СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТОВ Советский патент 1973 года по МПК C07K1/18 

1

Изобретение относится к способу разделения полиэлектролитов, таких как белки, нуклеиновые кислоты, нентиды или нуклеотиды, на амфотерных ионообменных смолах. РТспользование последних для разделения пекоторых классов соединений, например иопов металлов, хорошо известно. Однако известные до сих пор амфотерные ионообменпики неэффективны для разделения названных выше классов полиэлектролитов.

Б соответствии с изобретением предложе1г способ разделепня полиэлектролнтов, например белков, нуклеиновых кислот, пептидов, или пуклеотидов, заключаюгцийся в том, что для разделения используют амфотерные, гидрофильные иоггообменннки, включаюшие одновременно ocnoBin ie азотеодержащне и карбоксильные или сульфогруппы, в которых соотношение осповпых н КИСЛОТ1П51Х гругн является стехиометрическим.

В используемых согласно изобретению амфотерных ионообменниках матрицей служа, например, агар, сефадекс или целлюлоза, вследствие чего иопообменники хорошо набухают в водных растворах, и разделяемые полиэлектролиты могут легко пропикать в полимерный гель. Этого не происходит в амфотерных нонообменниках, ранее применявшихся для хроматографии. В качестве биполярных ионов

к матрице присоединяют различными способа1 ги аминокислоты или их производные.

Пример 1. Колонку (58,5X1 см) с сефадексом G-75, к которому присоединен с номош;ью бромциапа р-аланин (около 0,75 мэкв р-аланина на 1 г сухого веса), уравновешивают 0,12 М раствором ацетата аммония с рН 6,0 (рН раствора доводится до 6,0 добавлением уксусной кислоты). В колонку помещают 1 л/..

раствора, содержан):его 100 мг яда кобры (Naja nigricollis toxin), после чего колонку промывают аммонийацетатным буферным раствором. Анализ элюата с колопкп показал, что яд кобры разделен на Н1есть отдельных комнонент.

Пример 2. Колонку (44,5X1 см) с целлюлозой, к которой с номощью энихлоргидрнна нрисоединеп глицин (около 0,2 мэкв глицина на 1 г сухого веса), уравновешивают 0,02 М

ниридинацетатным буфером с рН 5,0. В колонку помещают I -MscivreeH олиголизинов (L,-Ью) и колонку промывают пиридинацетатным буфером с рИ 5,0 так, что копечпая копцептрация уксусной кислоты 0,15 М. Элюат апализировали с номощью нингидринового реактива. На кривой элюции видно десять четко разделеппых компонент, соответствующих лпзину, дилизину, трилизину и т. д.

пример 3. Колонку (37,1 X 1,4 см) с агарозой (6% агарозы и 94% воды), к которой с

помощью бромциана присоединен аргинин (0,248 мэкв аргинина на 1 г сухого веса), уравновешивают 0,01 М трис-ИС буферным раствором с рН 7,5. В колонку помешают 25 мг продукта неполного ферментативного гидролиза ДНК из вилочковой железы теленка, растворенного в 5 мл буферного раствора. Адсорбированные нуклеиновые кислоты элюируют и линейном градиенте буферны.х растворов: 250 мл исходного и 250 мл раствора, 1М относительно уксусной кислоты и 1М относительно хлористого натрия. Получены четыре фракции при соответствуюших объемах, равных 66,3; 76,5; 98,1 и 107,1 мл.

Предмет изобретения 1. Способ разделения полиэлектролитов.

таких как белки, нуклеиновые кислоты, пептиды или нуклеотиды, путем хроматографии на амфотерных, гидрофильных ионообменниках, отличающийся тем, что, с целью увеличения 5 эффективности разделения, используют ионообменники, включающие одновременно основные азотсодержашие и карбоксильные нли сульфогруппы, в которых соотношение основных и кислотных групп является стехиометрическим.

2. Способ по п. I, отличающийся тем, что иснользуют ионообменники, матрицей которых являются полиакриловая кислота, полиакриламид, декстран с поперечными связями, агар или целлюлоза.