Способ определения антител класса I @ М к корантигену вируса гепатита В Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 A61K39/29 

Изобретение относится к медицинской биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано для диагностики вирусного гепатита В.

Цель изобретения - упрощение способа.

На твердую фазу сорбируют антитела к Ig M человека, затем вносят исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиеся в них Ig M связываются с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавляют меченый антиген, который взаимодействует со связанными

специфическими Ig M Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце анти- НВс класса Ig M.

Согласно предлагаемому способу в качестве меченого компонента используют меченый кор-антиген, который взаимодействует с антителами класса Ig M, предварительно связанными с сорбированными на твердой фазе антителами к Ig M человека.

НВс Ад высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е. coli.

Јь

го со о ю

НВс Ад метят радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европия или любой другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакциях.

Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого в иммунологических реакциях на стадии сорбции первого слоя.

Изобретение позволяет упростить процесс определения антител класса Ig M к кор-антигену вируса гепатита В. При этом чувствительность метода не снижается. Кроме того, исключается необходимость использования крови человека,

Пример. Определение анти-НВс класса Ig M в радиоиммунологической реакции.

На твердую фазу сорбируют антитела против тяжелых цепей Ig M человека в концентрации 10 мкг/мл в объеме 0,1 мл в 0,05 М карбонат-бикарбонатном буфере, рН 9,5, в течение 16-18 ч при +4°С. После трехкратной отмывки дистиллированной водой в лунки вносят разведения испытуемых человеческих сывороток 1:t02, 1:103 и т. д. до

1:10 по 0,1 мл в 0,4 М Na-фосфатном буфере, рН 7,2-7,4, содержащем 0,15 М хлорида натрия, 0,1% тритона Х-100 и 0,1% бычьего сывороточного альбумина. После инкубации в течение 1-2 ч при +37°С лунки отмывают 5-6 раз дистиллированной водой и вносят раствор меченного 1251 НВс Ад в том же фосфатном буфере. После инкубации с антигеном 1-2 ч при +37°С следует отмывка

5-6 раз. Затем лунки вырезают и определяют их радиоактивность ву-счетчике. Результаты, полученные по известному и предлагаемому способам, совпадают, т. е. чувствительность обоих методов не отличается.

Формула изобретения Способ определения антител класса Ig М к кор-антигену вируса гепатита В. включающий проведение на твердой фазе иммунологической реакции между антителом и антигеном с использованием меченого компонента, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве меченого компонента используют кор-антиген, а антитела класса Ig M из испытуемых образцов связывают с сорбированными на твердой фазе антителами к Ig M человека.

Изобретение относится к медицинской биотехнологии, связано с генной инженерией и касается диагностики вирусного гепатита В С целью упрощения способа на твердую фазу сорбируют антитела к Ig M человека, вносят исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиеся в них Ig M связывают с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавляют меченый антиген, который взаимодействует со связанными специфическими Ig M. Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце антител класса Ig M. Кор-антиген высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е coli Антиген метят радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европия или другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакциях. Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого в иммунологических реакциях со