции, которое исчезло на 5 сутки.

По результатам проверки безвредности животные оставались живыми в течение всего срока наблюдения. Наблюдение за животными в течение 10 дней не выявило каких-либо отклонений со стороны общего состояния организма животных, что говорит о безвредности и ареактогенности вакцины (предлагаемого изобретение).

Ассоциированная вакцина (предлагаемое изобретение) стерильна, безвредна и ареактогенна.

Пример 2. Антигенная активность и стабильность ассоциированной вакцины

Антигенную активность вакцины оценивали по результатам вакцинации котят образцами, полученными при определенных интервалах хранения препарата (3 мес., 6 мес., 9 мес. и 12 мес.). Для этого использовали беспородных котят в возрасте 2-3 мес. в количестве 5 голов на каждый установленный интервал времени хранения вакцины.

Каждые 3 месяца вновь создаваемой группе котят вводили вакцину внутримышечно в область бедра однократно в объеме 1,0 см³, которая хранилась 3 мес., 6 мес., 9 мес. и 12 мес. У всех животных отбирали пробы крови до иммунизации, через 21 день после иммунизации для выявления в РТГА антител к вирусу FPV, в РН антител к вирусам FCV, FHV, в РН методом FAVN к RABV (табл. 1). Вакцина, введенная однократно внутримышечно, должна вызывать у животных не менее чем 2-кратный прирост антител в РТГА к вирусу панлейкопении, титр антител к вирусу бешенства RABV в сыворотке крови кошек будет равен или выше 0,5 МЕ/см³ в РН методом FAVN, титр антител в РМН к вирусу калицивироза должен быть не ниже 1:32 (5,0 log₂) и инфекционного ринотрахеита должен быть не ниже 1:16 (3,0 log₂) по отношению к титрам антител до вакцинации. У контрольной группы прироста титра антител не должно быть.

Стабильность вакцины исследовали на протяжении 12 месяцев хранения при температуре от 2°С до 8°С с периодичностью осмотра и проведения исследований каждые 3 месяца. Все отобранные пробы вакцины, каждые 3 месяца исследовали на стерильность по ГОСТ 28085-89 [48] и на отсутствие контаминации микоплазмами в соответствии с требованиями ГФ XIV том 2, ОФС 1.7.2.0031.15 [49].

На всех зачетных интервалах времени при хранении вакцины при температуре от 2°С до 8°С не обнаружили изменений показателей качества препарата: стерильность; полнота инактивации; безвредность и реактогенность; антигенная активность.

Все животные, вакцинированные образцами вакцины, как на момент закладки на хранение, так и образцами после 3, 6, 9 и 12 месяцев хранения при температуре от 2°С до 8°С, через указанный период были иммунны. Уровень специфических антител к вирусу FPV в сыворотках крови котят опытных групп составил в среднем по группе 9,20-9,60 log₂ НА в РТГА, к вирусу FCV 5,80-7,35 log₂ в РН_, к вирусу FHV 5,95-6,25 log₂ в РН, к вирусу бешенства 3,85-4,25 МЕ/см³, что указывает на стабильность вакцины в течение 12 месяцев (табл. 1).

Ассоциированная вакцина (предлагаемое изобретение) безвредна, ареактогенна и стабильна (в течение 12 месяцев - срок наблюдения).

Пример 3. Эффективность вакцинации предлагаемой вакциной

Эффективность ассоциированной вакцины против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек изготовленной так, как описано в примере 1, представлена в таблицах 2-4.

Испытание иммуногенной активности полученного препарата проводили на 15 котятах 3-4 месячного возраста, не вакцинированных от панлейкопении (FPV), калицивироза (FCV), вирусного ринотрахеита (FHV) и бешенства (RABV), а 3 котят оставляли не вакцинированными в качестве контроля.

Всех 15 котят разделили на 3 группы по 5 голов в каждой. На каждой группе испытывали различные схемы применения предлагаемого изобретения.

Котят группы №1 вакцинировали вакциной (предлагаемое изобретение) подкожно двукратно с интервалом в 21 сутки в объеме 1,0 см³.

Котят группы №2 вакцинировали подкожно двукратно с интервалом в 21 сутки. В 12 месячном возрасте котятам провели ревакцинацию. Каждый раз вакцину (предлагаемое изобретение) вводили подкожно в объеме 1,0 см³.

Котятам группы №3 вводили вакцину подкожно однократно в объеме 1,0 см³.

Схемы отбора проб крови от животных для серологических исследований и результаты исследований титров антител по каждому компоненту вакцины представлены в таблицах 2-4. Сыворотки крови животных исследовали в РТГА на присутствие антител к вирусу FPV, в РН на присутствие антител к вирусам FCV, FHV, в РН методом FAVN к вирусу RABV. Величину титра антител считали оценкой напряженности поствакцинального иммунитета против данных вирусов. РН и РТГА ставили по общепринятым методикам.

После вакцинации вакциной против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек, иммунная система животных активно реагировала на антигены, входящие в состав препарата. У животных всех групп наблюдали напряженный иммунный ответ к вышеуказанным вирусам на протяжении всего срока наблюдения. Первое введение вакцины позволяет защитить кошек от вирусов панлейкопении, калицивироза, ринотрахеита и бешенства, исходя из данных, представленных в таблицах 2-4. Однако у котят группы №3 после однократной вакцинации через 6 месяцев наблюдалось снижение уровня антител к вирусам FCV и в среднем по группе составил 3,00-6,40 log₂ в РН; через 9 месяцев наблюдалось снижение уровня антител к вирусу FHV, в среднем по группе составил 3,75 log₂ в РН; через 12 месяцев наблюдалось снижение уровня антител к вирусу FPV, в среднем по группе составил 6,13 log₂ НА в РТГА; через 11 месяцев наблюдалось снижение уровня антител к вирусу бешенства, средний по группе титр составил 2,00±0,50 МЕ/см³ (в РН методом FAVN) (табл. 4).

У котят после двукратной вакцинации группы №1 и ревакцинации группы №2 по группе титр антител к FPV в РТГА составил 8,85±0,65 log₂ и 9,45±0,44 log₂ НА соответственно, титр антител к вирусам FCV в РН у группы №1 составил 6,75±0,56 log₂ и 7,8±0,57 log₂, у группы №2 составил 7,42±0,48 log₂ и 8,25±0,25 log₂, титр антител к вирусу FHV в РН составил 5,70±0,57 log₂ и 6,05±0,11 log₂ соответственно. Титр антител к вирусу бешенства находился на уровне 3,85±0,58 МЕ/см³ и 4,25±0,25 МЕ/см³ у котят группы №1 и №2 соответственно. На протяжении всего срока наблюдения уровень специфических антител к вирусам FPV, FCV, FHV, RABV в сыворотке крови котят группы №1 и №2 оставался на высоком уровне (таб. 2-3).

После ревакцинации в возрасте 12 месяцев животных группы №2 вакциной был установлен прирост антител к FPV, FCV, FHV, RABV. Данные таблицы 3 свидетельствуют о том, что титры антител превышали требуемые минимальные титры ко всем антигенным компонентам вакцины. Титры антител ко всем антигенным компонентам в контрольной группе оставались примерно на одном уровне в течение всего срока наблюдения.

Данные свидетельствует о том, что ассоциированная вакцина (предлагаемое изобретение) индуцирует у вакцинированных котят образование высоких уровней антител к вирусу панлейкопении кошек штамма «Шеба». Максимальный уровень титров антител наблюдали через 21 день после ревакцинации составил 9,45±0,44 log₂ НА.

Данные свидетельствует о том, что ассоциированная вакцина (предлагаемое изобретение) индуцирует у вакцинированных котят образование высоких уровней антител к вирусу калицивироза кошек штамма «Перс». Максимальный уровень титров антител, который наблюдали через 21 сутки после ревакцинации, составил 8,25±0,25 log₂.

Данные свидетельствует о том, что ассоциированная вакцина (предлагаемое изобретение) индуцирует у вакцинированных котят образование высоких уровней антител к вирусу калицивироза кошек штамма «Фауна». Максимальный уровень титров антител наблюдали через 21 сутки после ревакцинации составил 7,42±0,48 log₂.

Данные свидетельствует о том, что ассоциированная вакцина (предлагаемое изобретение) индуцирует у вакцинированных котят образование высоких уровней антител к вирусу инфекционного ринотрахеита кошек штамма «Лавр». Максимальный уровень титров антител наблюдали через 21 сутки после ревакцинации составил 6,05±0,11 log₂.

Данные свидетельствует о том, что ассоциированная вакцина (предлагаемое изобретение) индуцирует у вакцинированных котят образование высоких уровней антител к вирусу бешенства штамма «ВНИИЗЖ». Максимальный уровень титров антител наблюдали через 21 сутки после ревакцинации составил 4,25±0,25 МЕ/см³.

На основании проведенных исследований был сделан вывод о том, что ассоциированная вакцина против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек (предлагаемое изобретение) формирует у иммунизированных животных стойкий иммунный ответ против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек продолжительностью не менее 12 месяцев при введении препарата двукратно с интервалом 21 день и ревакцинацией животных в 12 месячном возрасте.

