Штамм бактерий МYсовастеRIUм FоRтUIтUм, используемый для изготовления аллергена Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 A61K39/04 

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии, представляет собой новый штамм Mycobacterium fortultum,характеризующийся активным ростом на синтетической среде и туберкулино- генностью, и может быть использовано для изготовления аллергена.

Целью изобретения является штамм Mycobacterium fortuitum ГИСК № 35, используемый для изготовления аллергена.

Штамм выделен из мокроты человека с микобактериозом легких и обладает всеми свойствами, характерными для рода Mycobacterium.

Морфологические признаки. Палочки длиной 2,0-3,0 мкм, грамположительные, по Цилю-Нильсену окрашиваются в красный цвет.

Культуральные признаки. На плотной яичной среде образуют мелкие сухие, шероховатые колонии кремового цвета. В жидких питательных средах не вызывает помутнение, на поверхности образует толстую, морщинистую пленку кремового цвета, через 4-5 нед. роста окрашивает среду в коричневый цвет. На плотной яичной среде Левен- штейна-Йенсена при 37°С вырастает за 3-5 дней; на картофельно-глицериновой среде Павловского - за 5-6 дней. Размножается при 22-40°С, не растет при 45°С. Оптимум роста 36-37°С.

Ферментативные свойства. Расщепляет с образованием кислоты инозит, не ферментирует рамнозу, арабинозу, сорбит, маннит, дульцит, утилизирует цитрат и малонат натрия. Обладает активными ферментами: уреазой, / галактозидозой, нитратредуктозой. Растет на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена с добавлением 5%-ного хлористого натрия или салицилата натрия.

Туберкулиногенные свойства. В процессе роста штамма на синтетической среде Линниковой-Могилевского, начиная с трех Ч

Јь

2

00

го

четырехнедельного возраста, происходит накопление в среде туберкулина (инситина). Максимальное количество сенситина в среде образуется через 5-6 нед. роста.

После заражения морских свинок бак- териальной массой в количестве 1,0-1,5 мг внутримышечно животные остаются здоровыми в течение 3 мес., на вскрытии патоло- го-анэтомическая картина микобактериоза отсутствует.

Пример 1. Получение туберкулина. Штаммы Mycobacterlum fortultum ГИСК Nfe 35 засевают на жидкую синтетическую среду Линниковой-Могилевского (3 серии из 20 колб с 0,5 л среды), выращивают в термоста- те при 37°С в течение 5-6 нед. Затем колбы с культурой стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 30 мин, фильтруют, высушивают и взвешивают. Выход сухой бактериальной массы 0,720-0,980 г на 1 л среды. Туберкулин (сенситин)осаждают трихлорук- сусной кислотой с последующей очисткой ацетоном, этиловым спиртом и эфиром. Полученный туберкулин (сенситин) представляет собой порошок светло-серого цве- та. Химический состав характеризуется содержанием, %, белка 75,0-80,0 и полисахаридов 9,0-11,0.

Каждая из 3-х серий посевов имеет продуктивность 0,890; 0,930 и 1,150 г на 1 л среды соответственно.

Пример 2, Определение биологической активности. 24 светлокожих беспородных морских свинок весом 300-350 г сенсибилизируют внутрикожным введением 5,0 мг бактерийной массы M.fortuitum ГИСК Мг 35 в неполном адьюванте Фрейн- да.

Через месяц после сенсибилизации морским свинкам внутрикожно вводят сенситин в дозе, мг: 0,000075; 0,00015; 0,0003 в 0,1 мл растворителя для туберкулина млекопитающих.

Результаты представлены в таблице.

Одновременно 16 морских свинок сенсибилизируют полным адьювантом Фрейн- да с 5,0 мг БЦЖ. Через месяц на них ставят кожные пробы со стандартным туберкулином из ГИСК им.Л.А.Тарасевича в дозах 2 ТЕ, 5 ТЕ и ЮТЕ.

Биологическую активность выявляют методом гетерологичных аналогий при сравнении известного стандартного с новым гетеролргичным. Биологическая активность составляет 0,00003 мг в одной туберкулиновой единице.

Формула изобретения Штамм бактерий Mycobacterium fortuitum ГИСК N 35, используемый для изготовления аллергена.

Использование: ветеринарная микробиология, серологическая диагностика туберкулеза, получение аллергена. Сущность изобретения: штамм Mycobacterlum fortuitym ГИСК М 35 засевают на жидкую синтетическую среду Линниковой-Могилев- ского. Выращивают в термостате при 37°С в течение 5-6 недель. Колбы с культуры стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 30 мин, фильтруют. Туберкулин осаждают трихлоруксусной кислоты, очищают ацетоном, этиловым спиртом и эфиром. Химический состав полученного аллергена, следующий , мае %: 75.0-80,0, полисахариды 9,0-11,0. 1 табл,

Биологическая активность сбнситина из штамма M.fortuitum ГИСК № 35