СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ Советский патент 1973 года по МПК A61K35/36 

Изобретение относится к способам получения биологических стимуляторов роста животных.

Известны способы получения политканевых препаратов из тканей животных в асептических условиях.

Отличительной особенностью данного способа является то, что используют ткань молодых ЖИ1ВОТНЫХ, предварительно подвергнутых длительному голодаиию с последующим глубоким заморажИВанием. Это позволяет получать более эффективные препараты, которые оказывают стимулирующее действие на живой организм.

Способ осуществляют следующим образом.

Отбирают здоровых, среднего веса, наприм вр, 7-8-суточных цыплят, помещают в клетки и подвергают полНОму голоданию (при наличии воды) 70-120 час при температуре воздуха 20-25° С. За это время цыплята теряют (В весе 20-31%. Периодически, через каждые 6-10 час, начиная с 70-72 час и до 120 час голодания, отбирают самых слабых цыплят и поме,щ,ают на твердую углекислоту для глубокого замораживания.

Последовательно каждую замороженную партию немиого оттаивают, у цыплят обрезают крылья, ноги, головы и снимают кожу вместе с перьями. Обработку производят в

стерильных условиях при те.мпературе воздуха ле выше 10°С.

С туШКи цыпленка срезают поперечнополосатую мыщечную ткаиь, сразу же помещают на твердую углекислоту ч хранят до тех пор, пока будет собрана тка1нь со всей партии цыплят. Замороженную ткань измельчают ножницами, на мясорубке и на гомогенизаторе при 8000 желательно до состояния мелкого заморожениого норощка, который Небольшими порция.ми помещают в гомогенизатор с охлажде 1ием, заливают 8-10 объемами холодной 0,1 .V соляной КИСЛОТЫ и экстрагируют ири 8000 об.мин 8-10 мин с перерыВОЛ1 для охлаждения температуры в стаканах.

Экстракт отделяют центрифугирован1ием при 5400-5700 20-30 ишн, а затем фильтруют под вакуумо1М через 2-3 слоя бумал ного обеззолеиного фильтра.

Осадок .вторично экстрагируют в гомогенизаторе с 5-6 объемад1и холодной 0,1 Л соляной кислоты, центрифугируют и фильтруют. Для более полной экстракции операцию можно повторить еще раз. Полученный осадок выбрасывают.

В экстракте устанавливают рП 3,1-3,35 с помощью еДКОГо кали, перемещивают и оставляют на холоде .на 10-12 час.