Пример 4. Применение предлагаемой ассоциированной вакцины для иммунизации кошек

Перед применением флакон с вакциной, содержащей 1 (одну) иммунизирующую дозу, необходимо аккуратно встряхнуть до восстановления однородности.

Вакцину вводили котятам двукратно с интервалом в 21 сутки внутримышечно в область средней трети бедра или подкожно в область лопатки в дозе 1,0 см³ с соблюдением правил асептики.

Вакцина вызывает формирование иммунного ответа у кошек к вирусам панлейкопении, калицивироза, инфекционного ринотрахеита и бешенства через 14 сутки после двукратного введения. Продолжительность иммунитета против вирусов панлейкопении, калицивироза, инфекционного ринотрахеита и бешенства составляет не менее 12 месяцев. По результатам можно сделать вывод, что ассоциированная вакцина против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек (предлагаемое изобретение) не препятствует формированию иммунного ответа к возбудителям панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек. После введения вакцины против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек вырабатывается напряженный иммунитет, способный обеспечить надежную защиту против указанных возбудителей. На этом основании считаем, что компоненты вакцины против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек совместимы между собой.

Таким образом, ассоциированная вакцина против панлейкопении, калицивироза и вирусного ринотрахеита кошек (предлагаемое изобретение) обладает высокой иммуногенной и антигенной активностью в отношении всех 5 антигенных компонентов и безвредна для кошек.

Источники информации

1. Интерфакс. - URL: https://www.interfax.ru/russia/759814 (дата обращения 14.11.2023 г.).

2. Анисина О.В., Пухова Н.М., Богомолова О.А., Конкина С.В., Паршикова А.В., Филимонова А.Д. Анализ эпизоотии бешенства в Центральном федеральном округе России за 2018-2022 годы. Аграрная наука. 2023; (9): 26-31.

3. Мороз Н.В. Разработка и усовершенствование контроля ассоциированных вакцин против болезней плотоядных / Н.В. Мороз // Актуальные проблемы науки в АПК: Мат. научно-практ. конф. - Кострома, 2003. С. 102-103.

4. Алипер Т.И., Непоклонов Е.А., Мухин А.Н. и др. Диагностика и профилактика инфекционных болезней кошек и кошек: руководство для практикующих ветеринарных врачей. Под ред. Т.И. Алипера. М.: ЗооВетКнига; 2017. 300 с. 2.

5. Бердюкова И.В., Руденко П.А. Изучение клинических симптомов при панлейкопении у кошек на территории Донецкой Народной Республики. Ветеринария сегодня. 2020; 2(33): 122-126.

6. Greene C.E. Feline parvovirus infection. In: Greene C.E., editor. Infectious Diseases of the Dog and Cat. 4th ed. Saunders Elsevier; St. Louis, MO, USA: 2012. pp. 80-90.

7. Rehme Т., Hartmann K., Truyen U., Zablotski Y., Bergmann M. Feline Panleukopenia Outbreaks and Risk Factors in Cats in Animal Shelters. Viruses. 2022 Jun 8; 14(6): 1248.

8. Cotmore S.F., Tattersall P. Parvoviral host range and cell entry mechanisms. Adv Virus Res. 2007; 70: 183-232.

9. Mira F., Canuti M., Purpari G., Cannella V. et al.. Molecular Characterization and Evolutionary Analyses of Carnivore Protoparvovirus 1 NS1 Gene. Viruses. 2019 Mar 29; 11(4): 308.

10. Xue H., Hu C., Ma H., Song Y., Zhu K., Fu J., Mu B., Gao X. Isolation of feline panleukopenia virus from Yanji of China and molecular epidemiology from 2021 to 2022. J Vet Sci. 2023 Mar; 24(2): e29.

11. Truyen U., Parrish C.R. Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivo. J Virol. 1992 Sep; 66(9): 5399-408.

12. Truyen U., Addie D., Belák S., Boucraut-Baralon C. et al. Feline panleukopenia. ABCD guidelines on prevention and management. J Feline Med Surg. 2009 Jul; 11(7): 538-46.

13. WSAVA Руководство по вакцинации собак и кошек. - URL: https://wsava.org/ (дата обращения 14.11.23 г.).

14. Патент RU 2806604 С1, C12N 7/00 (2023.08); A61K 39/135 (2023.08). Штамм "Шеба" вируса Carnivore protoparvovirus 1 панлейкопении кошек для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики панлейкопении кошек/ Галкина Т.С., Комарова А.А., Доронин М.И., Климова А.А., Киселев А.М.; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ"). - №2023115804; заявл. 2023.06.15; опубл. 2023.11.01.

15. Лейкофелиген. - URL: https://www.vetlek.ru/directions/?id=1113 (дата обращения 14.11.23 г.).

16. Нобивак Tricat Trio. - URL: https://vetsnab.info/vetpreparaty/nobivak-tricat-trio-s-rastvoritelem-nobivak-diluent/ (дата обращения 14.11.23 г.).

17. Пуревакс RCPCh. - URL: https://www.vetlek.ru/directions/?id=448 (дата обращения 14.11.23 г.).

18. Фелоцел CVR. - URL: https://www.vetlek.ru/articles/?id=250 (дата обращения 14.11.23 г.).

19. Рахманина М.М. Калицивирусная инфекция кошек: биологические свойства возбудителя, эпизоотология, специфические средства и методы профилактики: Автореф. дисс. … д-ра ветеринар. наук. М.; 2005.

20. Hofmann-Lehmann R., Hosie M.J., Hartmann K. et al. Calicivirus Infection in Cats. Viruses. 2022 Apr 29; 14(5): 937.

21. Глотова Т.И., Семенова О.В., Никонова А.А., Глотов А.Г., Вяткин Ю.В., Бондарь А.А. Выделение и филогенетический анализ калицивируса кошек в Сибири. Вопросы вирусологии. 2018; 63(6): 268-274.

22. Hou J., Sánchez-Vizcaíno F., McGahie D. et al. European molecular epidemiology and strain diversity of feline calicivirus. Vet Rec. 2016 Jan 30; 178(5): 114-5.

23. Komina A., Krasnikov N., Kucheruk O., Zhukova E., Yuzhakov A., Gulyukin A. Distribution and genetic diversity of Feline calicivirus in Moscow metropolitan area. J Vet Sci. 2022 Nov;23(6):92.

24. Патент RU 2804639 С1, A61K 39/125 (2023.05); C12N 7/00 (2023.05). Штамм "Перс" Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивирусной инфекции кошек/ Галкина Т.С., Комарова А.А., Доронин М.И.; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ"). - №2023112435; заявл. 2023.05.11; опубл. 2023.10.03.

25. Патент RU 2804623С1, A61K 39/125 (2023.05); C12N 7/00 (2023.05). Штамм "Фауна" вируса вируса калицивироза кошек Feline calicivirus для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивироза кошек/ Галкина Т.С., Комарова А.А., Доронин М.И., Киселев А.М.; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ"). - №2023113417; заявл. 2023.05.23; опубл. 2023.10.03.

26. Вакцина против калицивироза, вирусного ринотрахеита и панлейкопении кошек Нобивак Tricat Trio. - URL: https://www.vidal.ru/veterinar/nobivak-tricat-trio-s-rastvoritelem-nobivak-diluent-29983 (дата обращения 14.11.23 г.).

27. Патент RU 2184567, МПК A61K 39/125(2006.01), C12N 7/00(2006.01). Штамм feline calicivirus, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов / Рахманина М.М., Элизбарашвили Э.И., Уласов В.И.; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ВГНКИ». - №2001113087/13; заявл. 2001.05.16; опубл. 2002.07.10.

28. Патент RU 2628196, МПК A61K 39/125(2006.01), C12N 7/00(2006.01). Штамм Эшли вируса калицивироза кошек для изучения противовирусной активности препаратов в отношении калицивироза кошек / Глотова Т.И., Семенова О.Э., Глотов А.Г.; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ВГНКИ». - №2016121721; заявл. 2016.06.01; опубл. 2017.08.14.

29. Русских В.В. Ринотрахеит кошек: клинико-эпизоотологические аспекты, противовирусная активность препаратов: диссертация ... кандидата ветеринарных наук. Новосибирск, 2009.- 131 с.

30. Sun H., Li Y., Jiao W., Liu C., Liu X. et al. Isolation and identification of feline herpesvirus type 1 from a South China tiger in China. Viruses. 2014 Feb 28;6(3):1004-14.

31. Nasisse MP. 1990. Feline herpesvirus ocular disease. Vet. Clin. North Am. Small Anim. Pract. 20:667-680. doi: 10.1016/s0195-5616(90)50056-x.

32. Magouz A., Lokman M.S., Albrakati A., Elmahallawy E.K. First Report of Isolation and Molecular Characterization of Felid Herpesvirus-1 from Symptomatic Domestic Cats in Egypt. Vet Sci. 2022 Feb 15;9(2):81.

33. Povey R.C. A review of feline viral rhinotracheitis (feline herpesvirus I infection). Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 1979;2(2-3):373-87.

34. Wu Q., Wu H., He S., Liu Y., Chen Y., Qi X., Gu X., Wen Y., Jin X., Jin Y., Tian K. Feline herpesvirus infection and pathology in captive snow leopard. Sci Rep. 2022 Apr 28;12(1):4989.

