Штамм микобактерий МYсовастеRIUм снеLоNеI, используемый для аллергологической идентификации микроорганизмов Советский патент 1993 года по МПК C12N1/20 

сл

с

Использование: медицинская и ветеринарная микробиология, штамм микобактерий Mycobacterium chelonei туберкулиноген- ность, аллергологическая идентификация микроорганизмов. Сущность. изобретения: штамм Mycobacterlum chelonei ГИСК №409, обладающий туберкулиногенностью, выделен из лимфоузла коровы, положительно ре агировавшей на туберкулин. Накопление в среде туберкулина начинается с четырех-пя- тинедельного возраста. В одном литре куль- турального фильтрата содержится 0,820-1,100 г туберкулина (в среднем 0,920 г/л). Биологическая активность составляет 0,0003 мг в ЮТЕ. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии, представляет собой новый штамм Mycobacterlum chelonei, характеризующийся активным ростом на синтетической среде и туберкулино- генностью и может быть использовано для аллергологической идентификации микроорганизмов.

Целью изобретения является штамм Mycobacterium chelonei, характеризующийся активным ростом на синтетической среде и туберкулиногенностью.

Ш.тамм Mycobacterlum chelonei № 409 выделен из лимфоузла положительно реагирующей на туберкулин коровы в 1986 году. Штамм Mycobacterlum chelonei N 409 депонирован в коллекции Научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасееича под № 38.

Штамм Mycobacterium chelonei № 409 характеризуется следующими свойствами,

Морфологические свойства. Клетки имеют вид тонких палочек длиной 1,5-2,5 мкм. Окрашивается по Граму, по Цилю-Нильсену окрашивается в красный цвет.

Культуральные свойства. На плотной яичной среде Левенштейна-Йенсена образует мелкие влажные блестящие колонии белого цвета. На среде Левенштейна-Йенсена при температуре 37° вырастает за 15-17 дней. Размножается при температуре 22-45°С: не растет при температуре 50°С. Оптимум роста отмечен при температуре 30-40°С. На жидких питательных средах растет на поверхности в виде тонкой влажной складчатой пленки, оставляя среду прозрачной. Через 4-6 недель роста среда окрашивается в светло-коричневый цвет, оставаясь прозрачной.

00 Сд СП

гю

VI

Физиологические свойства. Растет на плотной питательной среде Левенштейна- Йенсена с добавлением 1 мг/мл салицината натрия, не растет при добавлении в среду 5%-ного хлористого натрия, .не обладает ферментами: уреазой, /3-галактозидазой, нитратреду.ктазой, не образует ниацина, Обладает активными пиразинамидазой, ни- котинамидазой, не гидролизует Твин-80 за 10 дней.

Состав жирных кислот, определенный методом.сопиролитической газовой хроматографии, соответствует видовому составу.

Штамм Mycobacterlum chelonel № 409 агглютинируется кроличьей антисывороткой к серотипу 2 M.chelonei, не агглютинируется антисыворотками к серотипами 1 и 3, что дает основание отнести его к серотопу 2 M.chelonei.

После заражения двух морских свинок бактериальной массой в количестве 1.0-1,5 мг у одного животного в печени обнаружены два мелких туберкулезных очага, в селезенке незначительно увеличена.

Туберкулиногенные свойства. В процессе роста штамма M.chelonei № 409 на жидкой среде, начиная с четырех-пятине- дельного возраста, происходит накопление в среде туберкулина (сенситина). Максимальное количество туберкулина в среде образуется через 6-8 недель роста. Выход сухой бактериальной массы составляет 0,8- 1,0 г на 1 л среды. Туберкулин (сенситин); полученный из культурального фильтрата методом осаждения трихлоруксуной кислотой с последующей очисткой ацетоном, этиловым спиртом и эфиром, представляет собой порошок светло-серого цвета, в состав которого входят белок (75,0-82,0%) и липополисахариды. В 1 л культурального фильтрата содержится от 0,82 до 1,12 г.туберкулина (в среднем 0,98 г/л).

Биологическая активность сенситина изучена на гомологично сенсибилизированных морских свинках и составляет 0,0003 мг в ЮТЕ.

Изобретение иллюстрируется примерами.

Пример 1. Получение туберкулина.

0

0

Штамм Mycobacterlum chelonel № 409 засевают на жидкую питательную среду Линниковой-Могилевского (3 серии по 20 колб с 500 мл среды), выращивают в термостате при 37°С в течение 6-8 недель. Затем колбы с культурой стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 30 минут. Бактерийную массу отфильтровывают, высушивают, взвешивают. Туберкулин осаждают трихлорук- сусной кислотой с последующей очисткой ацетоном, этиловым спиртом и эфиром. Полученный туберкулин представляет собой порошок светло-серого цвета. Химический состав характеризуется содержанием 5 белка в количестве 75,0-82,0% и полисахаридов - 10,0-12,0%. Выход туберкулина в трех сериях составляет 0,900,.0,950 и 1,120 г на 1 л среды соответственно.

- П р.и м е р 2. Определение биологической активности.

24 светлокожих беспородных морских Свинок весом 300-350 г сенсибилизируют внутрикожным введением 5,0 мг бактериальной массы, убитой фенолом, в неполном 5 адьюванте Фрейнда. Через месяц после сенсибилизации морским свинкам внутрикожно вводят исследуемый туберкулин в дозе 0,000075, 0,00015 и 0,0003 мг в 0,1 мл растворителя для туберкулина млекопитающих.

Биологическая активность сенситина из штамма Micobacterium chelonei №409 дана в таблице.

Одновременно 16 морским свинкам вводят полный адъювант Фрейнда, содержащий 5,0 мг микобактерий штамма БЦЖ, убитого фенолом. Через месяц на них ставят кожные пробы со стандартным туберкулином из ГИСК им. Л.А.Тарасевича в дозах 2 ТЕ, 5 ТЕ и ЮТЕ. Биологическую активность выявляют методом гетерологичных аналогий при.сравнении известного с новым гете- рологичным. Биологическая активность туберкулина из штамма М. chelonel № 409 составляет 0,000035 мг в 1 ТЕ.

Формула изобретения

Штамм микобактерий Mycobacterium chelonei ГИСК № 409, используемый для ал- лергологической идентификации микроорганизмов.

0

5

0

5

Продолжение таблицы