СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМНУКЛЕОЗи Советский патент 1969 года по МПК C07H19/20 C07B59/00 

Известен способ получения меченных нуклеозидфосфатов путем выращивания соответствующей оиомассы на среде, содержащей радиоактивный лредшественник, .пилучеиные при этом меченые нуклеиновые кислигы известными способами выделяют и гидролизуют. При этом получают меченый ну,клеозидмонофОСфат, который лодвергают очистке от продуктов радиолиза, на смоле Дауэкс-i, а затем - ферментативному фосфорилированию. Таким образом получают меченые луклеозидди- и трифосфаты. Эта методика трудоемка, ведет к больщим потерям дефицитного меченого нуклеозидмонофосфата.

Для упрощения лродесса предложен способ получения меченных тритием «уклеозидмонофосфатов или нуклеозиддифосфатов или нуклеозидтрифосфатов, заключающийся IB том, что нуклеоаидтрифосфат, нанесенный на инертный носитель, лодвергают тритированию газоойразным тритием в условиях высокочастотного электрического разряда лри теамлературе 100-150°С, лолученную лри этом смесь меченных тритием иуклеозидмоно-, дии трИфосфатов подвергают обработке формиатом аммония на смоле Дауэкс-1 в формиатной форме. Получают индивидуальные продукты, которые подвергают концентрированию путем обработки активироваиным углем, а затем раствором аммиака.

В качестве нуклеозидтрифосфата можно применять аденозинтрифосфат, гуалозилтрифосфат, цитидинтрифосфат, уридинтрифосфат или их дезоксипроизводные.

Пример 1. Тритирование проводят в стеклянной амлуле со впаянным электродом, вокруг которого помещают нанесенный на стекловату трифосфат. На стекловату наносят оОО мг аденозинтрифосфата (АТФ). В-ремя

тритирования в условиях высокочастотного газового разряда 30 мин. Температура в лроцессе тритирования 120-130°С.

После окончания тритирования вещество смывают со стекловаты водой и далее лабильный тритий замещают ла водород путем обмена с водой и вакуумной отголки.

В табл. 1 приведены данные ло снятию лабильного трития при тритировании АТФ (объем, удельная активность и общая активность лри трех подледовательных отгонках воды в пленочном испарителе при давлении 18 мм рт. сг).

Остаток АТФ в колбе после трех отгонок растворяют в 20 см дистиллированной воды,

Разделение нуклеотидов по степени фосфорилирования и очистку от продуктов радиолиза проводят «а колонке длиной 20 см и диаметром 1,2 см, заполненной .смолой Дауэкс 1X8 в формиатной форме с размером частиц смоТаблица 1

щают в верхнюю часть колонки, и элюцию ведут градиентом концентрации формиата аммония (от О до 1,7 моль/л).

В табл. 2 приведены количества и удельные .активности толученных моно-, ди- и трифосфатоВ аденозина.

Таблица 2

Концентрирование аденозинфоофатов осуществляют сорбцией на угле марки «Карборафин. С угля последние смывают аммиачно-опиртО|ВОЙ омесью и далее лиофильно высушивают. Проверка радиохимической Чистоты с ломощью бумажного горизонтального электрофореза показала электрофоретическую однородность продуктов.

На профиле активности имелся только один Пнк, отвечающий соответствующему нуклеотиду.

Предмет изобретения

Способ получения меченных тритием нуклеозид-монофосфатов, или нуклеозид-дифосфатов, ИЛИ «уклеозид-трифосфатов, с нрименением очистки полученных нуклеозид-фосфатов от продуктов радиолиза на .смоле Дауэкс-1, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, нуклеозид-трифосфат, нанесенный на инертный носитель, подвергают тритирова«ию газообразным тритием в условиях высокочастотного электрического разряда при температуре 100-150°, полученную при этом смесь меченных тритием нуклеозид-моно-, дии трифосфатов подвергают обработке формиатом аммония на смоле Дауэкс-1 -в формиатной форме с последующим концентрированием полученных -индивидуальных продуктов путем обработки активированным углем, а затем спиртовым раствором аммиака.

2. ОпосОб по п. 1, отличающийся тем, что в качестве нуклеозид-трифосфата используют аденозин-трифосфат, гуанозин-трифосфат, цитидин-трифосфат, уридин-трифосфат или их дезоксипроизводные.