СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЛЕПТОСПИРОЗА Советский патент 1973 года по МПК G01N33/53 

1

Изобретение относится к способам диагностики заболеваний сельскохозяйственных животных, например лептоспироза.

Известны способы диагностики лептоспироза у животных реакцией микроагглютннации лизиса. Реакцию проводят с сывороткой крови, взятой из яремной вены.

Однако при взятии крови животные могут быть травмированы и на эт операцию затрачивают много времени.

Предложенный способ диагностики лептоспироза у животных реакцией микроагглютинации лизиса отличается тем, что реакцию микроагглютинации лизиса осуществляют с плазмой спермы животных.

В сперме зараженных животиых появляются агглютинииы и лизины.

Для реакции применяют цельную свежеполучеиную сперму, которую для отделеиия спермпев от плазмы ставят в холодильник при 2-5° не менее чем на 3 час или цеитрифугируют в течение 10-15 мин. при 3,5-4 тыс. об1мин. Берут 0,2 мл верхнего слоя центрифугата или отстоявшейся плазмы спермы и добавляют к 1,8 Л1Л физиологического раствора, делают последовательные разведения 1:20, 1:40, 1:80 1:160, 1:320 и т. д.

Для реакции берут по 0.1 мл (2 капли) каждого разведения плазмы и добавляют 0,1 мл атигена. Антигеном служит шести-десятидневная культура лентоспир (не менее 50 лептоспнр в поле зрення микроскопа) с хорошим ростом без феномена самоагглютинации. В контрольную пробирку добавляют по 0.1 мл антщ-ена и физиологического раствора. После добавления аитигена пробирки осторожно встряхивают и ставят в термостат при 35,5 0,5° иа 2 час.

Результаты реакции учитывают под микроскопом в темпом поле. Из каждой пробирки готовят «раздавленную каплю и рассматривают ее под микроскопом. Устанавливают фе иомен лизиса и агглютинации по наличию «паучков (склеиваиию лептоспнр между собой но 3-10 и более экземнляров).

Для изучения динамики титра в снерме по сравнению с сывороткой крови 13 взрослых кролнков заражают четырехсуточной культурой штамма L роиюпа «Манихино с концеитрацией 80-90 лентоспир в поле зрения микроскопа. Культуру вводят подкожно и виутрибрюшиино (10-40 лгл каждому кролику) .

Коитрольиыми являются кролики, которым вводят внутрибрюшиино Н нодкожно по 20 мл среды с добавлением сыворотки крови для выращивания лептоснир. Иаблюдение ведут после заражения на протяженти полутора лет, одновременно исследуют но реакции микроаптютииации лизиса титр антител в сыворотке крови и плазме спермы. Интервалы исследоваипй в первые два месяца 10 дней, далее

.30 дней. Антитела в плазме спермы появляются почти одновременно с антителами в сыворотке крови.

На двадцатый день иосле заражения титр антител в сыворотке крови и плазме спермы 1:2560-1:44580. Тнтр в крови и сперме к тридцать пятому дню достигали максимума (в разведении до 178.240), который удерживался до пятидесятого-пятьдесят пятого дня.

Затем как в сыворотке крови, так и в плазме спермы титр антител уменьшался. У одного КЗ кроликов десять месяцев после заражения титр антител в сыворотке крови и плазме спермы снижается до 1:320, а через двенадцать месяцев - в сыворотке крови он был равен 1:40, а в плазме спермы - отрицательный. У други.х опытных животны.х наблюдают

расхождению титра 1-2 разведергия 1з сторону уменьшения его в плазме спермы по сравнению с сывороткой крови.

Динамика иакопления и угасания титра агглютининов в сыворотке крови и нлазме спермы представлена на диаграмме (см. чертеж:- титр сыворотки крови, - - титр плазмы спермы).

П р е д м е т и з о б р е т е н и я

Способ диагностики лептоспироза реакцией микроагглютинации лизиса, отличающийся тем, что, с целью исключения травмирования животных при взятии крови и сокращения времени на установление д 1агноза, реакцию микроагглютинации лизиса осуществля:ю,т с плазмой спермы животиых.

.56 9 Ве 79 93100 3 Дни после

1В9

1В5

R