35. Патент RU 2 215 031 Российская Федерация, МПК A61K 39/245 (2006.01), C12N 7/00(2006.01). Штамм Feline herpesvirus-1, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов / Элизбарашвили Э.И., Рахманина М.М., Уласов В.И.; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ВГНКИ». - №2002107022/13; заявл. 2002.03.20; опубл. 2003.10.27.

36. Патент RU 2806603С1, C12N 1/20 (2023.08); C12N 7/00 (2023.08). Штамм "Лавр" вируса Alphaherpesvirus 1 инфекционного ринотрахеита кошек для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики инфекционного ринотрахеита кошек/ Галкина Т.С., Комарова А.А., Доронин М.И., Элизбарашвили Э.И., Яшина О.Г.; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ"). - №2023117009; заявл. 2023.06.27; опубл. 2023.11.01.

37. Литвиненко, Ю. В. Бешенство. Актуальные вопросы / Ю. В. Литвиненко. - Текст: электронный // Молодой ученый. - 2016. - №22 (126). - С. 104-111. - URL: https://moluch.ru/archive/126/34996/ (дата обращения: 16.11.2023).

38. Dhulipala S, Uversky VN. Looking at the Pathogenesis of the Rabies Lyssavirus Strain Pasteur Vaccins through a Prism of the Disorder-Based Bioinformatics. Biomolecules. 2022 Oct 7;12(10):1436. doi: 10.3390/biom12101436. PMID: 36291645; PMCID: PMC9599798.

39. Xue X, Zheng X, Gai W, Liang H, Ma J, Li L, Wang T, Feng N, Huang G, Zhao Y, Yang S, Xia X. [Sequencing the complete genome of rabies virus CVS-11 strain and constructing its full-length infectious cDNA clone]. Wei Sheng Wu Xue Bao. 2013 Apr 4; 53(4): 409-15. Chinese. PMID: 23858717.

40. Lawson KF, Hertler R, Charlton KM, Campbell JB, Rhodes AJ. Safety and immunogenicity of ERA strain of rabies virus propagated in a BHK-21 cell line. Can J Vet Res. 1989 Oct; 53(4): 438-44. PMID: 2686831; PMCID: PMC1255573.

41. Вакцина антирабическая из штамма «Щелково-51» инактивированная жидкая культуральная (Рабиков). - URL: https://biocombinat.ru/catalog/9/99 (дата обращения 14.11.2023 г.).

42. Вакцина против вирусного ринотрахеита и калицивироза кошек Нобивак Ducat. - URL: https://www.nobivac.ru/нобивак-ducat(дата обращения 14.11.2023 г.).

43. Феловакс-4. - URL: https://www.vidal.ru/veterinar/fel-o-vax-4-28026 (дата обращения 14.11.2023 г.).

44. Вакцина против панлейкопении, калицивирусной инфекции и герпесвирусной инфекции у кошек Биофел PCH. - URL: https://www.bioveta.cz/ru/preparaty/zdorove-zhivotnyh/biofelr-pch.html (дата обращения 14.11.2023 г.).

45. Мультифел-4. - URL: https://vetbio.ru/catalog/pets/vaccine/multifel-4/(дата обращения 14.11.2023 г.).

46. Квадрикат. - URL: https://www.vetlek.ru/directions/?id=313 (дата обращения 14.11.2023 г.).

47. Вакцина против панлейкопении, калицивирусной инфекции, герпесвирусной инфекции и бешенства у кошек Биофел PCHR. - URL: https://www.vidal.ru/veterinar/biofel-pchr-29751 (дата обращения 14.11.2023 г.).

48. ГОСТ 28085-13 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности».

49. ГФ XIV, т. 2, с. 2997-3008 Испытания на присутствие микоплазм (ОФС.1.7.2.0031.15).

50. Методические рекомендации по титрованию возбудителя панлейкопении кошек / А.А. Комарова, Т.С. Галкина А.А. Климова, А.М. Киселев,; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир: 2023 - 20 с.

51. Методические рекомендации по титрованию вируса калицивироза микрометодом / А.М. Киселев, Т.С. Галкина, А.А. Комарова, А.А. Климова, О.Г. Яшина; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир: 2023 - 20 с.

52. Методические рекомендации по титрованию вируса инфекционного ринотрахеита кошек микрометодом/ О.Г. Яшина, Т.С. Галкина, А.А. Комарова; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир: 2023 - 21 с.

Таблица 1

Иммунобиологические свойства вакцины против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства (предлагаемое изобретение),

хранившейся при температуре от 2°С до 8°С

Результаты испытаний Результаты испытаний согласно интервалу времени хранения вакцины, мес. 0 3 6 9 12 Антигенная активность в отношении FPV штамм «Шеба», log₂ 9,60±0,38 9,55±0,27 9,6±0,22 9,20±0,44 9,25±0,25 Антигенная активность в отношении FCV, штамм «Фауна», log₂ 5,80±0,48 5,95±0,27 6,00±0,00 5,90±0,29 5,85±0,34 Антигенная активность в отношении FCV, штамм «Перс», log₂ 7,25±0,39 7,35±0,34 7,10±0,28 7,10±0,22 6,90±0,29 Антигенная активность в отношении FHV штамм «Лавр», log₂ 6,10±0,29 6,05±0,94 6,25±0,50 6,00±0,25 5,95±0,41 Антигенная активность в отношении RABV*, МЕ/см³ (котята) 3,85±0,86 4,20±0,76 4,25±0,56 4,25±0,53 3,95±0,57 Антигенная активность в отношении RABV*, МЕ/см³ (мыши) 3,22±1,67 3,00±1,00 3,02±1,28 3,20±1,18 2,82±1,00

Таблица 2

Продолжительность иммунитета у котят группа №1 после двукратной вакцинации вакциной против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек (предлагаемое изобретение)

(n=3)

Отбор сыворотки крови от котят Среднегрупповая логарифмическая оценка титра и стандартное отклонение FPV
шт. «Шеба»
(по данным РТГА), log₂ FCV
шт. «Фауна»
(по данным РН), log₂ FCV
шт. «Перс»
(по данным РН), log₂ FHV
шт. «Лавр»
(по данным РН), log₂ RABV
шт. «ВНИИЗЖ» (по данным РН методом FAVN), МЕ/см³ До вакцинации <4,0 <1,0 <1,0 <1,0 <1,0 ч/з 21 день 7,00±0,25 6,80±0,28 6,25±0,42 4,00±0,28 3,00±0,28 ч/з 1 мес после 2-й вакцинации 9,45±0,37 6,75±0,25 7,70±0,27 6,00±0,25 3,90±0,52 ч/з 2 мес после 2-й вакцинации 9,45±0,37 7,05±0,48 7,92±0,39 5,92±0,58 4,00±0,47 ч/з 3 мес после 2-й вакцинации 9,40±0,54 7,00±0,25 8,00±0,25 6,00±0,00 4,05±0,48 ч/з 4 мес после 2-й вакцинации 9,35±0,34 7,10±0,28 8,05±0,28 6,05±0,48 4,05±0,48 ч/з 5 мес после 2-й вакцинации 9,40±0,29 7,00±0,25 8,10±0,20 5,97±0,60 4,00±0,50 ч/з 6 мес после 2-й вакцинации 9,35±0,29 7,05±0,39 8,15±0,22 5,97±0,60 4,00±0,00 ч/з 7 мес после 2-й вакцинации 9,20±0,44 7,00±0,00 8,15±0,22 6,00±0,71 4,10±0,28 ч/з 8 мес после 2-й вакцинации 9,25±0,31 6,85±0,39 8,10±0,13 6,00±0,62 4,05±0,54 ч/з 9 мес после 2-й вакцинации 9,20±0,44 6,90±0,52 8,15±0,27 5,95±0,57 4,08±0,52 ч/з 10 мес после 2-й вакцинации 8,95±0,62 6,95±0,48 8,05±0,20 5,95±0,54 3,95±0,48 ч/з 11 мес после 2-й вакцинации 9,00±0,70 6,90±0,52 8,00±0,35 5,75±0,25 3,90±0,48 ч/з 12 мес после 2-й вакцинации 8,85±0,65 6,75±0,56 7,8±0,57 5,70±0,57 3,85±0,58

Таблица 3

Изучение продолжительности иммунитета у котят группы №2 после двукратной вакцинации и ревакцинации в 12 мес. возрасте вакциной против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек (предлагаемое изобретение)

(n=3)

Отбор сыворотки крови Среднегрупповая логарифмическая оценка титра и стандартное отклонение FPV
шт. «Шеба»
(по данным РТГА), log₂ FCV
шт. «Фауна»
(по данным РН), log₂ FCV
шт. «Перс»
(по данным РН), log₂ FHV
шт. «Лавр»
(по данным РН), log₂ RABV
шт. «ВНИИЗЖ» (по данным РН методом FAVN), МЕ/см³ До вакцинации <4,0 <1,0 <1,0 <1,0 <1,0 ч/з 21 день 6,75±0,25 5,00±0,00 6,25±0,50 4,00±0,97 3,55±0,97 ч/з 1 мес после 2-й вакцинации 9,00±0,00 7,25±0,25 8,00±0,25 5,95±0,11 4,05±0,37 ч/з 2 мес после 2-й вакцинации 9,05±0,11 7,10±0,29 8,05±0,28 6,05±0,48 4,15±0,48 ч/з 3 мес после 2-й вакцинации 9,05±0,11 7,10±0,29 8,20±0,58 6,15±0,28 4,05±0,28 ч/з 4 мес после 2-й вакцинации 9,05±0,27 7,15±0,48 8,20±0,32 6,00±0,25 4,00±0,25 ч/з 5 мес после 2-й вакцинации 8,85±0,48 6,95±0,11 8,15±0,22 6,00±0,25 4,00±0,35 ч/з 6 мес после 2-й вакцинации 8,95±0,11 7,05±0,48 8,00±0,50 5,75±0,50 4,05±0,27 ч/з 7 мес после 2-й вакцинации 8,75±0,25 6,25±0,50 7,92±0,13 5,80±0,69 3,75±0,50 Ревакцинация* ч/з 21 день 9,45±0,44 7,42±0,48 8,25±0,25 6,05±0,11 4,25±0,25 Примечание: * ревакцинация котят в возрасте 12 месяцев однократно внутримышечно в той же дозе.