Затем устанавливают рН 5,25, перемещя вают и оставляют на холоде в течение 5- iO час, центрифутируют при 5200-5700 об/лшн 15-25 мин и фильтруют под вакуумо1м. В экстракте .проверяют рН 5,25 и помещают на холод-экстрлкт I. Полученный осадок заливают объемами холодной 0,1 Л соляной кислоты и эк;страгируют Б гомогенизаторе при 8000 об/мин 7-9 мин. Устзнавлл-гвают рН 3,2-3,5, оставляют на 10-12 час на холоде, затем устанавливают рН па 5,2-5,3, выдерживают на холоде, цептрнфутируют, фильт1руют. Получают экстракт II с рН 5,2-5,3. Осадок зал1Нвают небольшим объемом холодного уксуснокислого калия € рН 5,2-5,3 (рН уста1на1вл.ивают уксусной кислотой) и экстрагируют 7-9 мин. Экстракцию проводят на холоде .небольши ми порциями. Раствор с солью рН 5,2-5,,3 помещают в холодильник на 10-15 час, затем центрифулируют при 5200-5700 об/мин 25-30 ишн, фильтруют под вакуумом экс-практ III. Осадок заливают небольшим объемом холодной б,ид),истиллир0ванной воды с рН 5,2-5,3 экстрагируют на мешалке, выдерживают на холо-т,е несколько часов, центрифугируют :н фильтруют экстра.кт IV. Осадок выбрасывают. Экстракт I и II сливают вместе, экстракт III и IV слИвают1в другую емкость. Высушивание производят лиофильным способом до лухообразного порошка. У д а л е н ,и е с о л и Сухой .порошок из экстракта III и IV взвешивают, заливают 1концен-пр1нрова.нным холодным этиловым спирто.м 1ИЗ расчета 1200- 1500 мл спирта «а 20-22 г сухого порошка, экстрагируют «а мешалке и помещают .в холодильник до появлен.ия плотного осадка. Осадок отделяют путем фильтрования под вакуумом и см ,еши.вают с сухим порошком из экстракта I и II. Объединенный осадок растворяют .в небольшом объеме холодной биднстиллироваиной .воды и при энергичном перемеши.валии в этот ipacTBOp вводят холо.дный кондентрирова.нный химически чистый ацетои до содержания его в растворе 78%. Помещают -в холодильник до ооедания плотного осадка, центрифупируют и фильтруют. Раствор больше не нужен. Осадок заливают концентрированным ацетоном, отделяют и подсушивают в вакуумкамере пр.и комнатной температуре. Зал1Н.вают небольщим количеством холодного серного эфира и экопрагируют «а мешалке, отстаивают, осадок отделяют и сушат при .комнатной температуре. Сухой осадок растирают IB мелкий , заливают холодным 60%-ным ацетоном с рН -3,0 (рН устанавливают соляной кислотой), экстрапируют -и отстаи(вают осадок. Затем промывают новыми .порциями 60%-iioro ацетона с рН 3,0, от.ста1ива.ют и фильтруют. Осадок выбрасывают. Экстракты III и IV сливают, -измеряют объем объединенного фильтрата, вычисляют содержание в «ем ацетона н воды и .вновь вводят холодный 1концентр ирова«ный ацетон с рН 3,0 до содержания его IB растворе 78%. Выпа1вший осадок отф.ильтровывают и операцию повторяют еще 2-3 раза. Осадок выбрасывают. Все филЬ|Т)раты объединяют вместе, помещают в вакуумный испаритель и при температуре 30-35° у.даляют ац.етон. Вы д le л е н и е активных веществ Раствор, |Содержащий ор.гаиические вещества, охлаждают едким калием, устанавливают рН 5,8-5,9, выпавший осадок удаляют фильтрацией. В раствор при помешивании вводят 25%-.ный аммиаК в избытке до рН раствора 10,8-11,0, при этом образуется белый осадок aiKTHBHbix веществ, его номещают 1на холод, затем фильтруют под вакуумом. Осадок физиологически активных веществ вместе с фильт|ром растворяют в .небольшом объеме 0,1 Л соляной кислоты, упшр.ивают при тем1пературе не выше 35-40°С на /4 своего объема, затем добавляют небольшое количество воды и выпаривают насухо. Порошок должен быть абсолютно сухим, только при этом условии он сохраняет овою а.ктивность при хранении. Выход сухого порошка активных веществ из мышечной ткани приблизительно 0,14% от веса сырой тка.-ни. Упаковка и хранение Высущенный 1порошок в сухом помещении растирают в ступке, засыпают в предва|р Ительпо вымытые, прасте1рил:изованные и высушенные ампулы, объемом 1 мм и запаивают. Хранят ;в испарителе холодильника без доступа света. Активность препарата не менее года. Оп.исаиным способом могут быть получены физиологическ и активные вещест1ва, представляющие из себя нуклеотидпептиды из других тканей и органов лсивотных других видов. Полученные физиолопически активные вещества испытывались на увеличение привеса животных. Испытания показали, что действие препарата зависит от дозы, веса и возраста животного. С увеличением веса и возраста действие .препарата увеличивается. Минимальная действующая доза, наименьшая .для животных перед полным прек|р ащением ими роста, увеличива1ется по мере старения животного 1я гораздо значительнее с уменьшением веса и возраста животных. Минимальная действу ющая доза дает наибольший эффект в наиболее ко.роткий срок, с у;величением дозы продолж.ительность действия препарата увеличивается, а величины дополнительного прироста за тот же срок уменьшаются. Например, оптимальные дозы nipenaipaia для петухов весом 1400-1700 г 0,029 .;г//-:г, весам 1900-2000 г 0,024 жг/кг (возраст 116-270 суток) и 0,08 м, для петухов весом 2300- 2700 г (1возраст 2 года 7 мес.). Эти дозы вызывают за 11 суток опыта соответственно 32,8; 38,9; 91,7% дополнительного прироста.

Порошок физиологически активных веществ, разведенный в физиологическом растворе при рН 4,5-4,8, (ВВОДЯТ животным Б утри м ышечн о.

Предмет изобретения

Способ получения физиологически а-ктивпых веществ, включающий, получение и измельчение тканя, экстрагирование, цантрнфупирование, высущиваиие, отличающийся тем, что, с целью повыщения их эффективности, ггспользуют ткань молодых животных, предварительно подвергнутых длительному голоданию с последуюи;им глубоким замораживанием.