СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИ- И ДИФОСФАТОВ АДЕНОЗИНА И ГУЛНОЗИНЛ Советский патент 1966 года по МПК C12P19/32 

Изобретение отноентея к сиоеобам получения три- и дифосфатов аденознна и гуанозина путем фермеитативного культивирования микроорганизмов на питател1 иой ереде.

Известны способы иолучення аденозннтрифосфата и аденозиндифосфата путем фермептативного культивирования большого количества дрожжей в среде, содержаи1ей аденозин и фоефат. Однако выход целевого продукта при этих способах его получения весьма низок.

По предлагаемому епособу, с целью повыojeHiiH выхода целевого продукта, нснользуют микроорганизм штамма Brevibacterium ammoniagenes.

В качеетве иитательной применяют любую среду, содержащую источники углерода (в виде углеводов) и азота, а также неорганические соли.

Пример 1. Культуру Brevibacterium amirioniagenes АТСС № 6872 размножают в среде, содержащей 2% глюкозы, 1% пептона. 1% дрожжевого экстракта, 0,3% NaCl и 30 лгкг/л биотипа в течение 24 час при 30°С. 10% получепной культуры засевают в ферментативную среду следующего состава: глюкоза 100 г, ночевипа 6 г, KHP.Oi 10 г, KoHPOi 10 г, дрожжевой экстракт 10 г, биотип 30 лг/сг, СаСи-2П20 0,1 г. Все компоненты растворяют в воде, доводят до 1 л, а рП фермеитативной среды до стерилизации - до 8 с помоН1ЫО NaOH. Порцнн (Ьермеитативной cpe.U: м ) 20 мл помещают в эрленмейеровскне колбы на 250 мл и используют после стерилизацнн is автоклаве под давлением 1 .и- в геченне 0 мин. После выращивания в течеине 72 (ОС в нее добавляют такое количество аденнна, чтобы его концентрация составляла 2 .MSjMA ферментативной среды. После да, ьнейшего выращивания в течение 24/ос в питательной среде получают 2,98 аденозинтрифосфата и 0,85 мг1мл аденозппдпфосфата. Величину рМ поддерживают между нейтрально и слабокислой после добавле 1 я , а рнмер с помощью NaOn, i составляет 5,8 li 5ыращ 1ва ии. & льтрат, получе мый 1осле ф льтрова П1я этой ферме 1тати 51 ой ж дкост, нрс)ускают через с сильно ОСНОВ1 ОЙ а П О ООбмеЦНОЙ смолой (a p iмер, /х 2/хлор1 ДНО о ). 1Делевс)й 1 родукт получают при разба 5.те 1ной соляной кислотой с иейтрал 1зац 1е1 едким натром, обработкой yгoльнl) . y iaр1)аннем ц охлажден ем.

П р I м е р 2. Используют культуру Brevibacleriu a T moniagenes АТСС Л 6872. Разм оже1 не ведут li среде, содержащей 2% глюко3 з1, 1% пецто а, 1% дрожжевого экстракта, 0,3% XaCl и 30 л(Лг/л , в течение 24 гаг при . 10%. получе юй культуры засева от в ферл е ггативпую среду следующего соCTaijti: глюкоза 100 г, мочевина 6 г, КН-зРО,) 1.0 г, К2НР04 10 г, MgSOi-TH.O 10 г, биотип 30 мкг, паптетонат кальция 2 мг. Указанные ь;о.м11онеиты растворяют в воде и доводят до 1 л. Перед стерилизацией рН фермеитативиой среды доводят с иомошью NaOH до 8,0. Порцнн ферментативной среды с внесенным посевом но 20 мл помещают в эрленмейеровские колбы на 250 мл и используют после добавления 3 г/100 мл среды СаСбз н стерилизации в автоклаве в теченне 10 мин под давлением 1 кг/см. После выращивания культуры в течение 72 час в ферментативную жндкость вносят гуаиии в количестве 2 мг на 1 мл фермеитативиой среды. После дальнейшего выращивания в течение 48 час в ннтательной жидкости получают только 0,26 м.г/мл, рН равио 6,2. Полученный фильтрат иосле удаления бактериальных клеток из ферментативной среды пропускают через колонку с сильно основной ионообменной смолой (Довекс 1/х 2/хлоридного типа). Конечный продукт (гуанозипдифосфат) выделяют элюирова п-1ем слабой соляной кислотой. Эту фракцию нейтрализуют водиым раствором едкого натра, обрабатывают угольным порошком, унарнвают, охлаждают и выделяют иатр 1евую соль гуанозииднфосфата.

Предмет и з о б р е т е и и я

Сиособ иолучеиия три- и дифосфатов аденознна и гуанозина культивированием микрооргаиизмов иа питательиой среде с последующим выделением из среды нолученных в результате иикубации иродуктов, отличающийся тем, что, с целью иовьпнеиия выхода целевого продукта, используют микроорганизм штамма Brevibacterium ammoniagenes.