СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА /-ЛМЗИНА Советский патент 1966 года по МПК C12P13/08 

Известен способ производства /-лизииа путем глубиииого выраи 1.ивапия его продуцеитов - Brevibacterium, в иитательиой среде, содержащей источиики углерода, азота, фосфора, калия и стимуляторы роста, отделения бактериалыпз1х клеток от культуральиой жидкости одинм из известных приемов, иаиример цеитрифугироваиием, с иоследуюишм выделением лизииа из культуральиой жидкости.

Предложено в качестве источника углерода исиользоват11 иолучаемые в ироцессе каталитичеекого окиелеиия иарафинов ннзкомолекуляриые жирные кислоты, в оеиовиом уксусную, пропиоиову О и масляную, или сточные воды, содержащие эти кислоты, перед выделением /-лизииа культуральную л идкоеть очи1Иать от ноетороииих веществ нутем иоследовательной обработки ее активированным углем и гидроокиеью кальция, причем между этими обработками культуральную жидкость (Ьильтруют.

Это отличие обеспечивает экономию кормовых и ии1л,евых продуктов, используемых по известиому способу в качестве питательной среды, а также упрощеиие процесса.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

держащие по /о мл стерильной иитателыюй среды следующего состава (в ч/,,) :

Кукурузный экстракт2

Глюкоза2

i I атрий хлористый0,25

Раствором едкого натрия доводят рИ ереды до 7,0. Колбы номеиииот иа круговую качалку и в термостате при -;-29 - ЗОС взбалтывают в течение 24 час при 250 об/мин.

Выраихенную в колбах культуру продуцента лизи)1а иереносят в иоеевной ферментер, снабженный мещалкой и барботером для иодачи сте)нльиого воздуха (на 1 об. 1 об/мин ереды) в количеетве 5% от питательной ереды, шюсилюй в него. Состав питательной среды тот же. что и в колбах.

В посевном ферментере продуцент ;1изнна вырани1сают при 29-30 С в течеиие 2-1 час в стернльиых условиях и неирерывно.м поступлении воздуха. В качестве пеногасителя используют кащалотовый жир. Выращеииый иосевиой материал переиоеят в производстьениый ферментер в количестве 6о/о от объема стерильной рабочей питательной среды.

Рабочую питательную среду готовят на сточной воде заводов, производящих синтетические жирные кислоты путем каталитического окисления парафина.

ироииоповон и масляной, служащих источником углерода для биосинтеза лизина.

В сточную иоду добавляют донолиительиое ннтанне (в о/);

Аммоний сернокислый2

МелI

Калий фосфорнокислый однозамещеииый0,05

Калий фосфорнокислый двухзамещенный0,05

Кукурузный экстракт2

Меласса3-4

Последние два комнопента яв.тяются биостимуляторами. Доводят рН иитательной среды до 7,0.

В производственном ферментере нроизводят ферментацию в течение 72 час при 25-30°С, непрерывном перемешивании и аэрации стернлынокм воздухом (на 1 об. 1 об/мин среды). В качестве пеногасителя применяют также кашалотовый жир.

После окончания ферментации культуральиую жидкость, содержащую лизин, кинятят в течение 15-20 мик, а затем сепарируют, после чего ее подкисляют соляной кислотой до рН 5 и обрабатывают активированным углем, который добавляют в количестве 4-5Vo, нри 50-55°С и непрерывном перемешивании в те чеиие 30 мин. Затем культуральную жидкость от(|энл1 тровывают от угля.

К полученному фи.чьтрату добавляют раствор гидрата окиси калия. В результаге реакции между остатком сернокислого аммония к гидрато.м окиси кальция образуется сернокислый кальций, который вынадает в осадок, п гидрат окиси аммония.

Одновременно осаждают остаток сахорозы патоки, представляюншй собой сахарат кальция.

Сернокислый кальций и сахарат кальция отфильтровывают, а гидрат окиси аммоиня разлагают нри последуюн.1ем упаривании из воду и альмиак. Последннй отгоняют.

Упаривание ведут иод вакуумом до образования иересыще1Ц ого раствора /-лизнна, который крнсталлизуют при охлаждении.

Для получения хнмически чистого /-лизина получеииые кристаллы его растворяют в ми имальном объе.ме дистиллированной воды и осаячдают 3-4-кратным объе.мом этилового сиирта. Осадок отф 1Л1 тровыва10т и высушивают при 60°С.

П р е д .м е т изобретения

Снособ производства /-лизииа путем глубинного выранишання его продуцептов в питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора, калия и стимуляторы роста, отделения бактериальных клеток от культуральиой жидкости одним из известиых способов, паиример центрифугироваиием, с последующим выделением (кристаллизацией) лнзииа из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью экономии пищевых и кормовых продуктов, используемых по изьестиому способу в качестве питательной среды, а также упрощения нроцесса, в качестве источника углерода иснользуют получаемые в процессе каталитического окисления нарафинов 1П)зко1 юлскулярные жирные кислоты, в основном уксусиую, пропионовую п масляную, или сточные воды, содержащие эти кислоты, а неред выделением /-лизина культурал Л1у о жидкость очищают от ностороиних BeniecTB путем последовательной обработки ее активированным углем и гидроокисью кальцпя с промежуточпой фильтрацией.