Таблица 4

Изучение продолжительности иммунитета у котят группы №3 после однократной вакцинации вакциной против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенствам кошек (предлагаемое изобретение)

(n=3)

Отбор сыворотки крови от котят после однократной вакцинации Среднегрупповая логарифмическая оценка титра и стандартное отклонение FPV
шт. «Шеба»
(по данным РТГА), log₂ FCV
шт. «Фауна»
(по данным РН), log₂ FCV
шт. «Перс»
(по данным РН), log₂ FHV
шт. «Лавр»
(по данным РН), log₂ RABV
шт. «ВНИИЗЖ» (по данным РН методом FAVN), МЕ/см³ До вакцинации <4,0 <1,0 <1,0 <1,0 <1,0 ч/з 21 день 6,50±0,25 7,25±0,25 7,75±0,50 5,55±0,89 3,75±0,25 ч/з 1 мес 9,00±0,00 7,00±0,50 7,75±0,50 5,95±0,48 4,00±1,19 ч/з 2 мес 9,15±0,22 6,70±0,44 7,10±0,74 5,85±0,57 4,00±0,25 ч/з 3 мес 9,10±0,13 6,70±0,44 7,05±0,71 5,50±0,25 3,85±0,78 ч/з 4 мес 8,95±0,11 6,75±0,50 6,95±0,72 5,55±0,42 3,55±0,42 ч/з 5 мес 8,75±0,25 6,90±0,28 6,95±0,72 5,25±0,43 3,25±0,50 ч/з 6 мес 8,5±0,50 6,40±0,76 6,40±0,76 4,75±0,25 3,25±0,00 ч/з 7 мес 8,25±0,25 5,40±0,42 5,90±0,28 4,50±0,00 3,00±0,00 ч/з 8 мес 7,95±0,11 5,15±0,48 5,90±0,28 4,65±0,60 3,05±0,48 ч/з 9 мес 7,75±0,43 4,15±0,45 5,75±0,25 3,75±0,50 2,75±0,39 ч/з 10 мес 7,75±0,25 3,75±0,50 4,75±0,50 3,65±0,48 2,65±0,48 ч/з 11 мес 7,05±1,12 3,55±0,48 4,25±0,50 3,00±0,00 2,00±0,50 ч/з 12 мес 6,13±0,69 3,00±0,50 4,00±0,28 3,00±0,11 2,05±0,11

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="PCHR.xml"

softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2"

productionDate="2023-11-24">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-11-24</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>557</ApplicantFileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-11-24</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">ФГБУ &quot;Федеральный центр охраны

здоровья животных&quot; (ФГБУ &quot;ВНИИЗЖ&quot;)</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>FGBI &quot;ARRIAH&quot;</ApplicantNameLatin>

<InventorName languageCode="ru">Галкина Татьяна

Сергеевна</InventorName>

<InventorNameLatin>Galkina Tatiana Sergeevna</InventorNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Ассоциированная вакцина против

панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек

«Карнифел PCHR»</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>10</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>1752</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..1752</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q1">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>CPV </INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgtttgattttgcagggcaaaaagactttggtcaacctgctgtcagaa

atgaaagagctacaggatctgggaacgggtctggaggcgggggtggtggtggttctgggggtgtggggat

ttctacgggtactttcaataatcagacggaatttaaatttttggaaaacggatgggtggaaatcacagca

aactcaagcagacttgtacatttaaatatgccagaaagtgaaaattataaaagagtagttgtaaataata

tggataaaactgcagttaaaggaaacatggctttagatgatactcatgtacaamttgtaacaccttggtc

attggttgatgcaaatgcttggggagtttggtttaatccaggagattggcaactaattgttaatactatg

agtgagttgcatttagttagttttgaacaagaaatttttaatgttgttttaaagactgtttcagaatctg

ctactcaaccaccaactaaagtttataataatgatttaactgcatcattgatggttgcattagatagtaa

taatactatgccatttactccagcagctatgagatctgagacattgggtttttatccatggaaaccaacc

ataccaactccatggagatattattttcaatgggatagaacattaataccatctcatactggaactagtg

gcacaccaacaaatgtatattatggtacagatccagatgatgttcaattttatactattgaaaattctgt

gccagtacacttactaagaacaggtgatgaatttgctacaggaacatttttttttgattgtaaaccatgt

agactaacacatacatggcaaacaaatagagcattgggcttaccaccatttctaaattctttgcctcaat

ctgaaggagctactaactttggtgatataggagttcaacaagataaaagacgtggtgtaacacaaatggg

aaatacagactatattactgaagctactattatgagaccagctgaggttggttatagtgcaccatattat

tcttttgaagcatctacacaaggaccatttaaaacacctattgcagcaggacgggggggagcgcaaacag

atgaaaaccaagcagcagatggtgatccaagatatgcatttggtagacaacatggtcaaaaaactactac

aacaggagaaacacccgagagatttacatatatagcacatcaagatacaggaagatatccagaaggagat

tggattcaaaatatcaactttaaccttcctgtaacaaatgataatgtattgctaccaacagatccaattg

gaggtaaaacaggaattaactatactaatatatttaatacttatggtcctttaactgcattaaataatgt

accaccagtttatccaaatggtcaaatttgggataaagaatttgatactgacttaaaaccaagacttcat

gtaaatgcaccatttgtttgtcaaaataattgtcctggtcaattatttgtaaaagttgcgcctaatttaa

caaatgaatatgatcctgatgcatctgctaatatgtcaagaattgtaacttactcagatttttggtggaa

aggtaaattagtttttaaagctaaactaagagcatctcatacttggaatccaattcaacaaatgagtatt

aatgtagataaccaatttaactatgtaccaaataatattggagctatgaaaattgtatatgaaaaatctc

aactagcacctagaaaattatat</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="2">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>584</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..584</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>CPV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>MFDFAGQKDFGQPAVRNERATGSGNGSGGGGGGGSGGVGISTGTFNNQT

EFKFLENGWVEITANSSRLVHLNMPESENYKRVVVNNMDKTAVKGNMALDDTHVQXVTPWSLVDANAWGV

WFNPGDWQLIVNTMSELHLVSFEQEIFNVVLKTVSESATQPPTKVYNNDLTASLMVALDSNNTMPFTPAA

MRSETLGFYPWKPTIPTPWRYYFQWDRTLIPSHTGTSGTPTNVYYGTDPDDVQFYTIENSVPVHLLRTGD

EFATGTFFFDCKPCRLTHTWQTNRALGLPPFLNSLPQSEGATNFGDIGVQQDKRRGVTQMGNTDYITEAT

IMRPAEVGYSAPYYSFEASTQGPFKTPIAAGRGGAQTDENQAADGDPRYAFGRQHGQKTTTTGETPERFT

YIAHQDTGRYPEGDWIQNINFNLPVTNDNVLLPTDPIGGKTGINYTNIFNTYGPLTALNNVPPVYPNGQI

WDKEFDTDLKPRLHVNAPFVCQNNCPGQLFVKVAPNLTNEYDPDASANMSRIVTYSDFWWKGKLVFKAKL

RASHTWNPIQQMSINVDNQFNYVPNNIGAMKIVYEKSQLAPRKLY</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="3">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>5289</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..5289</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q4">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FCV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgttttttactggggggggagtgcttaaaactcacagtgtccgaaagg

