Штамм бактерий МYсовастеRIUм FортUIтUм, используемый для изготовления преципитирующей сыворотки Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 A61K39/04 

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии, представляет собой новый штамм Mycobacterium fortuitum, отличающийся антигенными свойствами, и может быть использовано для изготовления преципитирующей сыворотки.

Известны штаммы микобактерий Mycobacterium fortultum, обладающие куль- турально-морфологическими и биохимическими свойствами, характерными для микобактерий данного вида, выделенные в США и Франции и хранящиеся в коллекциях этих стран.

Однако ни один из известных штаммов не используется для изготовления преципитирующей сыворотки.

Цель изобретения - штамм Mycobacterium fortuitum № 293, используемый для изготовления преципитирующей сыворотки.

Штамм Mycobacterlum fortuitum выделен из лимфоузла коровы, положительно реагирующей на туберкулин, в 1988 г. Штамм Mycobacterlum fortuitum № 293 депонирован в коллекции Государственного научно- исследовательскогоинститута стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов имени Л, А. Та- расееича под N 34.

Морфология. Клетки имеют вид палочек длиной 1,0 мкм. Окрашиваются по Граму, по Цилю-Нильсену окрашиваются в красный цвет.

Культуральные характеристики. На плотной яичной среде Левенштейна-Йенсена при 37°С вырастает за 3-5 дней, на карто- фельно-глицериновой среде Павловского вырастает за 5-8 дней. Размножается при 22-42°С, не растет при 45°С Оптимум роста 36-37°С.

На жидких питательных средах растет на поверхности в виде сухой плотной пленки кремового цвета, среда остается прозрачной. Через 4-8 нед. роста среда окрашивается в светло-коричневый цвет при сохранении прозрачности.

Физиологические свойства. Растет на плотной питательной среде Левенштейна- Йенсена с добавлением 5% хлористого натрия или салицилата натрия. Расщепляет с образованием кислоты инозит, не ферментирует рамнозу, абаринозу, сорбит, маннит, дульцит. Утилизирует цитрат и малонат натрия. Имеет активные ферменты: уреазу, ($ -галактозидазу, нитратредуттазу.

Изучение нуклеотидного состава ДНК проводили методом тепловой денатурации в SSC с применением формальдегида. ГЦмол,% у штамма Mycobacterium fortuitum fsk 293 составил 65,1.

Учитывая, что нуклеотидный состав ДНК примерно одинаков не только у видов рода Mycobacterium, но и у близкородственных родов (Nocardla, Rhodococcus и др. родов актиномицетной линии) и составляет 62-73 % ГЦ, проведено изучение жирных кислот методом сопиролитической газовой хроматографии. Определенный таким образом состав соответствует видовому составу Mycobacterlum fortuitum.

После заражения морских свинок бактерийной массой в количестве 1,0-1,5 мг внутримышечно животные в течение 3 мес остаются здоровыми, на вскрытии патолого- анатомическая картина микобактериоза отсутствует.

Антигенные свойства. При введении

кроликам вызывает образование преципитирующих антител в титре 1:16-1:64 (в РИД).

Пример 1. Получение антигенного

материала.

Штамм Mycobacterlum fortuitum № 293 засевали на жидкую синтетическую среду Линниковой-Могилевского и выращивали при 37°С в течение 3-4 нед. Бактерийную

массу отделяли на стерильном бумажном фильтре, промывали дистиллированной водой, заливали на 18-24 ч 2%-ным фенолом, повторно отмывали дистиллированной водои, помещали в коллодиевые пистоны на 480 -520 мг с последующим замораживанием при -40-45°С и разрушением на бактериальном прессе при давлении 25 атм и температуре -40-45°С. Разрушенную бактерийную массу заливали десятикратным объемом стерильной дистиллированной воды и выдерживали в холодильнике при температуре 3-5°С в течение 40-48 ч. Суспензию фильтровали через стерильный

бумажный фильтр. Оставшуюся массу использовали в качестве антигенного материала для иммунизации животных.

Пример 2. Получение преципитирующей сыворотки.

Кроликов весом 2.0-3,0 кг иммунизировали антигенным материалом штамма Mycobacterlum fortuitum № 293, полученным, как в примере 1. Антигенный материал вводили в количестве 50-100 мг в 0,8-1,0 мл

неполного адъюванта Фрейнда внутрикож- но в три разных места еженедельно в течение 3-5 нед. Полученная сыворотка бесцветная, слегка опалесцирует. В РИД в агаре образовывала линии преципитации

при разведениях 1:16-1:64 с экстрактами штаммов Mycobacterlum fortuitum, полученных из ГИСК им. Л. А. Тарасевича (2 штамма) ,и свежевыделенных от крупного рогатого скота (2 штамма), а также с экстрактами

штамма Mycobacterlum fortuitum Мг 293 и не образовывала линий преципитации с экстрактами штаммов других видов микобакте- рий (М. tuberculosis, M. bovls, M. avlum, M. smegmatls, M. phlei, M. kansasii).

Экстракты микобактерий для реакции диффузионной преципитации в агаре готовили растиранием 20-30 мг бактерийной массы со стерильным стеклянным песком в 0,2-0,3 мл дистиллированной воды, подщелоченной 0,1 н. NaOH до рН 9; 5-10.0. Формула изобретения Штамм бактерий Mycobacterlum fortuitum ГИСК Мг 34, используемый для изготовления преципитирующей сыворотки.

Использование: микробиология, серологическая диагностика туберкулеза - получение сыворотки для идентификации микобактерий. Сущность изобретения: штамм Mycobacterium fortultum ГИСК № 34 выращивают на среде Линниковой - Моги- левского при 37°С в течение 3-4 недель. Бакмассу отделяют, промывают дистиллированной водой. Инактивируют фенолом, замораживают и разрушают на бактериальном прессе при давлении 25 атм и температуре (-40) - (45)°С. Разрушенную бактериальную массу промывают дистиллированной водой, фильтруют и оставшуюся массу используют в качестве антигена для иммунизации продуцентов. Выделяют сыворотку общепринятым способом. Обработка клеток микобактерий (разрушение на бактериальном прессе, удаление водорастворимых компонентов протоплазмы) позволяет получить отмытые клеточные стенки и, тем самым, повысить содержание видовых антигенов в препарате для иммунизации лабораторных животных. Сравнительно короткий цикл иммунизации большим количеством антигенного материала обусловливает первичный ответ животного именно на видовые антигены и обеспечивает получение сыворотки, содержащей антитела к М. fortultum. Незначительное количество родовых антител к родовым антигенам микобактерий в реакции диффузионной преципитации в агаре не обнаруживается из-за ограниченной чувствительности этой реакции. Особенности штамма, методы получения антигенного материала для иммунизации животных, приемов, самой иммунизации и применение РДП в агаре исключают необходимость адсорбции сывороток. Ё VI СО 00 00 ел о