ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ SERRATIA MARCESCENS 44 — ПРОДУЦЕНТА НУКЛЕАЗЫ Советский патент 1972 года по МПК C12N1/20 C12N9/10 

Изобретение относится к ферментной промышленности.

Известна питательная среда для выращивания Serratia marcescens 44- продуцента нуклеазы, содержащая воду и хлористый натрий. Кроме того, она содержит: глюкозу, сернокислый аммоний, кислотный гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, двузамеще1нный фосфорнокислый калий, магний сернокислый и железо сернокислое.

Цель изобретения-увеличение выхода и повышение активз-юсти готового препарата.

Предложенная питательная среда для получения препарата нуклеазы содержит воду и хлористый натрий в количестве 0,5 г, глицерин, цитрат аммония, одпо.замещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, сернокислое железо, гидролизат казеина, дрожжевой автолизат.

Среда прозрачная, имеет светло-коричневый цвет.

Указанные компоненты введены в количестве, соответственно равном, 5; 5; 10; 0,5; 0,05; 1; 3 на 1000 мл воды. Причем рН среды равно 7,6.

вают 0,5%-:ным физиологическим раствором, засевают в объеме 1 мл в колбах со 100 мл жидкой среды вышеуказанного состава и выращивают три постоянном встряхивании (200 об1мин) IB течение 10-12 час.

Подготовленный таким образом -посевной материал засевают в ферментер из расчета 500 тысяч-1 млн. микробных клеток на 1 мл среды.

Количество «леток в среде определяют на ФЭК-М54 с красным фильтром в 3-миллиметровых кюветах; 0,2 единицы оптической плотности соответствует 1 .млрд микробных клеток в 1 мл.

Условия культивирования, оптимальные для образования нуклеазы:

исходный рН среды7,6

температура культивирования, °С27±0,5

оптимальная аэрация и перемешивание среды (время ферментации) 48 час

По окончании ферментации культуральную жид|кость подвергают цен1)рифу1ГИ|ро В:анию для отделения от микробных .клеток. Нуклеазу очищают методом фракционного насыщения сульфатом аМмония с последующей хроматографией.

Пример. Соответствующим образом подготовленный посевной материал засевается ИЗ расчета 500 тыс.-1 мл:н. микробных клеток на 1 мл среды.

Фермента-ция проводится 48 час при 27°С при постоянном (перемешивании и интенсивной аэрации. Оптическая плотность среды, измененная на ФЭК-М54 с красным фильтром в 3-миллиметровых кюветах, за 48 час инкубации достигает 1,8-2,0 оптических единиц, дезокоирибону«леа;31ная (ДНК) активность 50- 60 тысяч виокозиметричеоких единиц на 1 мл или 7,5 мкм расщеплениото субстрата ДНК в мин/мл.

Бактериальные клетки отделяются центрифугированием. Фермент из надосадочной жидкости очищается осаждением сульфатом аммония с Последующей хроматографией на колонке с ДЭАЭ целлюлозой и сефадек|СомУ-100.

Предмет изобретения

1.Питательная среда для выращиваиия Serratia marcescens 44-(продуцента нуклеазы, содержащая воду и хлористый натрий в количестве 0,5 г, отличающаяся тем, что, с целью увеличения выхода и активности фермента, продуцируемого Serratia marcescens, питательная среда дополнительно содержит глицерин, цитрат аммония, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, сернокислое железо, гидролизат казеина, дрожжевой автолизат.

2.Питательная среда ио п. 1, отличающаяся тем, что указанные комланенты введены в количестве, соответственно равном, 5; 5; 10; 0,5; 0,05; 1; 3 г на 1000 мл воды.

3.Питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что рН среды равно 7,6.