actttgtgcactctgtcaagttaacacttgcacggaggcgcgatcttcagtatatttataacaagctctc

acgcactatacgtgctgaggcttgcccttcttgtgctagttacgacgtatgtcctaactgcacctctggt

gacgtcccggatgacgggtcttcgacaatgtcgattccatcatgggaggatgtcacaaagtcttcaacct

actctctcctgctctctgaggacacctccgacgagttatgccctgaggacttggttaatgtggctgctca

tatccgtaaggcgctatccactcagtcccacccggctaatgctgaaatgtgcaaagaacagctcactttc

ttattagtcatggctgaggcgatgctgccccaacgatcccgagcgtcaatcccactgcaccaacaacaca

cggctgcacggttggaatggagggagaaattcttctctaaacctcttgactttctccttgaaagagttgg

tgtgtcaaaagatattctccaaactactgcgatttggaaaattatcttggaaaaagcatgctattgtaaa

tcctatggagagcagtggttcactgctgccaaacaaaagttaagggaaatgaaaaactttgagagtgata

cgctaaaacctcttattggtggatttatagatggtctacggttcttgaccgtggacaacccaaacccgat

gggtttcctcccaaaactcatagggcttgtaaaacccctgaatttggcgatgattattgataatcatgaa

aacacaatatctggctggatcatcacattaaccgcaataatggagctatacaacatcaccgaatgcacca

tagatattataacatcagtcattacggctttctatgataaaattggcaaggcaaccaaattttacagttg

tgttaaggcgctgttcactggatttagatctgaggacgtagcgaattccttttggtacatggcagcagcg

attctatgttacctgatcactgggttaatcccaaacaacggcagattttcaaagataaaagcttgcctgg

ccggagcgacaactcttgtatcaggtatagttgccacacaaaagctagctgcaatgttcgcaacatggaa

ctctgagtccattgttaatgagttgtcagcaagaactgttgccctatcagagctaaacaatccaacaaca

acgtctgacacggattcggtagaacgactgctagaattggctaagatcttgcatgaggagatcaagattc

atactctaaaccccatcatgcaatcatacaatccaatcttgagaaatttaatgtcaaccttggacggtgt

tataacatcatgcaacaagaggaaagctattgctcggaagagacaggtgccagtttgttacatattaact

ggcccacctggatgtgggaaaacaaccgcagctcaagcattagctaagaaattgtctgatcaagagccgt

cggtaattaaccttgatgttgatcatcatgacacatatactggaaatgaggtatgtatcattgatgagtt

tgattcgtctgacaaggtagactatgcaaattttgtgattgggatggtaaactctgctcctatggtgtta

aattgtgacatgcttgagaacaagggaaagctcttcacctcaaagtatataattatgacttccaactctg

aaactccagtgaaaccctcttccaagcgcgcaggtgcattctaccgaagggttactatcatcgatgtaac

taacccttttgtggagtcgcacaagcgtgcaaggcctgggacgtctgttcctcgtagctgctataagaaa

aacttctcccatctctcacttgctaaacgaggggccgagtgctggtgcaaggaatacgttcttgacccta

aggggcttcaacaccaaagcatgaaggctccccctcctacctttcttaacattgactctttagctcagac

gatgaagcaagacttcttgctcaagaacatggcttttgaggctgaagatgggtgcgcagaacatcgatat

gggtttgtgtgtcaacaggaagaggttgaaactgttcgcaggctcctcaacgcggttagggcaaggatga

atgctaccttcactgtgtgtgttggacccgagacctcgcactcgattggttgcactgcgcacgtgttaac

tcccaatgagacctttaatggaaagaagtttgttgtgtcacgatgtaacgaagcatcactttctgccctt

gaaggtaactgtgtaaagtcagctttgggcgtgtgtatgtcagataaggatctcactcatttatgccact

tcattaaagggaaaattgtcaatgacagtgttaggttggatgaactacccgccaatcagcatgtggtaac

cgttaattcggtgtttgatttggcctgggctgttcgtcgtcatctcacactggcagggcagtttcaagct

atcagagccgcatatgatgtgcttactgtccccgacaagatccctgcaatgttgcgtcactggatggatg

agacctccttttctgatgaccacgttgtaacacaatttgtaacacctggtggcatagtcatcctggagtc

ttgcggtggtgcacgcatctgggctttaggtcgcaacgtgatccgagcaggaggtgtcaccgcaacccca

accggaggatgtgttaggttaatgggattatctgcgccaaccatgccatggtccgagatctttcgtgagc

tcttctctctcttaggtagaatttggtcatctgtcaaagtatcagccctagtactaactgctcttggaat

gtacgcatctagatttagaccaaaatcggaagcaaaaggaaaaaccaaattgaagattgggacatacagg

ggtcgcggtgtagcgctgactgatgacgagtacgatgagtggcgcgaacacaacgcctccagaaaattgg

atttgtcagtggaggatttcttaatgttgcgccatcgtgccgctctaggagccgacgacaatgatgcagt

aaaattccggtcgtggtggaactccagaaccaaaatggccaatgattatgaggatgtcaccgtaattggc

aaaggtggcgtcaaacatgaaaagatcagaaccaataccctaaaagctgtggatcgtggttatgacgtca

gctttgctgaggaatcaggaccaggcaccaagttccacaagaatgcaattggatctgtcacagatgtttg

tggggagcacaaaggctattgcatccacatgggccacggtgtttacgcatccgtagctcacgtggtgaaa

ggggattcatttttcttgggtgaaaggatttttgatcttaagactaatggtgaattttgctgctttcgca

gcacgaaaattctacctagtgctgcacctttcttttctgggaagcccactcgtgatccgtggggatcccc

cgtggcaactgagtggaagcctaaaatgtacacaacaacctctggaaagattctggggtgctttgcaaca

acttcaactgaaactcacccgggagactgtggcctcccatatattgatgacaacgggagggtgaccggcc

tccacactggctctgggggacccaaaaccccaagtgccaagttggtggtgccatatgtgcatattgacat

gaagactaaatccgtcactgctcaaaagtatgacgtaacaaagcctgatataagttacaaaggcttaatt

tgtaagcaattggatgagattaggattataccaaaaggcacacgtctccatgtctccccagcccacactg

aggattatcaagaatgctcacaccaacccgcatcacttggaagcggggatccccgctgtccaaaatctct

cactgctatagttgttgattctctaaaaccatactgtgagaacgttgagggtcctccacatgatgttttg

cacagagttcaaaagatgcttatcgaccacctttcaggctttgtccctatgaacatttcctcggaaacct

ctatgctctcagctttccacaaactcaatcatgatacttcctgtggaccatacttgggtggcagaaagaa

agatcacatggctaacggtgagccggacaagcagttattggatctcctgtctgcaaaatggaaattggca

acccaaggcatagcactaccacatgagtacacaattgggctaaaggacgagttaaggcccgtggagaagg

ttagtgaagggaagagaaggatgatttggggttgtgatgttggcgtcgctactgtctgtgcagctgcgtt

caagggtgttagcgatgccatcacagcaaaccaccagtacgggcctatacaggttggtatcaacatggat

agccccagcgtcgaagcgctgttccaaaggatcaaaagcgcggccaaggtatttgcggtcgattattcca

aatgggattcgacccaatcgcctcgtgtcagtgcagcttcaattgacatccttcgttacttttccgatcg

ctctccaattgttgactcagcctctaacacactgaagagccctcctgttgcaatctttaatggtgttgct

gtaaaagtgtcctctggcttaccatctggaatgcctcttacctcagtaatcaattcccttaatcattgtc

tgtatgttgggtgtgccattcttcaatccctagaagctaaggccattcccgtcacttggaaccttttctc

aacttttgatatcatgacttacggggatgatggtgtctacatgtttcctattatgtatgcaagtattagt

gaccaaatttttggaaatctttcttcctatggcctgaaaccaactcgggttgacaagtccgttggagcaa

ttgagcctattgatcctgactctgttgttttcttgaagagaacaatcacaaggacacctcaggggataag

gggtttacttgatcgcagctctataataagacaattctattatattaaaggtgagaactccgatgactgg

aagagccccccaaaacatattgacccaacatctcgagggcaacagctttggaatgcctgtctgtacgcta

gccaacatggcttggagtttttcaacaaggtttacaggctggccgagagggctgttgaatatgaagagct

gcactttgaacccccaacatatgcttcggctttggatcattacaacagccagttcaatggcgtggaggcg

cggtctgaccagatcgactcgagtggcatgaccggggggcacaaagatgggttcgggggg</INSDSeq_

sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="4">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>1763</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..1763</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q5">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FCV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>MFFTGGGVLKTHSVRKDFVHSVKLTLARRRDLQYIYNKLSRTIRAEACP

