Здесь А - сигнал при избыточной концентрации в положительном образце, В - уровень неспецифической фоновой активности.
Параллельно провбдят анализ согласно инструкции по применению набора реактивов для радиоиммунологического анализа антител к поверхностному антигену гепатита В с использованием радионуклида 1251 (РИА-анти-НВз-125). Результаты, получен- ные при проведении анализа в таком режиме, дают значение отношения А/В, равное 149.
Таким образом, увеличение отношения А/В в предлагаемом способе по сравне- нию с прототипом говорит об увеличении качества работы тест-системы и запаса прочности набора реактивов. При этом значительно уменьшается время на проведение анализа.
П р и м е р 2. Извлекают флаконы с положительными и отрицательными контрольными образцами анти-HBs и пробирки из коробки, выдерживают 30-40 мин при 18-25°С. Пробирки нумеруют (1-3) - для положительного контрольного образца. (4-10) - для отрицательного контрольного образца, (11-42) - для исследуемых образцов, устанавливают пробирки в штатив. Вскрывают флаконы. Готовят разведения положительного контрольного образца б 1000,2000,4000,8000,16000,32000,128000, 256000 раз.
В пронумерованные пробирки с помощью пипетки вносят реактивы: в пробир- ки 1-3 - положительный контрольный образец, в пробирки 4-10 - отрицательный контрольный образец, в пробирки 11-12 - положительный контрольный образец, разведенный в 1000 раз, 13-14 - разведенный в 2000 раз и т.д. по две пробирки на каждое разведение по 0,1 мл.
Закрывают пробирки полиэтиленовой пленкой, которую закрепляют тонким резиновым кольцом. Далее анализ проводят еле- дуя примеру 1 до стадии определения значения отношения А/В.
Определяют нижнюю границу положительных результатов по формуле
Ым 2,1В + Мф, 2.1x111+240,8 473,9
Параллельно проводят анализ с аналогичными разведениями положительного контрольного образца согласно инструкции по применению набора реактивов для радио иммунологического анализа антител к поверхностному антигену гепатита В с использованием радионуклида 1(РИА-ан4О (Г
ти-HBs- I). обработка полученных результатов была проведена согласно этой инструкции.
Сравнение полученных результатов приведено в табл. 1.
Из данных табл. 1 следует, что предлагаемый способ позволяет увеличить чувствительность тест-системы в 2-4 раза по сравнению с прототипом,
П р и м е р 3. Анализ осуществляют, как описано выше, при этом первую инкубацию проводят на Water bath shaker type 357 с различными значениями частоты, амплитуды и времени инкубации. Вторую инкубацию проводят согласно прототипу.
Полученные результаты представлены в табл. 2. сравнение проводят по отношению значений А/В.
Таким образом, значения частоты перемешивания 300-350 об/мин, амплитуды 3-4 см и времени первой инкубации 2-2,5 ч позволяет достигнуть максимального значения отношения А/В, которое является критерием выбора как качественный показатель.
П р и м е р 4. Анализ проводят, как описано выше, до стадии второй инкубации. Вторую инкубацию проводят на Water bath shaker type 357 с различными значениями частоты, амплитуды и времени инкубации. Полученные результаты представлены в табл. 3, сравнение проводят по отношению значений А/В.
Таким образом, значения частоты перемешивания 300-350 об/мин, амплитуды
3-4 см и времени второй инкубации 1-1,5 ч позволяют достигнуть максимального значения отношения А/В, которое является критерием выбора как качественный показатель.
Итак, использование перемешивания при проведении первой инкубации контрольных и исследуемых образцов позволяет сократить вре.мя инкубации до 2-2,5 ч вместо 12-16 по прототипу, а использование перемешивания при проведении второй инкубации с меченным 1251 поверхностным антигеномвируса гепатита В сократило время инкубации до 1-1,5 ч (по прототипу
4-6 ч). При этом чувствительность тест-системы увеличилась в 2-4 раза по сравнению с прототипом.
(56) Инструкция по применению набора реактивов для радиоиммунологического анализа антител к поверхностному антигену вируса гепатита В с использованием радионуклида 1251 (РИА-АНТИ-НВ8-125). УзНИ- ИНТИ, Ташкент, 1990.
Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ определения антител к антигену вируса гепатита дельта | 1990 |
|
SU1751681A1 |
| ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К HBs-АНТИГЕНУ И БЛОКАТОР В ТЕСТ-СИСТЕМЕ | 2001 |
|
RU2206095C1 |
| СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ГЕПАТИТА В | 2007 |
|
RU2367960C2 |
| ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИ-HBS В БИОЛОГИЧЕСКОМ ОБРАЗЦЕ | 2005 |
|
RU2290642C2 |
| ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА ГЕПАТИТА В И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В | 2006 |
|
RU2325655C9 |
| СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К MYCOBACTERIUM LEPRAE НА ТВЕРДОМ НОСИТЕЛЕ | 2010 |
|
RU2468371C2 |
| Способ определения антител класса I @ М к корантигену вируса гепатита В | 1988 |
|
SU1642399A1 |
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВНЕПЕЧЕНОЧНОЙ ПЕРСИСТЕНЦИИ ВИРУСНЫХ АНТИГЕНОВ В ТКАНЯХ У ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ В, ИЛИ ДЕЛЬТА, ИЛИ С | 1998 |
|
RU2146825C1 |
| ПАНЕЛЬ СЫВОРОТОК, СОДЕРЖАЩИХ АНТИТЕЛА К АНТИГЕНАМ HCV РАЗНЫХ СУБТИПОВ | 2010 |
|
RU2456617C2 |
| СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ИЛИ АНТИТЕЛА В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗЕ | 2007 |
|
RU2376604C2 |
Таблица 2
Формула изобретения
СПОСОБ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕ- СКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ПОВЕРХНОСТНОМУ АНТИГЕНУ ВИРУСА ГЕПАТИТА В, предусматривающий первую инкубацию контрольных и исследуемых образцов с иммобилизованным на твердой фазе поверхностным антигеном вируса гепатита В, удаление несвязавшихся компонентов и отмывание твердой фазы, вторую инкубацию с меченым I поверхностным
Таблица 3
антигеном вируса гепатита В, удаление несвязавшихся компонентов, смывание твердой фазы и регистрацию остаточной радиоактивности, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени определения антител и повышения чувствительности
способа, первую инкубацию проводят при перемешивании с частотой 300 - 350 об./мин и амплитуде 3 - 4 см в течение 2 - 2,5 ч, а вторую инкубацию проводят при перемешивании в аналогичных условиях в течение 1 - 1,5ч.
