Способ диагностики иммунодефицитного состояния Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

(Л

С

Использование: медицина, экспресс-диагностика иммунодефицитных состояний. Цель изобретения - повышение точности способа. Сущность изобретения: исследуют фагоцитарную активность лейкоцитов у больного одновременно с контрольным лицом (донором) с заранее установленным уровнем фагоцитоза по отношению к среднему его уровню в контрольной группе здоровых людей. В качестве показателя фагоцитоза дополнительно определяют от-. ношение суммы объектов, поглощенных активными фагоцитами, к общему числу неактивных и малоактивных фагоцитов и результаты исследования у больного выражают в процентах к показателям контрольного лица, пересчитанным на средний уровень показателей в контрольной группе. 1 табл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления недостаточности иммунной защиты и в каче- |стве показания к углубленному иммунологическому исследованию.

Цель изобретения заключается в повы- ;шении точности способа. I Это достигается тем, что в группе доно- I ров при одномоментном исследовании уста- Ыавливают нормативное значение |фагоцитарного показателя в процентах от |его среднего значения в группе и отбирают лиц, которые служат эталонами среднего i уровня фагоцитоза у здоровых людей, исс- (ледовэние у больного производят одновре- |менно с лицом, служащим эталоном, по | показателю последнего рассчитывают сред- | ний уровень фагоцитарного показателя, ре- зультат исследования у больного выражают

в процентах к этому уровню и при величине полученного показателя ниже его нормативного значения диагностируют недостаточность иммунной защиты. Кроме того, в качестве показателя определяют отношение суммы объектов, поглощенных активными фагоцитами, к общему числу неактивных и малоактивных фагоцитов.

Предлагаемый способ отличается от известного следующими признаками.

В предлагаемом способе устанавливают норматив уровня фагоцитарного показателя и оценку результатов исследования у больного осуществляют по этому нормативу. Величина нормативного показателя не зависит от методики исследования и условий его осуществления.

Исследование у больного проводят одновременно с лицом, служащим эталоном

00 GO VI Ю GJ

норматива среднего уровня фагоцитарного показателя, и уровень фагоцитарного показателя у больного оценивают по отношению к эталону.

В качестве показателя фагоцитоза до- полнителыю определяют отношение числа объектов, поглощенных активными фагоцитами к общему числу неактивных и малоактивных фагоцитов.

Способ осуществляют следующим-об- разом.

Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов цельную кровь, стабилизированную любым антикоагулянтом, смешивают с равным объемом взвеси лю- бых подходящих бактерий (концентрация взвеси - 0,5-1 млрд. микробных тел на мл) или эритроцитов из антигенных эритроци- тарных диагностикумов (концентрация - 50-60 млн. мл), выдерживают в термостате 20 мин. Изготовляют мазки и окрашивают их по Романовскому-Гимзе. При микроско- пировании мазка его площадь условно делят, на три части и в каждой из них учитывают по трети от общего числа подсчи- тываемых лейкоцитов. Определяют фагоцитарную активность 100 изолированно расположенных нейтрофильных лейкоцитов. Определяют процент фагоцитирующих клеток и число объектов, поглощенных каждым фагоцитом. Рассчитывают число объектов в среднем на каждую из 100 со- считапных клеток (Фагоцитарный индекс, или число). Фагоциты распределяют по степени активности на три группы: неактивные (нулевые), малоактивные (с поглощением одного объекта) и активные (с поглощением двух и более объектов). Подсчитывают сумму объектов, поглощенных активными фагоцитами, и делят ее из общее число неактивных и малоактивных фагоцитов (индекс активности фагоцитов - ИАФ).