SCASYDVCPNCTSGDVPDDGSSTMSIPSWEDVTKSSTYSLLLSEDTSDELCPEDLVNVAAHIRKALSTQS

HPANAEMCKEQLTFLLVMAEAMLPQRSRASIPLHQQHTAARLEWREKFFSKPLDFLLERVGVSKDILQTT

AIWKIILEKACYCKSYGEQWFTAAKQKLREMKNFESDTLKPLIGGFIDGLRFLTVDNPNPMGFLPKLIGL

VKPLNLAMIIDNHENTISGWIITLTAIMELYNITECTIDIITSVITAFYDKIGKATKFYSCVKALFTGFR

SEDVANSFWYMAAAILCYLITGLIPNNGRFSKIKACLAGATTLVSGIVATQKLAAMFATWNSESIVNELS

ARTVALSELNNPTTTSDTDSVERLLELAKILHEEIKIHTLNPIMQSYNPILRNLMSTLDGVITSCNKRKA

IARKRQVPVCYILTGPPGCGKTTAAQALAKKLSDQEPSVINLDVDHHDTYTGNEVCIIDEFDSSDKVDYA

NFVIGMVNSAPMVLNCDMLENKGKLFTSKYIIMTSNSETPVKPSSKRAGAFYRRVTIIDVTNPFVESHKR

ARPGTSVPRSCYKKNFSHLSLAKRGAECWCKEYVLDPKGLQHQSMKAPPPTFLNIDSLAQTMKQDFLLKN

MAFEAEDGCAEHRYGFVCQQEEVETVRRLLNAVRARMNATFTVCVGPETSHSIGCTAHVLTPNETFNGKK

FVVSRCNEASLSALEGNCVKSALGVCMSDKDLTHLCHFIKGKIVNDSVRLDELPANQHVVTVNSVFDLAW

AVRRHLTLAGQFQAIRAAYDVLTVPDKIPAMLRHWMDETSFSDDHVVTQFVTPGGIVILESCGGARIWAL

GRNVIRAGGVTATPTGGCVRLMGLSAPTMPWSEIFRELFSLLGRIWSSVKVSALVLTALGMYASRFRPKS

EAKGKTKLKIGTYRGRGVALTDDEYDEWREHNASRKLDLSVEDFLMLRHRAALGADDNDAVKFRSWWNSR

TKMANDYEDVTVIGKGGVKHEKIRTNTLKAVDRGYDVSFAEESGPGTKFHKNAIGSVTDVCGEHKGYCIH

MGHGVYASVAHVVKGDSFFLGERIFDLKTNGEFCCFRSTKILPSAAPFFSGKPTRDPWGSPVATEWKPKM

YTTTSGKILGCFATTSTETHPGDCGLPYIDDNGRVTGLHTGSGGPKTPSAKLVVPYVHIDMKTKSVTAQK

YDVTKPDISYKGLICKQLDEIRIIPKGTRLHVSPAHTEDYQECSHQPASLGSGDPRCPKSLTAIVVDSLK

PYCENVEGPPHDVLHRVQKMLIDHLSGFVPMNISSETSMLSAFHKLNHDTSCGPYLGGRKKDHMANGEPD

KQLLDLLSAKWKLATQGIALPHEYTIGLKDELRPVEKVSEGKRRMIWGCDVGVATVCAAAFKGVSDAITA

NHQYGPIQVGINMDSPSVEALFQRIKSAAKVFAVDYSKWDSTQSPRVSAASIDILRYFSDRSPIVDSASN

TLKSPPVAIFNGVAVKVSSGLPSGMPLTSVINSLNHCLYVGCAILQSLEAKAIPVTWNLFSTFDIMTYGD

DGVYMFPIMYASISDQIFGNLSSYGLKPTRVDKSVGAIEPIDPDSVVFLKRTITRTPQGIRGLLDRSSII

RQFYYIKGENSDDWKSPPKHIDPTSRGQQLWNACLYASQHGLEFFNKVYRLAERAVEYEELHFEPPTYAS

ALDHYNSQFNGVEARSDQIDSSGMTGGHKDGFGG</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="5">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>5289</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..5289</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q6">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FCV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgttttttactggggggggagtttttttaacgggaaagggccgaaagg

