Штамм микобактерий МYсовастеRIUм снеLоNеI, используемый для аллергологической идентификации микроорганизмов Советский патент 1993 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологией представляет собой новый штамм Mycobacterium chelonei, характеризующийся активным ростом на синтетической среде и туберкулиногенностью и может быть использовано для аллергологической идентификации микроорганизмов.

Целью изобретения является штамм Mycobacterium chelonei, характеризующийся активным ростом на синтетической среде и туберкулиногенностью.

Штамм Mycobacterium chelonei № 424 выделен из мокроты человека, больного микобактериозом легких, в 1987 голу/

Штамм Mycobacterlum chelonei N 424 депонирован в коллекции государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича под № 37.

Штамм Mycobacterlum chelonel № 424 характеризуется следующими свойствами.

Морфологические свойства. Бактерии штамма - тонкие палочки длиной 2,0-3,0 мкм. Окрашиваются по Граму, по Цилю- Нильсену окрашиваются в красный цвет.

Культуральные свойства. На плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена штамм растет в виде сухих мелких шерохо- ватых колоний кремового цв.ета..На жидкой синтетической среде Линниковой-Могилев- ского клетки штамма образуют на поверхности толстую морщинистую пленку кремового цвета, оставляя среду прозрач- ной. Через 4-5 недель роста среда становит- ся светло-коричневой, оставаясь прозрачной.

Биохимические свойства. Штамм растет на среде Левенштейна-Йенсена с добавле-. нием 5% хлорида натрия и с салицилатом натрия. Не ферментирует арабинозу, рам- нозу, инозит, маннит, дульцит, сорбит, не утилизирует цитрат натрия и мальнат натрия, обладает активной уреэзой и не имеет - галактозидазы и нитратредуктазы.

Состав жирных кислот, определенный методом сопиролитической.газовой хрома- тографии соответствует спектру Mycobacterlum chelonei. Нуклеотидный со- став штамма - 65% ГЦ.

Вирулентность. Внутримышечное заражение морских свинок в дозе 1,0-1,5 мг бактерийной массы (вес влажной массы) не приводит к развитию микобактериоза в те- чение срока наблюдения (2 месяца).

Туберкулиногенность. В процессе роста штамма на синтетической среде Линнико- вой-Могилевского, начиная с 3-4-недельно- го возраста, происходит накопление туберкулина. Максимальное количество туберкулина в среде накапливается через 5-6 недель роста. Выход сухой бактерийной массы 0,700-0,820 на 1 литр среды. Туберкулин, полученный из культурального фильтра

методом осаждения трихлоруксусной кислоты с последующей очисткой ацетоном, этиловым спиртом, эфиром, представляет собой порошок белого цвета, в состав которого входит белок (72,0-82,0%) и липополи- сахариды. В 1 литре культурального фильтрата содержится от 0,820 до 1,100 г туберкулина (в среднем 0,910 г/л). Биологическая активность изучена на гомологично сенсибилизированных морских свинках и составляет 0,00003 мг в 1 ТЕ.

Пример. Аллергологическая идентификация видом микобактерий 5 мг бактерийной массы некроматогенного свежевыделенного штамма собирают металлической лопаточкой с поверхности твердой питательной среды (например, Ле- венштейн-Йенсена) и помещают в коническую центрифужную пробирку с 3,0% раствором фенола. Через 6 часов раствор фенола осторожно сливают, добавляют 2-3 мл изотонического раствора хлорида натрия и центрифугируют в течение 20 мин при 5000 об/мин. К осадку добавляют 0,2 мл стерильного вазелинового масла, растирают стеклянной палочкой и вводят шприцем в 2-3 места на спине морской свинки внут- рикожно. Через 3 недели после сенсибилизации шерсть на обоих боках морской свинки депилируют полосой в 3 см и на следующий день вводят строго внутрикож- но по 0,1 мл растворов сенситинов и тубер- кулинов по 5 ТЕ. На одной морской свинке одномоментно ставят 8-10 кожных проб с антигенными препаратами, изготовленными из некромогенных микобактерий различ- ных видов (M.avium, M.lntracellulare, M.bovis, M.tuberculosis, M.fortuitum, M.kansasii, M.gastri, M.smegmatls, M.chelonei). Наибольшая кожная проба на один из препаратов указывает на сенсибилизацию гомологичным штаммам, Чтение результатов реакций проводят через 48 часов.

Формула изобретения Штамм микобактерий Mycobacterium chelonei (sfe 424 ГИСК N 37, используемый для аллергологической идентификации микроорганизмов.

Использование: медицинская и ветеринарная микробиология, штамм микобакте- рий, туберкулиногенность, аллергологичес- кая идентификация микобактерий. Сущность изобретения: новый штамм Mycobacterium chelonei ГИСК № 424 обладает туберкулиногенностью. Штамм выделен из мокроты человека с микобактериозом легких. Морфология. Клетки имеют вид палочек длиной 2,0-3,0 мкм. Окрашиваются по Граму, по Цилю-Нильсону окрашиваются в красный цвет. Культуральные характеристики. На плотной яичной среде образует мелкие, сухие, шероховатые колонии кремового цвета. На плотной яичной среде Левенштей- на-Йенсена при 37°С вырастает за 3-5 дней. На картофельно-глицериновой среде Павловского вырастает за 4-5 дней. Размножается при 22-40°С, не растет при 45°С, оптимум роста - 30-38°С. На жидкой питательной среде растет на поверхности в виде толстой морщинистой пленки кремового цвета, оставляя среду прозрачной. Через 4- 5 недель роста,среда становится светло-коричневого цвета, оставаясь прозрачной. Физиологические свойства. Растет на плотной питательной среде Левеншгейна-Йен- сена с добавлением 5% хлористого натрия или салицилата натрия, не ферментирует арабинозу, рамнозу, инозит, манниг, дуль- цит, сорбит, не утилизирует цитрат натрия и малонат, не имеет/3-галэктозидазу и нит- ратредуктазу. Туберкулиногенность. Накопление в среде туберкулина начинается с трех-четырехнедельного возраста. Максимальное количество сенситина в среде образуется через 5-6 недель роста. В 1 л культурального фильтрата содержится 0,820-1,100 г сенсити (в среднем 0,910 г). Биологическая активность составляет 0,00003 мг в 1 ТЕ. (Л :оо о со оо vi