Для установления нормативного значения фагоцитарного показателя у взрослых людей и отбора эталонов среднего уровня фагоцитоза одномоментно обследуют группу здоровых людей (доноров) в возрасте 18- 55 лет числом не менее 15. У каждого обследованного определяют величину фагоцитарного индекса (ФИ) и индекса активно- сти фагоцитов (ИАФ), вычисляют среднюю величину каждого показателя и показатели каждого донора выражают в процентах к средней величине соответствующего показателя. Самый высокий и самый низкий от- носительные показатели служат крайними границами норматива уровня фагоцитоза у здоровых взрослых людей. По многочисленным исследованиям авторов изобретения и материалам литературы крайние границы

норматива фагоцитарного индекса составляют 45-171%.

Из обследованных лиц выбирают таких, которые могут служить эталонами среднего уровня фагоцитоза, В качестве таковых берут лиц с относительным уровнем фагоцитарного показателя, близким к 100% или выше него,

При диагностическом исследовании определяют фагоцитарную активность лейкоцитов одновременно у больного и лица, служащего эталоном. По результатам исследования эталона рассчитывают средний уровень фагоцитарного показателя в натуральном выражении. Данные исследования у больного выражают в процентах к этому рассчитанному среднему уровню и сопоставляют с нормативным значением показателя. Выход показателя за пределы нижней границы показателя указывает на недостаточность иммунной защиты, а превышение верхней границы .норматива указывает на реактивное повышение фагоцитарной активности лейкоцитов,

Для проведения диагностического исследования у детей предварительно формируют норматив фагоцитарного показателя для соответствующей возрастной группы. Для этого обследуют 20 здоровых детей соответствующего возраста с одним-двумя лицами, служащих эталонами среднего уровня фагоцитарного показателя у взрослых. По результатам исследования у эталона рассчитывают средний уровень фагоцитарного показателя для взрослых и по отношению к нему рассчитывают в процентах величины фагоцитарного показателя у каждого ребенка. Устанавливают норматив верхнего, среднего и нижнего уровней показателя.

Диагностическое исследование у больного ребенка проводят одновременно с лицом-эталоном. Вышеописанным приемом рассчитывают в процентах величину фагоцитарного показателя у ребенка и сравнивают ее с нормативным показателем этой .группы детей.

П р и м е р 1. Диагностическое исследование у взрослого больного туберкулезом.

Для определения норматива уровня фагоцитоза и создания эталонов его уровня обследованы 19 доноров в возрасте от 22 до 45 лет.

В качестве объекта фагоцитоза взяты эритроциты из сухого.эритроцитарного ди- агностикума из шигелл Зонне. Эритроциты прокрашены насыщенным раствором анилинового красителя черного цвета, отмыты от избытка краски, приготовлена густая взвесь эритроцитов в физрастворе. После отстаивания взвеси в течение 30 мин взята

верхняя часть взвеси, лишенная конгломератов эритроцитов. Взвесь разведена физраствором до концентрации эритроцитов 50 млн/мл.

Кровь доноров стабилизирована гепарином из расчета 25 МБ/мл. Кровь в объеме 30 мкл смешана с равным объемом взвеси эритроцитов. Все пробы одновременно помещены в термостат на 20 мин при периодическом встряхивании пробирок с пробами. С помощью устройства для изготовления мазков на предметных стеклах сделана серия маленьких мазков размером 18x3,5 мм перпендикулярно к длиннику стекла. В мазках определен фагоцитарный индекс и индекс активности фагоцитов.

Результаты определения фагоцитарного индекса: средняя величина - 0,83, минимальная величина -0,41 (49% от средней величины), максимальная величина 1,20 (145% от средней). Нормативная величина фагоцитарного индекса - 49-145%.

Результаты определения индекса активности фагоцитов: средняя величина - 0,80, минимальная 0,21 (26% от средней), максимальная 1,46 (182%). Нормативное значение ИАФ - 26-182%.

Больной туберкулезом, 42 лет, обследован одновременно с донором, служащим эталоном, с относительными величинами ФИ 112% и ИАФ 120% от среднего значения в вышеприведенной группе доноров.

