Способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине в частности к офтальмологии, и может быть использовано для определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа и исключение необходимости забора крови у больного за счет исследования среды непосредственно из зоны ожога.

Поставленная цель достигается тем, что в способе, включающем определение функциональной активности лимфоцитов по реакции бластной трансформации лимфоцитов в биологической среде с ФГА с включением Н-тимидина в бласттрансформированные клетки, одновременно проводят опытную и контрольную прЪбы, причем в обеих пробах

используют лимфоциты здорового донора,.а в качестве биологической среды используют соответственно слезу больных с ожогами глаз и здоровых лиц.

Способ осуществляется следующим образом.

Формируют две пробы - опытную и контрольную. Обе пробы содержат одинаковую культура ьную среду, которую готовят следующим образом: из гепаринизированной крови Донора в градиенте плотности фикол- лверографина (плотностью 1077) получают чистую суспензию лимфоцитов, которую трижды отмывают в растворе Хенкса по 5 мин при 75 д, доводят до концентрации 2x106 клеток в 1 мл. Готовят взвесь из 150 мкл лимфоцитов в среде 199 с 25 мкл 10% сывороткой крови телят и ФГА (рабочая кон00

со ел ел

GK

центрация 20 мкг/мл) и помещают в планшет для иммунологических реакций, В опытную пробу (в опытную лунку планшета) к культуральной среде добавляют 30 мкл слезы больного, в контрольную пробу (в контрольную лунку)- слезу здорового человека. Пробы культивируют 48 ч при Т 37°С в атмосфере с 5% содержанием углекислого газа. Через 48 ч в каждую лунку (опытную и контрольную) добавляют Н-тимидин по 25 мкл (доза 1 мкКИ), оставляют на 24 ч при тех же условиях. Затем пробы пропускают через миллипоровый фильтр Владипор и фиксируют по общепринятой методике (5% ТХУ, спирт, эфир). Пробы просчитывают на стинцилляционном счетчике Бета-2. Все пробы ставятся в дублированном варианте. Рассчитывают индекс подавления (стимуляции) по формуле:

ИП(С) (1---|)х100%,где ИП(С) - индекс подавления (стимуляции);

А - включение Н-тимидина в пробах со слезой обожженных;

В - включение 3Н-тимидина в пробах со слезой здоровых людей.

П р и м е р 1. Больной С. Диагноз - легкий химический ожог роговицы и конъюнктивы правого глаза. В 1, 3,7 сутки после ожога взята слеза на иммунологическое исследование. Величина ИП(С) составила: в. 1 сутки - (-)303%, на 3 сутки - (-)183%, на 7 сутки-(-)29%.

Таким образом, у больного наблюдалась стимулирующая активность слезы, что характеризовалось отрицательным значениями индекса, величина которого значительно отклонялась от нормы (больше (-)25%)(фиг.1).

При обследовании группы больных с легкими ожогами глаз ИП(С) в 1 сутки после ожога составил (-)348,7 ±58,6%, на 3 сутки - (-)188,7 ± 33,4%, на 7 сутки - (-)34,0 ± ±14,1%;

П р и м е р 2. Больная М. Диагноз - химический ожог роговицы и конъюнктивы средней тяжести правого глаза. В 1,3,7,14 сутки после ожога взята слеза для иммунологического Исследования. Величина ИП(С) Составила: в 1 сутки - (+)18%, на 3 сутки - (+)87%, на 7 сутки - (-)50%, на 14 сутки - (+)29%..

Таким образом, на 3 сутки после ожога наблюдался максимальный подъем подавляющейся активности слезы, характеризующейся положительными значениями

индекса, величина которого значительно от клонялась от нормы (больше (+)25%), К Т суткам после ожога она сменялась стимулирующей активностью, величина которой также отклонялась от нормы (больше (-)25%), с

последующим ее приближением к 14 суткам

после ожога к уровню иммуномодулирующей активности слезы здоровых лиц (фиг.2).

При обследовании группы больных с

ожогами глаз средней тяжести ИП(С) в 1

сутки после ожога составил (+)15,3 ± 2,2%,

на 3 сутки - (+)65,0 ±8,4%, на 7 сутки (-)42,8± 4,5%, на 14 сутки-(+)25,2 ±4,2%.

П р и м е р 3. Больной Г. Диагноз тяжелый химический ожог роговицы и конъюнктивы правого глаза. На 3, 7, 14, 28 сутки после ожога взята слеза для иммунологического исследования. Величина ИП(С) составила: на 3 сутки-(+)18%, на7сутки-(+)61.%,

на 14 сутки-(+)41%, на 28 сутки - (+)29%.

Таким образом, наблюдалась подавляющая активность слезы во все сроки наблюдения с максимальным ее подъемом и значительным отклонением от нормы (больше (+)25%) на 7 сутки после ожога (фиг.З).

По сравнению с прототипом заявлен- ный способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз обладает следующими преимуществами:

повышается чувствительность, так как он может быть использован для определения нарушения иммунологического состояния при легких, средней тяжести, тяжелых и особо тяжелых ожогах, в то время как по известному способу лишь при тяжелых .и особо тяжелых ожогах глаз; исключается необхо- димость забора крови из вены больного, что устраняет возможность ВИЧ-инфицирования.

Фор мула изобретения Способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз, включающий определение функциональной активности лимфоцитов по реакции бласттрансформации лимфоцитов в биологической среде, содержащей фитогемагг- лютинин (ФГА) с включением 3Н-тимидина в бласттрансформированные клетки, о т л йчающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, используют лимфоциты здорового донора, причем в отдельные пробы добавляют слезу больных и здоровых лиц, далее высчитыва

ют индекс подавления или стимуляции по формуле

ИП(С) (1 -g-)x100%.

где ИП(С)-индекс подавления или стимуляции;и при величине индекса, выходящей за

А - включение 3Н-тимидина в пробах сопределы ±25% относительно нулевого

слезой больных;,уровня, определяют наличие нарушения имВ - включение Н-тимидина в пробах со мунологического состояния при ожогах

слезой здоровых лиц,5глаз.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для определения нарушений иммунологического состояния при ожогах глаз. Целью изобретения является повышение чувствительности упрощения способа. Способ заключается в том, что в опытной пробе определяют влияние биологической среды, в качестве которой используют слезу больного, на функциональную активность лимфоцитов здоровых доноров. Одновременно в контрольной пробе определяют влияние биологической среды, в качестве которой используют слезу здорового человека, на функциональную активность лимфоцитов здороЬого донора. О наличии нарушения иммунологического состояния судят по индексу .подавления (стимуляции), величина которого может выходить за пределы ±25% относительно нулевого уровня, что зависит от включения 3Н-тимидина в пробах со слезой больных с ожогами глаз и здоровых лиц.