actttgtgcactctgtcaagttaacacttgcacggaggcgcgatcttcagtatatttataacaagctctc

acgcactatacgtgctgaggcttgcccttcttgtgctagttacgacgtatgtcctaactgcacctctggt

gacgtcccggatgacgggtcttcgacaatgtcgattccatcatgggaggatgtcacaaagtcttcaacct

actctctcctgctctctgaggacacctccgacgagttatgccctgaggacttggttaatgtggctgctca

tatccgtaaggcgctatccactcagtcccacccggctaatgctgaaatgtgcaaagaacagctcactttc

ttattagtcatggctgaggcgatgctgccccaacgatcccgagcgtcaatcccactgcaccaacaacaca

cggctgcacggttggaatggagggagaaattcttctctaaacctcttgactttctccttgaaagagttgg

tgtgtcaaaagatattctccaaactactgcgatttggaaaattatcttggaaaaagcatgctattgtaaa

tcctatggagagcagtggttcactgctgccaaacaaaagttaagggaaatgaaaaactttgagagtgata

cgctaaaacctcttattggtggatttatagatggtctacggttcttgaccgtggacaacccaaacccgat

gggtttcctcccaaaactcatagggcttgtaaaacccctgaatttggcgatgattattgataatcatgaa

aacacaatatctggctggatcatcacattaaccgcaataatggagctatacaacatcaccgaatgcacca

tagatattataacatcagtcattacggctttctatgataaaattggcaaggcaaccaaattttacagttg

tgttaaggcgctgttcactggatttagatctgaggacgtagcgaattccttttggtacatggcagcagcg

attctatgttacctgatcactgggttaatcccaaacaacggcagattttcaaagataaaagcttgcctgg

ccggagcgacaactcttgtatcaggtatagttgccacacaaaagctagctgcaatgttcgcaacatggaa

ctctgagtccattgttaatgagttgtcagcaagaactgttgccctatcagagctaaacaatccaacaaca

acgtctgacacggattcggtagaacgactgctagaattggctaagatcttgcatgaggagatcaagattc

atactctaaaccccatcatgcaatcatacaatccaatcttgagaaatttaatgtcaaccttggacggtgt

tataacatcatgcaacaagaggaaagctattgctcggaagagacaggtgccagtttgttacatattaact

ggcccacctggatgtgggaaaacaaccgcagctcaagcattagctaagaaattgtctgatcaagagccgt

cggtaattaaccttgatgttgatcatcatgacacatatactggaaatgaggtatgtatcattgatgagtt

tgattcgtctgacaaggtagactatgcaaattttgtgattgggatggtaaactctgctcctatggtgtta

aattgtgacatgcttgagaacaagggaaagctcttcacctcaaagtatataattatgacttccaactctg

aaactccagtgaaaccctcttccaagcgcgcaggtgcattctaccgaagggttactatcatcgatgtaac

taacccttttgtggagtcgcacaagcgtgcaaggcctgggacgtctgttcctcgtagctgctataagaaa

aacttctcccatctctcacttgctaaacgaggggccgagtgctggtgcaaggaatacgttcttgacccta

aggggcttcaacaccaaagcatgaaggctccccctcctacctttcttaacattgactctttagctcagac

gatgaagcaagacttcttgctcaagaacatggcttttgaggctgaagatgggtgcgcagaacatcgatat

gggtttgtgtgtcaacaggaagaggttgaaactgttcgcaggctcctcaacgcggttagggcaaggatga

atgctaccttcactgtgtgtgttggacccgagacctcgcactcgattggttgcactgcgcacgtgttaac

tcccaatgagacctttaatggaaagaagtttgttgtgtcacgatgtaacgaagcatcactttctgccctt

gaaggtaactgtgtaaagtcagctttgggcgtgtgtatgtcagataaggatctcactcatttatgccact

tcattaaagggaaaattgtcaatgacagtgttaggttggatgaactacccgccaatcagcatgtggtaac

cgttaattcggtgtttgatttggcctgggctgttcgtcgtcatctcacactggcagggcagtttcaagct

atcagagccgcatatgatgtgcttactgtccccgacaagatccctgcaatgttgcgtcactggatggatg

agacctccttttctgatgaccacgttgtaacacaatttgtaacacctggtggcatagtcatcctggagtc

ttgcggtggtgcacgcatctgggctttaggtcgcaacgtgatccgagcaggaggtgtcaccgcaacccca

accggaggatgtgttaggttaatgggattatctgcgccaaccatgccatggtccgagatctttcgtgagc

tcttctctctcttaggtagaatttggtcatctgtcaaagtatcagccctagtactaactgctcttggaat

gtacgcatctagatttagaccaaaatcggaagcaaaaggaaaaaccaaattgaagattgggacatacagg

ggtcgcggtgtagcgctgactgatgacgagtacgatgagtggcgcgaacacaacgcctccagaaaattgg

atttgtcagtggaggatttcttaatgttgcgccatcgtgccgctctaggagccgacgacaatgatgcagt

aaaattccggtcgtggtggaactccagaaccaaaatggccaatgattatgaggatgtcaccgtaattggc

aaaggtggcgtcaaacatgaaaagatcagaaccaataccctaaaagctgtggatcgtggttatgacgtca

gctttgctgaggaatcaggaccaggcaccaagttccacaagaatgcaattggatctgtcacagatgtttg

tggggagcacaaaggctattgcatccacatgggccacggtgtttacgcatccgtagctcacgtggtgaaa

ggggattcatttttcttgggtgaaaggatttttgatcttaagactaatggtgaattttgctgctttcgca

gcacgaaaattctacctagtgctgcacctttcttttctgggaagcccactcgtgatccgtggggatcccc

cgtggcaactgagtggaagcctaaaatgtacacaacaacctctggaaagattctggggtgctttgcaaca

acttcaactgaaactcacccgggagactgtggcctcccatatattgatgacaacgggagggtgaccggcc

tccacactggctctgggggacccaaaaccccaagtgccaagttggtggtgccatatgtgcatattgacat

gaagactaaatccgtcactgctcaaaagtatgacgtaacaaagcctgatataagttacaaaggcttaatt

tgtaagcaattggatgagattaggattataccaaaaggcacacgtctccatgtctccccagcccacactg

aggattatcaagaatgctcacaccaacccgcatcacttggaagcggggatccccgctgtccaaaatctct

cactgctatagttgttgattctctaaaaccatactgtgagaacgttgagggtcctccacatgatgttttg

cacagagttcaaaagatgcttatcgaccacctttcaggctttgtccctatgaacatttcctcggaaacct

ctatgctctcagctttccacaaactcaatcatgatacttcctgtggaccatacttgggtggcagaaagaa

agatcacatggctaacggtgagccggacaagcagttattggatctcctgtctgcaaaatggaaattggca

acccaaggcatagcactaccacatgagtacacaattgggctaaaggacgagttaaggcccgtggagaagg

ttagtgaagggaagagaaggatgatttggggttgtgatgttggcgtcgctactgtctgtgcagctgcgtt

caagggtgttagcgatgccatcacagcaaaccaccagtacgggcctatacaggttggtatcaacatggat

agccccagcgtcgaagcgctgttccaaaggatcaaaagcgcggccaaggtatttgcggtcgattattcca

aatgggattcgacccaatcgcctcgtgtcagtgcagcttcaattgacatccttcgttacttttccgatcg

ctctccaattgttgactcagcctctaacacactgaagagccctcctgttgcaatctttaatggtgttgct

gtaaaagtgtcctctggcttaccatctggaatgcctcttacctcagtaatcaattcccttaatcattgtc

tgtatgttgggtgtgccattcttcaatccctagaagctaaggccattcccgtcacttggaaccttttctc

aacttttgatatcatgacttacggggatgatggtgtctacatgtttcctattatgtatgcaagtattagt

gaccaaatttttggaaatctttcttcctatggcctgaaaccaactcgggttgacaagtccgttggagcaa

ttgagcctattgatcctgactctgttgttttcttgaagagaacaatcacaaggacacctcaggggataag

gggtttacttgatcgcagctctataataagacaattctattatattaaaggtgagaactccgatgactgg

aagagccccccaaaacatattgacccaacatctcgagggcaacagctttggaatgcctgtctgtacgcta

gccaacatggcttggagtttttcaacaaggtttacaggctggccgagagggctgttgaatatgaagagct

gcactttgaacccccaacatatgcttcggctttggatcattacaacagccagttcaatggcgtggaggcg

cgggggggggggatcccccccagtaaaaaaaccggggggcacaaagatgggttcgggggg</INSDSeq_

sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="6">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>1763</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..1763</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q7">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FCV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>MFFTGGGVFLTGKGRKDFVHSVKLTLARRRDLQYIYNKLSRTIRAEACP

SCASYDVCPNCTSGDVPDDGSSTMSIPSWEDVTKSSTYSLLLSEDTSDELCPEDLVNVAAHIRKALSTQS

HPANAEMCKEQLTFLLVMAEAMLPQRSRASIPLHQQHTAARLEWREKFFSKPLDFLLERVGVSKDILQTT

AIWKIILEKACYCKSYGEQWFTAAKQKLREMKNFESDTLKPLIGGFIDGLRFLTVDNPNPMGFLPKLIGL

VKPLNLAMIIDNHENTISGWIITLTAIMELYNITECTIDIITSVITAFYDKIGKATKFYSCVKALFTGFR

SEDVANSFWYMAAAILCYLITGLIPNNGRFSKIKACLAGATTLVSGIVATQKLAAMFATWNSESIVNELS

ARTVALSELNNPTTTSDTDSVERLLELAKILHEEIKIHTLNPIMQSYNPILRNLMSTLDGVITSCNKRKA

IARKRQVPVCYILTGPPGCGKTTAAQALAKKLSDQEPSVINLDVDHHDTYTGNEVCIIDEFDSSDKVDYA

NFVIGMVNSAPMVLNCDMLENKGKLFTSKYIIMTSNSETPVKPSSKRAGAFYRRVTIIDVTNPFVESHKR

ARPGTSVPRSCYKKNFSHLSLAKRGAECWCKEYVLDPKGLQHQSMKAPPPTFLNIDSLAQTMKQDFLLKN

MAFEAEDGCAEHRYGFVCQQEEVETVRRLLNAVRARMNATFTVCVGPETSHSIGCTAHVLTPNETFNGKK

FVVSRCNEASLSALEGNCVKSALGVCMSDKDLTHLCHFIKGKIVNDSVRLDELPANQHVVTVNSVFDLAW

AVRRHLTLAGQFQAIRAAYDVLTVPDKIPAMLRHWMDETSFSDDHVVTQFVTPGGIVILESCGGARIWAL

GRNVIRAGGVTATPTGGCVRLMGLSAPTMPWSEIFRELFSLLGRIWSSVKVSALVLTALGMYASRFRPKS

EAKGKTKLKIGTYRGRGVALTDDEYDEWREHNASRKLDLSVEDFLMLRHRAALGADDNDAVKFRSWWNSR

TKMANDYEDVTVIGKGGVKHEKIRTNTLKAVDRGYDVSFAEESGPGTKFHKNAIGSVTDVCGEHKGYCIH

MGHGVYASVAHVVKGDSFFLGERIFDLKTNGEFCCFRSTKILPSAAPFFSGKPTRDPWGSPVATEWKPKM

YTTTSGKILGCFATTSTETHPGDCGLPYIDDNGRVTGLHTGSGGPKTPSAKLVVPYVHIDMKTKSVTAQK

YDVTKPDISYKGLICKQLDEIRIIPKGTRLHVSPAHTEDYQECSHQPASLGSGDPRCPKSLTAIVVDSLK

PYCENVEGPPHDVLHRVQKMLIDHLSGFVPMNISSETSMLSAFHKLNHDTSCGPYLGGRKKDHMANGEPD

KQLLDLLSAKWKLATQGIALPHEYTIGLKDELRPVEKVSEGKRRMIWGCDVGVATVCAAAFKGVSDAITA

NHQYGPIQVGINMDSPSVEALFQRIKSAAKVFAVDYSKWDSTQSPRVSAASIDILRYFSDRSPIVDSASN

TLKSPPVAIFNGVAVKVSSGLPSGMPLTSVINSLNHCLYVGCAILQSLEAKAIPVTWNLFSTFDIMTYGD

DGVYMFPIMYASISDQIFGNLSSYGLKPTRVDKSVGAIEPIDPDSVVFLKRTITRTPQGIRGLLDRSSII

RQFYYIKGENSDDWKSPPKHIDPTSRGQQLWNACLYASQHGLEFFNKVYRLAERAVEYEELHFEPPTYAS

ALDHYNSQFNGVEARGGGIPPSKKTGGHKDGFGG</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="7">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>1302</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..1302</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q9">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FHV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgccctttgggatacatattttaatatgcattgcagcattctacataa

ccatcgcggctgctaggaatgccccaatggatctctgttacgccgaccccagagatacatcaccacaacc

cataggacatcctaattataaacaagtgaatatcaacgatccactacccgcaccaaagtggggatatgtt

gaacattccagtggatgtgaattacgtttattggacccgagagttgatgtctcttcaagatcaccagaga

aggcagacgctacgattgcttggacttttgatctcggaacatgtcaaatacctatcgcgtatagagaata

ttataactgtactgggaatttaataccctccccagaaacttgcgaagggtattccgcgacctccatacgc

ttcgaaggtctaaccatctataccttggtaaatataagtctactccttcaaccaggaatattcgattccg

ggagtttcctgtattcatttatatatggtcaaaatagatacaatggacgtattatagttcatgtagaaaa

aaatactgattatccctgcaaaatgtatcatggactcatggctccatttgaccatcatccccaaagccac

gttgaaactccgaatgataagaatcatcgtagagggcggggatgttttcccgaattggtggaacctgttc

tatgggttaatatcagcagtgatcttattggtggtccacctttcgactataatcatgaagatgaggctga

tattgagagtgatgagctcccggaggaggatatacataactactcagattgtcgtgcgactaatatgttt

gttccgagagagcccctcagtcaagttcttggttctcaaagtctactggttggtagtttaggtttccaga

taattactcaaccctggcaactgaagcagaatgaaagttatgatggactaagaaatgcctctcttgaacc

ccgacaccttgactccagtaacgatcgtgatctactagatgaaactgaaatgattggatcgattattacg

actccaccaccaacccatccaaaaggtgtcaatgggggtttcctccaagatctaccaattatcgagccta

cgaccgaaccatgcttagtacatacaaagatcattgggatcggaacagtagtcgttgtatttttgttatt

tattctcatatccctatgtgtttatacttgcgttctacgatcccgcatcggtatggtagatcgcgcctat

gtgaaacaagtacgatttaattccaatccatcatatcaacagttgacaagatactttgggaaa</INSDS

eq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="8">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>434</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..434</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q10">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FHV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>MPFGIHILICIAAFYITIAAARNAPMDLCYADPRDTSPQPIGHPNYKQV

