СПОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА ГРУППЫ АКСЕНОМИЦИНОВ Советский патент 1973 года по МПК C12P1/06 A61K35/70 

1

Известен способ получения а«ти:биотиков аксеномицина А и аксеном-ицина В, заключающийся ,в том, что культуру Streptomyces lisandri F. I. 2604 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в течение 60-160 час при температуре 23-37°С и при рН среды 6,0-9,0. Комплекс аксеномицийов Лив выделяют экстракцией с последующим его разделением на аксеномицин А и аксеноМИЦИН В.

Целью предложенного .изобретения является получение аксеномицина Д, который отличается от аксеномицина Л и аксеномицина В по физико-химическим свойствам.

По предлагаемому способу культивирование продуцента осуществляют при интерсивности аэрации 0,7-2,0 л воздуха «а 1 л среды в минуту и при интенсивности перемешивания, соответствующей расходу энергии 2-4 бт на 1 л среды, а источник углерода в среде составляет не менее 10%.

Пример 1. Колбу емкостью 2000 мл, содержащую посевную среду, стерилизуют при 120°С в течение 20 мин. Среда имеет следующий состав (%): декстрин-4, карбонат кальция-0,5, кукурузное сырье-1,0, .казеин-1,0, сульфат аммония-0,2, дикалийфосфат-0,01, вода - до 100.

Колбу Инокулируют суспензией спор, смытых с 4 -косяков 15-Дневной культуры, выран;енНой на картофельно-глюкозо-агаровой среде.

Культуру инкубируют при 28°С в течение 48 час на круговой качалке при 120 об/мин.

50 мл суспензии этой культуры используют для инокулпрования стеклянного ферментера емкостью 5 л, содержащего 3 л среды, имеющей описанный выше состав. Содержимое ферментера перемешивают со скоростью 500 об/мин двумя турбинно-дисковыми пропеллерными мешалками с режущими крыльями и продувают воздух со скоростью 0,7 л/л среды в минуту. Процесс ведут в течение 24-28 час при температуре 27-28°С.

Затем полученной суспензией инокулируют стеклянный ферментер емкостью 5 л, содержащий 3 л питательной среды, которая имеет следующий состав (%): глюкоза-10-12, соевая мука-3, кукурузное сырье-2,0, карбонат кальция-1,0, хлористый натрий-0,25, соевое масло-0,5, вода - до 100. КоличестТзо вносимой суспензии составляет 5% от объема питательной среды.

Ферментацию проводят в течение 136 час при ностояином перемешивании со скоростью 500 об/мин двумя турбиппо-дисковыми пронеллерными мешалками с шестью режущими плоскостями, продувку воздухом ведут со скоростью 1 л/л среды в минуту. После окончания ферментации получают следующие результаты:Концентрация Аксеномицин Д, -(/лл глюкозы, % Пример 2. Ферментацию проводят в условиях, описанных в примере 1, в ферментере ем.костью 5 л, используя среду, содержащую 12% глюкозы, с добавлением различного количества KHgPO4ПрИ этом получают следующие результаты: Концентрация Аксеномицин Д, мл КН,РО,. % Пример 3. Ферментацию проводят в ферментере емкостью 5 л, используя среду, содержащую 12% глюкозы, в условиях, описанных в примере 1, при перемешивании со скоростью 500-650 o6JMUH, -скорости подачи воздуха от 1 до 1,7 л1л среды в минуту и получают следующне результаты: Пример 4. В стальной ферментер емкостью 80 л, содержащий 50 л среды, имеющей состав, опИсаиный в примере 1, вносят 500 мл суспензии культуры, выращенной в колбе емкостью 2000 мл в условиях примера 1. Инкубацию проводят в течение 24 час при перемешивании и аэрации. Затем полученной суспензией засевают ферментер из нержавеющей стали емкостью 500 л, в котором находится 300 л питательной среды, имеющей еледующий состав, %: глюкоза-13,0, -соевая мука - 3,0, кукурузное сырье - 2,5, карбонат кальция-1,2, хлористый натрий - 0,25, соевое масло - 0,6, вода до 100. После 136 час инкубации при 28°С при перемешивании двумя турбийно-дисковым-и пропеллерными мешалками, имеющими восемь режущйх плоскостей (поглощаемая мощность 2,5 вт1л) при интенсивности аэрации 0,7 л1л в минуту и противодавлении 1 атм активность культуральной жидкости составляет 3050 At. Мицелий, -собранный при фильтровании 14 л культуральной жидкости, экстрагируют двумя порциями бутанола по 4 л. Экстракты объединяют и концентрируют до объема 300 мл. Осадок, полученный после центрифугирования, п-ромывают этиловым эфиром и сушат в вакууме. Полученный таким образом продукт растворяют в метаноле, фильтруют, пр-опускают через колонку с кремниевой кислотой и элюируют сорбированный целевой продукт смесью этилацетат : метанол : вода (125:25:17). В процессе элюирования наличие целевого продукта контролируют методом тонко-слойной хроматографии. Первые фракции (около 2 л элюата) отбрасывают. Последующие фракции содержат ак-сеномицин Д, который выделяют после отгонки растворителя в вакууме. После кристаллизации из смеси метанол - изопропанол получают 7 г целевого продукта. Аксеномицин Д растворим в спиртах, нерастворим в воде и бензоле, плав-ится при 174- 175°С с разложением, а D -}- (с 0,5 метанол); / 0,35 над силнкагелем (этилацетат :изопропанол:вода 100:35 : 5). УФ-спектр аксеномицина Д имеет максимумы при 250, 255 и 330 и плечо при 265- 26-8 mti. Е - 1 см 138 (255 mix). Инфракрасный спектр имеет следующие частоты: 3400, 2980, 2950, 2890, 1735, 1705, 1675, 1630, 1610, 146:5, 1385, 1355, 1290, 1265, 1195, 1170, 1115, 1080, 1050, 1005, 995, 975, 945, 925, 896, 865, 810, 700 см-. Состав по данным анализа, %: 60,25 С, 7,92 Н, 30,35 О. Аксеномицин Д обладает высокой антигельминтн-ой и противогрибковой активностью и активностью лрот-ив простейших. Антигельминтную активность проверяют на группах мышей (численность каждой группы 10 штук), экспериментально зараженных Hymenolepis папа. Аксеномицин Д вводят перорально между 12 и 20 днем после заражения (результаты экспер-имента приведены ниже). Острая токсичность аксеномицина Д, выраженная через LDso, для мышей составляет 200 мг1кг при пероральном введении. Предмет изобретения 1. Способ получения антибиотика группы аксеномицинов путем аэробного выращивания культуры Streptomyces llsandri I. М. R. U 3935 (Streptomyces lisandri F. I. 2604) на жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли, в тече5иие 60-160 час при температуре 23-37°С и при рН среды 6,0-9,0 с последующим выделением целевого продукта обычными приемами, отличающийся тем, что, с целью получения аксеномицина Д, культивирование осу-5 ществляют пр« интенсивности аэрации 0,7- 6 2,0 л воздуха на 1 л среды в минуту и при интенсивности перемешивания, соответствующей расходу энергии 2-4 вт на 1 л среды, 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что источник углерода в среде составляет не менее 10%.