ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ШРОДУЦЕНТОВ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ Советский патент 1973 года по МПК C12N1/20 C12N9/00 

1

Изобретение относится к производству ферментов.

Известна питательная среда для выращивания продуцентов литических ферментов, например Bacillus subtilis, Bacillus mesentericus, содержащая источник углерода-крахмал, органические соединения азота, семиводный сульфат магния и воду.

Целью изобретения является повышение активности продуцируемых ферментов.

Достигается это тем, что предлагаемая питательная среда дополнительно содержит двузамещенный фосфорнокислый аммоннй, хлористый калий н хлористый кальций.

В качестве органических соединений азота питательная среда содержит экстракт соевых бобов, а также казеин ,и сухие дрожжи.

Компоненты питательной среды взяты в следующих количествах (г/л):

Двузамещенный фосфорнокислый аммоний4,0±0,1

Хлористый калий0,6±0,06

Семиводный сульфат магния0,1 ±0,02

Хлористый кальций0,1 ±0,02

ВодаОстальное

Дополнительно питательная среда содержит подсолнечное масло.

Прнмер 1. 40 г соевых бобов номещают в колбу, нриливают 200 мл 0,1%-ного NaOH, кипятят в течение 1 час, затем отделяют экстракт путем фильтрации на воронке Бюхнера. 10 г растворимого картофельного крахмала суспендируют в 200 мл воды и кле11стеруют путем подогревания суспензии до 85°С при постоянном перемешивании на водяноГ бане. Экстракт соевых бобов и раствор клейстернзованного крахмала сливают вместе, охлаждают до комнатной температуры н добавляют: 40 мл 10%-ного (NH4)2 6 мл 10%-ного КС1; 1 мл 10%-ного MgSO47H20; 1 мл 10%ного СаСЬ и водопроводную воду до объе.ма 1 л.

В среде устанавливают рЫ 7,0 при по.мощи концентрированного раствора СНзСООИ, а затем разливают ее в колбы Эрленмейера емкостью 300 мл (по 100 мл в колбу) и стернлизуют в течение 1 час при 0,5 ати.

Охлажденную до 35°С стерильную питательную среду засевают водной суспензией культуры Вас. subtilis N, выращенной на скошенном сусло-пептонном агаре. При нриготовлении суспензии в пробирку 18X180 мм с культурой вливают 20 мл стерильной водопроводной воды, и в колбы со средой вносят по 1 мл такой суспензии. Выращивание проводят на качалке со скоростью вращения 160 об/мин при температуре 37+1°С в течение 16 час. Активность литических ферментов в фильтрате культуры составляет 2720 ед.ЛА/луг.

Пример 2. Способ приготовления питательной среды и посевного материала, а также режим выращивания культуры те же, что и в примере 1.

В качестве продуцента литических ферьгентов используют штамм Вас. subtilis 402. Активность литических фермевтов в фильтрате культуральной жидкости составляет 5000 ед. ЛА/жл.

Пример 3. 20 кг соевых бобов помещают в аппарат, имеющий рубащку для подогрева паром и нижний сливной штуцер. В аппарат вливают 100 л воды и добавляют 10 г NaOn. Экстракцию соевых бобов проводят в течение 1 час с момента закипания, а затем экстракт переводят в ферментер емкостью 1000 л и добавляют: 2 кг (NH4)2 НРО4; 0,3 кг КС1; 0,05 кг MgSO47H20; 0,05 кг Са СЬ, воду до объема 500 л и затем 5 кг растворимого картофельного крахмала. Среду перемешивают 15 мин, устанавливают в ней при помощи концентриропанной уксусной кислоты рН 7,2, приливают 0,5 л подсолнечного масла и стерилизуют при перемешивании в течение 1 час при температуре 116-120°С.

Охлажденную до 40°С стерильную питательную среду засевают водной суспензией культуры Вас. subtilis 402, выращенной в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл на нщеничных отрубях 71%-ной влажности (по 20 г воздущно-сухих или 60 г увлажненных отрубей в колбе) в течение 2 суток при температуре 37°С.

Ферментацию ведут 12 час при режиме: температура 36±1°С, давление в апнарате 0,3- 0,5 ати, расход воздуха - 0,5 объемов в 1 лпт, перемещивание постоянное (180 об/мин).

Активность литических ферментов в фильтрате культуральной жидкости составляет 1870 ед.ЛАМл.

Пример 4. В ферментер емкостью 1000 л наливают 500 л воды и вносят (кг): растворимый крахмал - 5; (NH4)2HPO4 - 2; KCI - 0,3; MgSO47H2O -0,05; CaCl2 -0,05; технический казеин-1; сухие медицинские дрожжи- 0,25. Среду перемещивают 15 мин, а затем нри помощи концентрированной

СНзСООН устанавливают в ней рН 7,2, добавляют 0,5 л подсолнечного масла и стерилизуют при постоянном перемещивании и температуре 116-120°С в течение 1 час. Посевной материал приготавливают так же, как и в примере 1, в качестве продуцента литических ферментов используют культуру Вас, subtilis N.

Режим ферментации: темнература 36-37°С,

расход воздуха - 0,5 объемов в 1 мин, давление в аппарате 0,3-0,5 ати, постоянное перемешивание (180об/лш«). Продолжительность выращивания 12 час, активность литических ферментов в фильтрате культуральной жидкости 1200 ед. ЛА/лл.

Предмет изобретения

1.Питательная среда для выращивания продуцентов литических ферментов, например

Bacillus subtilis. Bacillus mesentericus содержащая источник углерода-крахмал, органические соединения азота, семиводный сульфат магния и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения активности продуцируемых

ферментов, среда дополнительно содержит двузамещенный фосфорнокислый аммоний, хлористый калий и хлористый кальций.

2.Питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве органических соединеНИИ азота она содержит экстракт соевых бобов.

3.Питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве органического соединения азота она содержит казеин и сухие

дрожжи.

4.Питательная среда но нп. 1-3, отличающаяся тем, что ее компоненты взяты в следующих количествах (г/л):

Двузамещенный фосфорнокислый аммоний4,0+0,1

Хлористый калий0,6+0,06

Семиводный сульфат

0,1+0,02

магния 0,1+0,02

Хлористый кальций Остальное Вода

5. Питательная среда по нп. 1-4, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит 50 нодсолнечное масло.