При исследовании получены следующие результаты: у больного ФИ - 0,16 и ИАФ - 0,08; у лица-эталона ФЧ - 0,88 и ИАФ - 1,41. Расчет по данным эталона среднего уровня фагоцитарных показателей для здоровых людей: 100% от ФЧ 0,88 составляет 0.79 и 100% от ИАФ 1,41-1,18. Рассчитанные к этим величинам относительные уровни составили для ФЧ 20% и для ИАФ 6%. По результатам исследования сделано заключение о наличии у больного выраженной недостаточности иммунной защиты к нетуберкулезным микробам.

Предложенным способом обследованы 38 больных туберкулезом. У 5 из них выявлена недостаточность иммунной защиты с относительной величиной ФЧ 13-36% и ИАФ - 3-14%. У 6 больных установлена стимуляция фагоцитоза с относительными величинами ФЧ 167-288% и ИАФ 190- 318%.

П р и м е р 2. Пример диагностического исследования при бронхолегочной патологии у детей.

Девочка в возрасте 1 г(4 мес. с диагнозом: острая респираторная инфекция; двусторонняя очаговая бронхопневмония.

При предварительном определении нормативных показателей у 20 эдоровыхде- тей в возрасте 1-2 года с эталоном уровня фагоцитоза были установлены следующие

показатели в процентах к среднему уровню здоровых взрослых людей: среднее значение ФЧ 84% и его нормативное значение - 46-137%, среднее значение ИАФ 86% и его нормативное значение - 18-228%.

0 Ребенок обследован одновременно с лицом-эталоном с относительным уровнем ФЧ - 130% и ИАФ - 121%. Результаты исследования у больной: ФЧ - 0.24 и ИАФ - 0,02, соответствующие показатели у этало5 на - 1,20 и 1,48. Расчет по эталону среднего уровня здоровых людей дает показатели ФЧ - 0,92 и ИАФ - 1,22. Выраженные в процентах данные больной дают относительную величину ФЧ -26% и ИАФ -2%. У

0 больной выраженная недостаточность иммунной защиты, особенно по критерию ИАФ.

При обследовании предлагаемым способом 92 детей от 1 мес. до 3 лет с различ5 ными формами бронхолегочной патологии (обструктивный бронхит, острая и хроническая пневмония) выявлена недостаточность иммунной защиты у 61 ребенка (66% положительных результатов).

0П р и м е р 3. Пример диагностического

.исследования в динамике заболевания.

Девочка в возрасте 3 мес., 27-й день заболевания. Диагноз: ОРВЙ, двухсторонняя пневмония с затяжным течением. Про5 ведено исследование в динамике заболевания одновременно с постоянным, лицом эталоном с относительными значениями показателей ФЧ - 132% и ИАФ-120%. Результаты исследования представлены в

0 таблице.

По результатам исследования было сделано заключение о выраженной недостаточности иммунной защиты при первом исследовании и заметном снижении уровня

5 показателей при втором исследовании в сравнении с показателями при выздоровлении.

При исследовании в динамике 19 детей с бронхолегочной патологией было установ0 лено снижение показателей относительно периода выздоровления у всех детей. Формула изобретения Способ диагностики иммунодефицит- ного состояния, включающий приготовле5 ние мазков крови с последующим учетом величины фагоцитоза в сравнении с контролем, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве фагоцитарных объектов используют эритроциты, окрашенные анилиновым красителем,

и производят двойной контроль, для чего предварительно формируют группу доноров, определяют в ней границы крайних значений показателя в процентах к его средней величине, а величину фагоцитоза учитывают одновременно в мазке пациента и в мазке донора, при этом регистрируют число активных, малоактивных и неактивных фагоцитов во всех мазках, подсчитывают сумму объектов, поглощен- ных активными фагоцитами, и Делят ее на

общее число неактивных и малоактивных фагоцитов, затем по результатам исследования донора рассчитывают среднюю величину фагоцитарного показателя для группы доноров с последующим расчетом в процентах результата исследования у пациента относительно этой средней величины, и при значении показателя ниже его минимального уровня в группе доноров диагностируют иммунодефицитное состояние.