Питательная среда для культивирования FUSаRIUм GRамINеаRUм-продуцента галактозооксидазы Советский патент 1990 года по МПК C12N1/14 C12N1/14 C12R1/77 

Изобретение относится к микробиологической и химической промьппленно- сти, касается состава питательной среды для культивирования Fusarium draminearum ИМВ F № 1060 - продуцента галактозооксидазы (D-галактоза i : кислород-оксидоредуктаза 1.1.3.9).

Целью.изобретения является повышение выхода галактозооксидазыо

Питательная среда для культивирования штамма, включающая источники амминного азота, углеводов, витаминов и минеральные соли, содержит в качестве индуктора накопления галактозооксидазной активности гидролизат соевых бобов после вьщеления уреазы.

Соевый гидролизат готовят слё- дуюшим образом

Размолотые соевые бобы после экстрагирования 70%-ным этиловым спиртом для выделения уреазы в количестве 100 г заливают 1 л деминерализованной воды с 10 мл концентрированной фосфорной кислоты и выдерживают в течение 4 ч при t 55-60 С при постоянном перемешивании.

ш

( с

После охлаждения гидролизат фильтруют и нейтрализуют 30%-ным КОН до рН 6,9-7,1 и лиофильно высушивают.

Использование лиофияьновысуиен-

ного гидррлизата соевых бобов в питательной среде способствует не только повышению выхода биомассы и увеличению активности галактозооксидазы а культуральной жидкости Fusarium

raminearum ИМВ F № 1060, но и сни- Лает пигментацию культуральной жид- йости.

Гидролизат отходов соевых бобов содержит ряд аминокислот в количест- ее 0,6 - 1,2 мг/г препарата, относительно большое количество аргинина, аспарагина, глютамина и может служить дополнительны источником аммин Ного азота и благоприятствовать рост микробиальных клеток. Использование амминного азота в дополнительном его источнике (гидролизате) приводит к увеличению синтеза белков, а значит, и ферментов, в том числе галактозо- оксидазы.

Одновременное введение с гидроли- затом фосфатов калия способствует стабилизации микробиальной среды (играют роль буфера), кроме того,

клетка использует их как дополнительный источник фосфора и калия. Культуральная жидкость при примене- НИИ гидролизатов соевых бобов после вьщеления уреазы имеет гораздо мешьшую пигментацию, что улучшает качество целевого продукта.

Пример 1. Питательная среда содержит, г/л:

Галактоза10,0

Мочевина 9,0

Дрожжевой экстракт2,0

Гидролизат отходов соевых бобов4,0

Калий фосфорнркис-

лый однозамещенный5,0

Натрий фосфорнокис- льй двузамещенный7 3

Магний сернокислый0,2

Марганец сернокислый 0,02

Медь сернокислая0,05

Вода деминерализо- ваннаяДо 1 л

рН6,9

Оживление штамма Fusarium grami- nedrum ИМВ F № 1060 осуществляют на среде указанного состава в кача- лрчных колбах. Инкубируют в термокамере при 28 С в течение 72 ч на качалке при 240 об о/мин.

В ферментационные колбы (среда та же) переносят посевной материал из расчета 6-8%. Инкубирование ведется при на качалке при 240 об./мин в течение 72-80 ч, до достижения в культураш ной жидкости 2,4 едо/мл галактозооксидазной активности (СФЛ-540 нм). Мицелий предварительно отфильтровывается о

Выход: активность 2,50 еДо/мл культуральной среды.

Из примера 1 видно, что добавление гидролизата отходов соевых бобов в качестве 4,0 г/л приводит к увеличению активности фермента.

Выделение фермента осуществляют известные способе.

И р им е р 2, Питательная сред содержит, г/л:

Галактоза15,0

Мочевина10 0

Дрожжевой экстракт2,5

Гидролизат отходов соевых бобов6,0

Калий фосфорнокислый однозамещенный5,5 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 8,0 Магний сернокислый0,025 Марганец сернокис- льй0,025 Медь сернокислая0,05 Вода деминерализо- ванная До 1 л рН .7,0 Выращивание и адаптацию культуры, инокуляцию посевного материала, ферментацию культуры проводят аналогично примеру 1.

Выход: активность 2,45 ед./мл культуральной жидкости

Из примера 2 видно, что добавление гидролизата соевых бобов 13 количестве 6,0 г/л приводит к повьшению активности галактозооксидазы.

Пример 3. Питательная сред содержит, г/л:

Галактоза20,0

Мочевина11,0

Дрожжевой экстракт3,0

Гидролизат отходов соевых бобов8,0

фосфорнокислый однозамещенный6,0 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 8,5

Магний сернокислый Марганец сернокислыйМедь сернокислая Вода деминерализованнаяРН

Выращивание, адаптацию культуры, инокуляцию посевного материала, фер- ментацию культуры проводили аналогично примеру 1,

Выход: активность 2,40 едо/мл культуральной жидкости.

Как видно из примера 3, добавление гидролизата отходов соевых бобов в количестве 8,0 г/л приводит к повышению активности галактозооксидаэы.

Технико-экономический эффект изобретения заключается в повьшёнии выхода единиц фермента 2500 едо/л и ферментной активности до 2,5 ед./мл, а также в снижении пигментации культуральной жидкости, что в свою очередь облегчает дальнейшее вьзде- ление и очистку целевого продукта.

599431

Формула изобретения

) Питательная среда для культиви-

рования Fusarixim graminearum ИМВ с F iP 1060 - продуцента талактозоокси- дазы, содержащая галактозу, мочевину, дрожжевой экстракт, од нозамещенный фосфат калия, двузамещенный фосфат натрия, сернок,исльш магний, серно- 10 кислый марганец, сернокислую медь и деминерализованную воду, о т л и - чающаяся тем, что, с целью повьшения выхода галактозооксидазы, питательная среда дополнительно со- 15 держит гидролизат соевых после вьщеления уреазь при следующем соот- нощении компонентов, г/л:

Галактоза10,0-20,0

Мочевина9,0-11,0

Дрожжевой экстракт2,0-3,0 Гидролизат соевых бобов после выделения уреазы4,0-8,0 Однозамещенный фос

фат калия5,0-6,0 Двузамещенный фосфат натрия7,5-8,5 Сернокислый магний0,2-0,3 Сернокисльй марганец0,02-0,03

Сернокислая медь .0,,06 Деминерализованная

водаДо 1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно касается составов питательных сред для культивирования FUSARIUM GRAMINEARUM ИМБ F N 1060 - процудента галактозооксидазы. Цель изобретения - повышение выхода галактозооксидазы. В питательную среду дополнительно вводят гидролизат отходов производства соевых бобов после выделения уреазы в количестве 4,0-8,0 г/л среды при следующем соотношении компонентов, г/л : галактоза 10,0-20,0

мочевина 9,0-11,0

дрожжевой экстракт 2,0-3,0

калий фосфорнокислый однозамещенный 5,0-6,0

натрий фосфорнокислый двузамещенный 7,5-8,5

магний сернокислый 0,2-0,3

марганец сернокислый 0,02-0,03

медь сернокислая 0,05-0,06

деминерализованная вода до 1 л, PH 6,9-7,1. При этом достигаются следующие характеристики по отношению к галактозооксидазе : активность 2,5-2,4 ед/мл культуральной жидкости, выход 2500-2400 ед/л.