СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИПТОФАНА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ В КРОВИВСЕСОЮЗНАЯ Советский патент 1971 года по МПК G01J3/00 

Известен способ количественного определения метаболитов триптофана в крови, заключающийся в хроматографическом разделении проб кровн, выявлении триптофана и его метаболитов, элюировании, окрашивании и количественном колориметрическом определении. Этот способ приемлем только для определения больших количеств метаболитов в крови, а потому недостаточно точен и чувствителен.

Предложенный способ позволяет выявить минимальные количества триптофана и его метаболитов в крови и более прост но технике выполнения. Он заключается в том, что непосредственно после элюирования определяют концентрации триптофана и его метаболитов спектрофотометрически по степени поглошения ультрафиолетовых лучей, при максимуме поглош,ения для триптофана, равном 280 им, для атраниловой кислоты-330 нм и для индола-270 нм.

Техника определения триптофана и его метаболитов по предложенному способу заключается в следуюшем.

К 3 мл гепаринизированной крови добавляют 12 мл ацетона и выдерживают при +4°С 24 час; экстракт отделяют от осадка фильтрованием, ацетон упаривают и досушивают лиофильно. Сухой остаток расторяют в 0,1 мл 48%-ного этанола и 0,02 мл наносят на хроматографическую бумагу. Разделение производят методом восходящей хроматографии в н-бутаноле, ледяной уксусной кислоте и воде при отношении 4:1:1. Пятна триптофана я его метаболитов обпаруживают с помощью ультрафиолетового хемископа, вырезают и элюируют в 4 мл 70%-ного этанола в течение 2 час, затем спектрофотометрируют против контрольного элюата. Расчет производят по формуле:

Р ,. Сс И,

где Ст - количество триптофана, аптраниловой кислоты или индола;

и-экстипкция испытуемого вещества при 280 нм для триптофана, при 330 нм - для антраниловой кислоты и при 270 нм - для индола; Сс - количество триптофана, антраппловой кислоты или индола в стандартном растворе, нанесенное па хроматограмму;

с - экстннкция элюата, полученная при указанных длинах волн.

Предмет изобретения 3 проб крови и выявление триптофана и его летаболитов, элюирование и количествеииос и:; определепие, отличающийся тем, что, с целью более точного количествеппого определения триптофана п его метаболитов, после элюиро-5 вания определяют их концентрацию снектрофотометрически по степени поглощения ультрафиолетовых лучей. 4 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, то спектрофотометрпческое оиределеппе триптофапа п его метаболитов производят по дгачс ;мальпому поглощению ультрафиолетовых лучей для триптофана при 280 нм, а определепие метаболита триптофана антрапиловоп кислоты - при 330 нм, метаболита индола- при 270 нм.