NINDPLPAPKWGYVEHSSGCELRLLDPRVDVSSRSPEKADATIAWTFDLGTCQIPIAYREYYNCTGNLIP

SPETCEGYSATSIRFEGLTIYTLVNISLLLQPGIFDSGSFLYSFIYGQNRYNGRIIVHVEKNTDYPCKMY

HGLMAPFDHHPQSHVETPNDKNHRRGRGCFPELVEPVLWVNISSDLIGGPPFDYNHEDEADIESDELPEE

DIHNYSDCRATNMFVPREPLSQVLGSQSLLVGSLGFQIITQPWQLKQNESYDGLRNASLEPRHLDSSNDR

DLLDETEMIGSIITTPPPTHPKGVNGGFLQDLPIIEPTTEPCLVHTKIIGIGTVVVVFLLFILISLCVYT

CVLRSRIGMVDRAYVKQVRFNSNPSYQQLTRYFGK</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="9">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>1572</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..1572</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q11">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>RabV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgaaaaaacaggctcttttgtttgtaccctttctgggtttttcattgt

gtttcgggaaattccctatttacacgataccggacaaacttggtccctggagcccgattgatatacatca

tctcagttgcccaaacaatttggtcgtggaggatgaaggatgcaccaacctgtcagggttctcctacctg

gaacttaaagttggacacatctctgctataaaggtgaacggattcacttgcacaggcgttgtgacagagg

cagagacctacactaactttgttggttatgtcaccaccacgttcaaaagaaagcatttccgcccgacacc

agatgcatgtagagccgcatacaactggaagacggctggtgatcccagatatgaagagtctttacaaaat

ccgtaccctgactaccagtggctccgaactgtaagaaccaccaaggagtctctcgttatcatatccccaa

gtgcggcagatttggacccatatgacaaatcccttcactcgagggtcttccctagcggaaagtgctcagg

aataacggtgtcctctgtttactgctcaacaaaccacgattacaccatttggatgcctgagaatccgaga

caagggatgtcttgtgacattttcaccaatagtagagggaagagagcatccaaggagagaaagacctgcg

gctttgtggatgaaagaggcctgtataagtctctaagaggctcatgcaaactcaagttatgtggagttct

tggacttagacttatggatggaacatgggtcgcgatgcagacatcaaatgagaccaaatggtgttcccct

gatcagttggttaatctgcacgactttcactcagatgaaattgagcatcttgttgtagaggagttggtca

agaaaagagaggagtgtctggatgcactagagtccatcatgaccaccaagtcagtaagtttcagacgtct

cagtcatttaagaaaacttgtccctgggttcggaaaagcatataccataatcaacaagactttgatggag

gctgaggctcactacaagtcagtccggacttggaatgagatcgtcccctcaaaagggtgtttaagagtcg

aagggaggtgtcatcctcatgtaaacggggtatttttcaatggtataatattagggcctgacggccatgt

tctaatcccagagatgcaatcatccctcctccagcaacatatggagttattggaatcctcagttattccc

ctgatgcacccccttgcagacccgtccacggttttcaaggaaggcgatgaggcggaggactttgtagaag

ttcactttccagatgtgcataaaaaggtctcagaggttgacctgggtctcccgaactggggagagtatgt

attactgagtgcagggaccctgattgccttgatgttgataattttcctaatgatatgtcgtagaagagtc

aatagaccagaatctacgcaacgcagtctcagagggacagagatgaaggtgtcggtcaccccccaaagcg

ggaaattcaaatcttcatgggaatcatataaaagtggggatgaagctagaaaa</INSDSeq_sequenc

e>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="10">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>524</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..524</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q12">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>RabV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>MKKQALLFVPFLGFSLCFGKFPIYTIPDKLGPWSPIDIHHLSCPNNLVV

EDEGCTNLSGFSYLELKVGHISAIKVNGFTCTGVVTEAETYTNFVGYVTTTFKRKHFRPTPDACRAAYNW

KTAGDPRYEESLQNPYPDYQWLRTVRTTKESLVIISPSAADLDPYDKSLHSRVFPSGKCSGITVSSVYCS

TNHDYTIWMPENPRQGMSCDIFTNSRGKRASKERKTCGFVDERGLYKSLRGSCKLKLCGVLGLRLMDGTW

VAMQTSNETKWCSPDQLVNLHDFHSDEIEHLVVEELVKKREECLDALESIMTTKSVSFRRLSHLRKLVPG

FGKAYTIINKTLMEAEAHYKSVRTWNEIVPSKGCLRVEGRCHPHVNGVFFNGIILGPDGHVLIPEMQSSL

LQQHMELLESSVIPLMHPLADPSTVFKEGDEAEDFVEVHFPDVHKKVSEVDLGLPNWGEYVLLSAGTLIA

LMLIIFLMICRRRVNRPESTQRSLRGTEMKVSVTPQSGKFKSSWESYKSGDEARK</INSDSeq_seque

nce>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Изобретение относится к биотехнологии. Описана вакцина, содержащая активное вещество и целевую добавку. В качестве активного вещества вакцина содержит смесь из инактивированного и очищенного антигенного материала из штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек, семейства Parvoviridae, рода Protoparvovirus, вида Carnivore protoparvovirus 1, из инактивированного и очищенного антигенного материала из штамма «Перс» калицивироза кошек, семейства Caliciviridae, рода Vesivirus, вида Feline calicivirus, из инактивированного и очищенного антигенного материала из штамма «Фауна» калицивироза кошек, семейства Caliciviridae, рода Vesivirus, вида Feline calicivirus, из инактивированного и очищенного антигенного материала из штамма «Лавр» вирусного ринотрахеита кошек, семейства Herpesviridae, рода Varicellovirus, вида Alpaherpesvirus 1, из инактивированного и очищенного антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства семейства Rhabdoviridae и в качестве целевых добавок 3%-ный гель гидроокиси алюминия, взятых в эффективном соотношении и в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность каждого антигена в организме кошек после введения целевого препарата. Технический результат изобретения заключается в расширении арсенала ассоциированных вакцин, использующихся для профилактики панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства, в получении стабильной вакцины, повышении антигенной и иммуногенной активности вакцины, а также в усилении напряженности иммунитета у вакцинированных животных за счет получения компонентов вакцины с полным спектром антигенов. 6 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл., 4 пр.

1. Вакцина ассоциированная против панлейкопении, калицивироза, вирусного ринотрахеита и бешенства кошек, содержащая активное вещество и целевую добавку, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит смесь из инактивированных очищенных антигенных материалов: из штамма «Шеба» панлейкопении кошек, семейства Parvoviridae, рода Protoparvovirus, вида Carnivore protoparvovirus 1, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №455 – деп / 23-5 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ»; из штамма «Перс» калицивироза кошек, семейства Caliciviridae, рода Vesivirus, вида Feline calicivirus, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №458 – деп / 23-8 ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ»; из штамма «Фауна» калицивироза кошек, семейства Caliciviridae, рода Vesivirus, вида Feline calicivirus, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №471 – деп / 23-21 ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ»; из штамма «Лавр» инфекционного ринотрахеита кошек, семейства Herpesviridae, рода Varicellovirus, вида Alpaherpesvirus 1, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №457 – деп / 23-7; из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства, семейства Rhabdoviridae, рода Lyssavirus, вида Lyssavirus rabies, коллекция ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: «ВНИИЗЖ» - ДЕП фиксированного вируса бешенства; и в качестве адъюванта 3%-ный гель гидроокиси алюминия, взятых в объёмном соотношении 18,0 : 18,0 : 18,0 : 18,0 : 18,0 : 10,0 и в количествах, обеспечивающих протективную иммуногенную активность каждого антигена в организме кошек.

2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Шеба» панлейкопении кошек (FPV) Carnivore protoparvovirus 1, полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой вирусную суспензию в количестве 18,0 об.%.

3. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Перс» вируса калицивироза кошек (FCV) Feline calicivirus, полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой суспензию в количестве 18,0 об.%.

4. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек (FCV) Feline calicivirus, полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой суспензию в количестве 18,0 об.%.

5. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит инактивированного и очищенного антигенного материала из штамма «Лавр» инфекционного ринотрахеита (FHV) Alphaherpesvirus 1, полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, представляющий собой суспензию в количестве 18,0 об.%.

6. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит инактивированный и очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства, семейства Rhabdoviridae, рода Lyssavirus, вида Lyssavirus rabies, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой суспензию в количестве 18,0 об.%.

7. Вакцина по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что она содержит смесь из инактивированных и очищенных антигенных материалов: материал из штамма «Шеба» панлейкопении кошек (FPV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, с инфекционной активностью 9,33±0,57 log₂ HA; материал из штамма «Перс» вируса калицивироза кошек (FCV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, с инфекционной активностью 8,33±0,57 lg ТЦД₅₀/см³; материал из штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек (FCV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, с инфекционной активностью, определенной до инактивации, 8,05±0,46 lg ТЦД₅₀/см³; материал из штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита (FHV), полученный в перевиваемой культуре клеток CRFK, с инфекционной активностью 6,75±0,25 lg ТЦД₅₀/см³; материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, с инфекционной активностью, определенной до инактивации, 7,00±0,44 lg ККИД₅₀/см³; и адъювант в количестве, об.%:

- Антигенный материал из штамма «Шеба» вируса панлейкопении кошек 18,0 - Антигенный материал из штамма «Перс» вируса калицивироза кошек генотипа I 18,0 - Антигенный материал из штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек, генотипа II 18,0 - Антигенный материал из штамма «Лавр» вируса инфекционного ринотрахеита кошек 18,0 - Антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса бешенства 18,0 - Адъювант 3%-ный гель гидроокиси алюминия 10,0