1СЕСОЮЗНАЯ WTEKTHQ-TEXH^HECHAR Советский патент 1973 года по МПК A61K39/13 

1

Изобретение относится к производству вирусных препаратов.

Известны способы получения антигена вируса полиомиелита для реакции связывания комплемента путем вырандивания вируса на культуре ткани обезьян с последующей его инактивацией гидрокснламином и лнофилизацией. Однако указанные способы не обеспечивают получения вируссодержащих суспензий с высокими титрами в производственных условиях.

Целью изобретения является получение вируссодержащих суспензий с высокими титрами. Эта цель достигается тем, что в качестве субстрата для выращивания вируса, например, щтамма Бруненд тип 1, щтамма МЕР типа 2, щтамма Сокетт тип 3, используют культуру клеток миндалины обезьяны.

Вирус полиомиелита вносят в культуру клеток в дозе 0,1 -1,0 БОЕ на клетку и инкубируют в течение 24-48 час при 36-37°С.

Для .получения антигена вируса полиомиелита для реакции связывания комплемента в соответствии с изобретением клетки МИО (перевиваемая линия клеток миндалины обезьян) выращивают при 37°С с использованием питательной среды 199 с 10% сыворотки крупного рогатого скота и 0,02 ед. инсулина до образования полного монослоя. Перед заражением вирусом культуральную среду удаляют и инфицируют клетки вирусом полиомиелита (например, тип 1 щтамм Бруненд, тип 2 штамм МЕР, тип 3 щтамм Сокетт) из расчета 0,1 -1,0 БОЕ на клетку. После 1 часа адсорбции цри комнатной температуре в матрицы добавляют поддерживающую среду (среда Игла, содержащая 2% нормальной крысиной сыворотки и 0,3% глюкозы, по 100 мл в 1 л матрац). Инфицированные культуры инкубируют при 36-

37°С в течение 24-48 час до дегенерации не менее 90% клеток. Затем клетки отделяют от стекла и центрифугируют вируссодержащую жидкость в течение 20 мин нри 2000 об/мин. Осадок клеток ресуспендируют в 0,1 объема

надосадочной жидкости и подвергают трехкратному замораживанию при минус 20°С и оттаиванию в холодной воде. Полученный препарат осветляют центрифугированнем (25 мин, 3000 об/мин) и добавляют к надосадочной жидкости антибиотики (по 200 ед/мл пенициллина и стрептомицина). Для инактивации к 5,5 частям антигена добавляют 1 часть 6,5 М раствора солянокислого гидроксиламина рН 9,0 при инактивации вирусов типа 1 и 3 и

рН 7,5 при инактивации вируса типа 2. После инкубирования в течение 48 час нри комнатной температуре инактивированный антиген диализуют против фосфатного буферного раствора (на 100 мл антигена 10 л буферного раствора), осветляют центрифугированнем

(20 мин при 3000 об/мин) и разливают в ампулы типа БЦЖ по 2 мл, после чего подвергают лиофильному высушиванию.

Предмет изобретения

1. Способ получения антигена вируса полиомиелита для реакции связывания комплемента путем выращивания вируса на культуре ткани обезьян с последующей его инактивацией и лиофилизацией, отличающийся тем, что,

с целью получения вируссодержащих суспензий с высокими титрами, в качестве субстрата для выращивания вируса, например щтамм Бруненд типа 1, штамм МЕР тип 2, Сокетт тип 3, используют культуру клеток миндалины обезьяны.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что вирус полиомиелита вносят в культуру клеток в дозе 0,1 -1,0 БОЕ на клетку и инкубируют в течение 24-48 час при 36-37°С.