Способ прогнозирования тяжести течения клещевого энцефалита Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике нейровирус- ных инфекций и может быть использовано при обследовании и лечении больных клещевым энцефалитом (КЭ).

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляются следующим образом.

У больных КЭ на первой и второй неделях заболевания в периферической крови о пред ел я ют соде ржание lgM-антйтел, число Т-лимфоцитов и уровень клеточного иммунитета (ГЗТ). Титр Ig М-антител определяют с помощью метода хроматографии на колонках с ДЕАЕ-целлюлозой.

Количество Т-лимфоцитов определяют методом Е-розеткообразования. Венозную кровь вносят в пробирку с ЭДТД (0,1 мл на 10 мл крови), разводят в 1,5 раза средой 199.

Лимфоциты получают в градиенте плотности фиколл-верографина. После 3-кратного центрифугирования при 1500 об.мин и последовательного отмывания количество клеток подсчитывают в камере Горяева и разводят средой 199 до концентрации 2-10 /мл. Клетки (0,1 мл, смешивают с равным объемом 0,5% взвеси эритроцитов барана, инкубируют на водяной бане при 37°С 10 мин, центрифугируют и помещают в термостат (37°С) на 1 ч. Образовавшиеся розетки фиксируют глютаровым альдегидом и осаждают центрифугированием. Из-осадка клеток готовят мазок на предметном стекле, фиксируют его метанолом, окрашивают метиловым синим и подсчитывают 300 клеток. Определяют процентное содержание розет- кообразующих клеток. Абсолютное количество Т-лимфоцитов рассчитывают, исходя из общего числа лимфоцитов в крови больного,

00

ю VJ

О СО

со

которое принимают за 100. Уровень клеточного иммунитета выражают процентом торможения миграции лейкоцитов (ПТМ) - количественным показателем ГЗТ.

Из венозной крови больного получают культуру лейкоцитов, для чего 5 мл крови помещают в пробирку с гепарином (40 ед/мл) и желатином (0,8 мл 10% ампульного желатина на 10 мл крови), выдерживают в термостате (37°С) 40 мин. Плазму переносят в силикони- рованную или пластиковую пробирку, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. Осадок дважды отмывают раствором Хенкса, а затем питательной средой 199 с 15% лошадиной сыворотки, l-глютамином и антибиотиками. Подсчитывают количество клеток в камере Го- ряева и разводят питательной средой до концентрации (3-4)-108/мл.

В предлагаемом способе использовали вариант постановки реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в агаровой среде. Состав агаровой среды: 0,5 бактоага- ра в среде 199, 15% лошадиной сыворотки без консерванта, антибиотики, 375 мкг/мл бикарбоната натрия, рН 7,2-7,4. Агаровую среду разливают в чашки Петри разового применения, стальным пробойником пробивают лунки. В качестве антигена используют концентрированную очищенную вакцину против КЭ. Антиген в равном по объему соотношении смешивают с суспензией лейкоцитов и после контакта (30 мин, 37°С) вносят в лунки. Контролем служат лейкоциты в смеси с физиологическим раствором. Чашки помещают во влажную камеру с содержанием 5% С02 на 18-24 ч. Мигрирование клетки фиксируют 96° этиловым спиртом 18-24 ч. Результат учитывают с помощью бинокулярного микроскопа МБС-9 и выражают в виде процента торможения миграции лейкоцитов, который определяют по формуле

радиус миграции в присутствии антигена -100

ПТМ 100 - радиус миграции без антигена

Количественные показатели, а также динамика иммунологических тестов, используемых в заявляемом способе, у больных и переболевших различными формами КЭ представлены в таблице.

Таким образом, при обратном титре IgM- антител в крови больного на первой и второй неделях болезни от 4 до б Iog2, количество Т-лимфоцитов от 600 до 900 в 1 мкл и ПТМ, равном 15-20, у больных лихорадочной формой КЭ прогнозируют тяжелое клиническое течение инфекции, реализующееся в виде затяжного субхронического, а в ряде случаев и хронического процесса

У больных с поражением вещества мозга прогностически неблагоприятны в эти же сроки заболевания следующие показатели специфической иммунологической реактив5 ности: обратный титр lgM-антител 6-8 Iog2, количество Т-лимфоцитов 500-600 в 1 мкл, ПТМ 25-30. Длительная персистенция 1дМ- антител (выявление через 1 год и позже) у переболевших КЭ свидетельствует о продолжающейся персистенции вируса, что дает основание прогнозировать опасность развития хронического течения инфекции.

