Способ получения щелочной протеазы Советский патент 1982 года по МПК C12N9/50 

() СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЩЕЛСМ НОЙ ПРОТЕАЗЫ

1

Изобретение относится к фермент ной отрасли микробиологической промышленности, в частности к способу получения щелочной протеазы.

Известны способу получения щелочной протеазы путем выращивания ее про{1уцентрв - бактерий из группы Bacillus subfills или Bacillus mesentericus Ha питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза .ферментов при постоянной температуре, рН, аэрации, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости. При выращиваниипродуцентов в течение всего процесса культивирования в свободном пространстве ферментера поддерживается избыточное давление на уровне 0,3-0,5 кгс/см с целью устранения попадания посторонней микроопоры из внешней среды l ,

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемо

му положительному эффекту является способ получения комплекса ферментных препаратов путем выращивания их продуцентов - бактерий из группы Васi1lus subfilis на питательной среде, содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последую10щим выделением ферментов из культуральной жидкости, в котором процесс культивирования начинают при повышенной температуре, а затем снижают до 37°С, аэрацию осуществляют постадий15но, увеличивая количество подаваемого воздуха с 0,35 до 1,0 .мин, рН среды, в случае щелочной протеазы, поддерживают в интервале 6,t6,3, а-концентрацию источника угле20рода на уровне .. Выращивание Bacillus subfnis-12 при указанных режимах позволяет получать протеолитическую активность 12000ед/мл. по 3 методике ФОЛП (опытно-промышленный регламент производства гранулирован ной щелочной протеазы, действующий на Ладыжинском заводе ферментных пре паратов) 21 . Однако культивирование продуцентов щелочной протеазы по известному способу не обеспечивает оптимальных условий массообмена, сорбции кислорода и десорбции двуокиси углерода на различных стадиях выращивания. Цель изобретения - увеличение ак тивности фермента. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентов - бактерий из группы Bacillus subfilis, на питательной среде, -содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением фермзнта из культуральной жидкости, в процес се .культивирования дополнительно регулируют и давление в ферментере путем поддержания его в период интенсивного роста культуры до начала стационарной фазы в пределах 2,0-0,8 кгс/см, в в период активного синтеза фарментов снижая его до 0,50,2 кгс/см.

Пример 1. В ферментер емкостью 63 м .загружают 31,5 м стерильной питательной среды, в состав которой входит крахма.п, казеин, БВК, кукурузная мука, кукурузный экстракт и фосфорнокислый двузамещенный аммоний, Доводят температуру среды до , подают 1800 воздуха на аэрацию, производят посев культуры Bacillus subfilis-12 и поднимают давление в ферментере до 1,0 кг/см . 8 период активного рос-та биомассы, до начала стационарной фазы в течение первых 2 ч давление в ферментере поддер хивают на уровне 1,0кгс/см после 2 ч давление снижают до 0,3 кгс/см, оставляя его таким до конца культивирования. Активность в конце выращивания ед/мл (по методу ФОЛП). Без постадийного изФормула изобретения

Способ получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентов бактерий из группы Bacillus subfilis на питательной среде, содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности фермента, в процессе культивированир дополнительно регулируют и давление в ферментере путем поддерживания его в период интенсивного роста культуры до начала стационарной фазы в пределах менения давления активность культуральной жидкости в конце ферментации 12000 ед/мл. Пример 2. В ферментер емкостью 63 м загружают 31,5 м стерильной питательной среды, в состав которой входит крахмал, казеин, БВК, кукурузная мука, кукурузный экстракт и фосфорнокислый двузамещенный аммоний. Доводят температуру до , подают 1800 воздуха на аэрацию, производят посев культуры Bacillus subfiIis-72 и поднимают давление в ферментередо 2,0 кг/см. В период активного роста биомассы, до начала стационарной фазы в течение первых 2k ч давление в ферментере поддерживают на уровне 2,0 кгс/см, после 2 ч давление снижают до 0,2 кгс/см, оставляя его таким до конца культивирования. Активность в конце выращивания 13500 ед/мл (по методу ФОЛП). Без постадийного изменения давления активность культув конце ферментаральнои жидкости они 12000 ед/мл. Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить активность щелочной протеазы на 1520. Ожидаемый экономический эффект от внедрения изобретения при плановом выпуске 750 товарных тонн в год составит 1 ,.32 млн.руб.

5889б4б

2,0-0,8 кгс/см, а в период ак- 1. Калунянц К.А., Голгер Л.И. тивного синтезе ферментов снижая Производство ферментных препаратов до 0,5-0,2 кгс/см.из грибов и бактерий. М., 1970.

Источники информации, s № 39511, кл. С 12 D 13/10, 1975 принятые во внимание при экспертизе (прототип).

2. Авторское свидетельство СССР