СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ БОВЕРИИ BEAUVERIA BASSIANA BALS (VUILL) Советский патент 1968 года по МПК C12N1/14 

Изобретение относится к способам .размножения одного из возбудителей белого мускардиоза на питательных средах с мелассой.

Известны способы выращивания боверии на Стерильных средах в стерильных условиях. При осуществлении этих способов делают больщие затраты на стерилизацию среды, оборудования и помещения.

Известен способ выращивания боверии на среде, предварительно прокипяченной и стерилизованной антибиотиками, например стрептомицином.

По предложенному способу конидиоспоры перед посевом на среду,с мелассой предварительно проращивают. Это позволяет избежать губительного влияния аспергиллов и пенициллов, попадающих на поверхность среды из воздуха. Кроме того, мелассу, как один из компонентов среды добавляют под одно-двухсуточную культуру гриба.

Благодаря этому устраняют стерилизацию среды в автоклавах и ограничиваются простым кипячением в течение 20-30 мин, во время которого набухшие споры грибов теряют жизнеспособность.

Пример приготовления питательной среды и .выращивания гриба.

твор выливают в 8 уг кипящей воды, добавляют 10 г КН2Р04 и 10 г хлористого натрия и все это кипятят в течение 30 мин. При использовании муки тонкого помола можно кипятить 20 мин. После кипячения рН среды доводят серной кислотой до 5,0-5,2. Готовую среду в горячем состоянии разливают в чистые эмалированные кюветы размером (30-35)Х(35- 45) см, которые помещают в несколько ярусов в термостаты или этажерки.

После остывания среды производят посев на ее поверхность спор боверии. Посевной материал должен легко оседать на поверхность среды, так как даже иезначительное погружение проросщих спор в среду, например, под давлением струи пульверизатора, вызывает ее загрязнение другими грибами из воздуха. Чтобы не забивался пульверизатор во время посева, инокулиум фильтруют через один слой предварительно прокипяченной марли.

Первые пять дней температуру для роста мицелия поддерживают в пределах 22-23°С. Более высокие температуры, особенно в первый день, могут привести к сплошному загрязнению аспергиллами и пенициллами.

При образовании пленки гриба под нее подливают мелассы. Для этого 400-500 г мелассы добавляют в 2 л водопроводной воды и выливают в кюветы под пленку по 100- 200 см. К этому времени студенистая питательная среда разжижается и образовавшаяся на ней пленка гриба легко отделяется от среды. Легким приподниманием одной стороны кюветы перемешивают разбавленную мелассу. Имеющаяся в мелассе обильная бактериальная флора, которую невозможно обезвредить кипячением, в продуктах жизнедеятельности боверии не развивается и не оказывает на него отрицательного влияния. Необходимо, чтобы рН разбавленной водой мелассы соответствовал рН среды под пленкой (4,5-4,2).

После появления белой пленки в термостатах воздух поддерживают влалшым, для этого в них готовят кюветы с водой.

На шестой-седьмой день мицелий слегка темнеет и на его поверхности появляются капельки жидкости. Это является признаком массового созревания спор. Под пленку желательно подлить водопроводной воды, а влажность воздуха уменьшить, открыв дверцы термостата. За сутки капельки.на пленках исчезнут и споры можно снимать для просушивания. Просушивание проводят в открытом помепхении в кюветах. При температуре 22-23°С споры высыхают за два-три дня в зависимости от влажности воздуха в помещении. 4 С 1 м. пленки собирают до 30 г спор, что позволяет приготовить 2,5-3,0 кг стандартного препарата боверина.

Предмет изобретения

Способ размножения боверии (Beauveria bassians Bals (Vuill) на полужидкой питательной среде с мелассой, включающий посев конидиоспор, отличающийся тем, что, с целью устранения стерилизации среды, конидиоспоры предварительно проращивают, а мелассу добавляют под одно-двухсуточную культуру

гриба.