Пример 1. Больной П., 34 года, поступил в клинику с диагнозом клещевой

5 энцефалит менингеальная форма. На третий день болезни обратный титр lgM-анти- тел 8,3 Iog2, количество Т-лимфоцитов 838 в 1 мкл, ПТМ 23,3. Иммунологические показатели на 14 день болезни: обратный титр

0 lgM-антител 6,3 Iog2, количество Т-лимфоцитов 450 в 1 мкл, ПТМ 29,0. Иммунологические показатели явились основанием для прогнозирования тяжелого течения КЭ востром периоде заболевания и возможного

5 затяжного течения инфекции. Прогноз подтвердился. У больного через месяц после острого периода развился синдром Кожев- никовской эпилепсии. Чрез 7,5 мес.от начала заболевания из крови изолирован вирус

0 КЭ. Через 1 и 2 года обратный титр lgM-ан- тител составил 5,3 Iog2, количество Т-лимфо- цитов 1046 в 1 мкл, ПТМ 12,9. При катамнестическом обследовании клинический диагноз: прогредиентное течение КЭ,

5 синдром Кожевниковской эпилепсии.

Пример 2. Больной Л., 36 лет, поступил в клинику с диагнозом лихорадочная форма КЭ. На 4 день болезни обратный титр lgM-антител 6,3 loga, количество Т-лимфоци0 тов 1146 в 1 мкл, ПТМ 27,6. На 14 день обратный титр lgM-антител 5,3 Iog2, количество Т-лимфоцитов 805 в 1 мкл, ПТМ 30,1. Длительный субфебрилитет. Через 1 год от начала заболевания - обратный титр IgM5 антител 4,3 Iog2, число Т-лимфоцитов в 1 мкл 1040, ПТМ 2,1. При катамнестическом клиническом обследовании отмечено сохранение астенического и появление у больного миелитического синдромов.

0 П р и м е р 3. Больной Ш., 15 лет поступил в клинику с диагнозом клещевой энцефалит менингиальная форма. На 5 день болезни обратный титр lgM-натител 8,3 Iog2, количество Т-лимфоцитов 406 в 1 мкл, ПТМ

5 17,9. К концу второй недели болезни обратный титр lgM-антител 7,3 Iog2, количество Т-лимфоцитов 623 в 12 мкл, ПТМ 20,9. Через 1 год от начала заболевания иммунологические показатели составили соответственно:

5,3 Iog2, 1106 мкл, 13,8. Неблагоприятный

прогноз подтвердился. При клиническом обследовании через 1 и 2 года у больного выявлено вялое прогредиентноетечение КЭ с гипертензионным синдромом. Через 8 лет от начала заболевания из крови больного изолирован вирус.

Способ апробирован при клинико-лабо- раторном обследовании 127 больных с раз- личными клиническими формами заболевания, госпитализированных в Омскую областную клиническую больницу.

Положительный эффект - повышение точности прогнозирования тяжести течения КЭ позволяет оптимизировать тактику лечебно-профилактических мероприятий, а следовательно, снизить частоту хронизации процесса и инвалидизации больных.

0

5

Формула изобретения

Способ прогнозирования тяжести течения клещевого энцефалита путем определения количества специфических JgM-антител в крови больного, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно одновременно определяют количество Т-лимфоцитов и уровень гиперсенсибилизации замедленного типа по реакции торможения миграции лейкоцитов, и при значении обратного титра JgM- антител, равном 4-6 Iog2, количестве Т-лимфоцитов 600-900 клеток в 1 мл и при 15-90 % торможении миграции лейкоцитов прогнозируют тяжелое течение клещевого энцефалита.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике нейровирус- ных инфекций и может быть использовано при обследовании и лечении больных клещевым энцефалитом. Цель - повышение точности способа прогнозирования течения клещевого энцефалита. Способ предусматривает применение трех иммунологических тестов: определение JgM-антител, Т-лимфо- цитов и ГЗТ, и при значении обратного титра JgM-антител 4-6 Iog2, Т-лимфоцитов 600-900 клеток в 1 мл и 15-20% торможения миграции лейкоцитов прогнозируют тяжелое течение клещевого энцефалита. Предла- гаемый способ усовершенствует прогнозирование тяжести течения клещевого энцефалита, а, следовательно, оптимизирует тактику лечебно-профилактических мероприятий, снижает частоту хронизации процесса и инвалидизации больных, 1 табл.