СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ ИЗ ТКАНИМОЗГА Советский патент 1970 года по МПК A61K38/43 

Изобретение относится к области биохимии.

Известен способ выделения ацетилхолинэстеразы из лиофильно высушенного порошка ткани мозга с помошыо детергента, например, путем обработки бутанолом с последуюидей экстракцией фосфатным буфером. Однако получаемые при этом препараты обладают сравнительно невысокой стабильностью и ак- вностью.

Целью настоящего изобретения является повышение эффективности извлечения фермента и получение активных стабильных препаратов.

Для достижения этой цели при выделении ацетилхолинэстеразы из лиофильно высушенного порошка ткани мозга с помошью детергента лиофильно высушенный порошок обрабатывают смесью детергента с растворителем жиров, например октанола с гексаном, в отношении 1:1.

Согласно предложенному способу сырую ткань мозга теплокровных животных (хвостатые ядра бычьего мозга и мозга кошки) или хладнокровных животных (рыб, моллюсков отделяют от остатков других тканей, измельчают, гомогенизируют в небольшом объеме воды, доводят рН до 8 аммиаком и лиофильно сушат. Сухой порошок обрабатывают 20-кратным количеством смеси детергента и

растворителя жиров, например октанола с гексаном, в течение 15 мин, дают отстояться и сливают верхний слой. Затем обрабатывают повторно 10-кратным количеством смеси растворителей, вновь отстаивают и сливают верхний слой, а осадок трижды промывают гексаном. Остаток сушат в вакууме, экстрагируют водой или 0,01-м фосфатным буфером (рН 7,8) и центрифугируют. Ацетилхолинэстераза переходит в раствор в количестве 60- 70%.

Растворы препарата, полученные из ткани мозга теплокровных животных, неустойчивы в кислой среде, и поэтому из них необходнмо удалить балластные белки путем фракционирования сульфатом аммония при рН 6,5-6,8. При концентрацни сульфата аммония 25% выпадают балластные белки, а при 50% - в осадок переходит ацетилхолинэстераза. Этот осадок отделяют центрифугированием и растворяют в дистиллированной воде. При использовании растворов, полученных из мозговой тканн хладнокровных животных, балластные белки отделяют сначала добавлением соляной кислоты до рН 4,5, а затем сульфата аммония до концентрации бОэ/д. Ацетилхолинэстераза выпадает в осадок при концентрации сульфата аммония 80%. 3 батывают аммиаком до рН 7,8, центрифугируют, и прозрачные растворы обессоливают на молекулярных ситах или диализом. После стериальиого фильтрования растворы разливают в ампулы или лиофильно высушивают.5 , Иредмет изооретения Сиособ выделения ацетилхолинэстеразы из 4 ткани мозга с помощью детергента, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности извлечения фермента и получения активных стабильных препаратов, лиофильно высушенный норошок ткани мозга обрабатывают смесью детергента с растворителем жир например октаиола с гексаном, в отношенни 1 : 1.