СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЗНОГО АНТИГЕНА Советский патент 1973 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к области медициь пы, а имеино к микробиологии.

Известен сиособ получеиия геитенцеллюлозного агнтигена иуте.м сов.местиого гидролиза нитроцеллюлозы л .гик1роб|НОЙ .массы в 1 мл 10%-HOiro раетвора КОН, добавлен ия раствора бриллиантовой зелени : 500, нейтрализации щелочи уксусной .кислотой, центрифугирования и разведеиия осадка физиолотическим раотворо.м.

Одиако геитенцеллюлозные антигены, нолу. чае.мые из .м.икробов указавньш еиособом, не сохра-ияют сиецифичиости антигенов.

Предлагаемый способ отличается от извеетлого тем, что Л1икробную .массу вносят в раетвор гидролизованной нитроцеллюлозы после ее 11ейт(рализации и пидролизуют иа водя.ной баие при рН 5 и 100°С .в течеиие 2-3 мин.

При.мер. В иробирку по.мещают 50 мг высушенной нитроцеллюлозы в виде плеики (или один .мембраиный фильтр) и зате.м туда же добавляют 1 мл 3,5% КОИ. Пробирку, легко встря.хивая, подогревают иа пламени горелки до бурного вскипания щелочи и полного растворения пласти.нки нитроцеллюлозы с образованием желтоватой жидкости. В пробирку вгосят пастеровской пипеткой сначала 2 капли бриллиантовой зелени 1 : 100, зате.м добавляют 2 капли крепкой уксусной кислоты и заливают 1 мл дистиллированной воды. В результате в пробирке образуется сюиная среда цветного раствора целлюлозы, .имеюо ая слабо кислый рП 5. В эту среду вносят необходимое количество микробов в объе.ме 0,1-0,2 .MJ, которое нодб1 рают опытным путе.м. Так, количество микробов туляремии должно составлять 2-5 мл1рд по кишечиому оитичееко.му стандарт}- пр;и исиользоваи.и бактериального диагиоетику.ма; чл.мы (,ва1кц;1на ЕУ) - 2-2.5 млрд м;1кроб11ы. клеток; .холеры (вакцина) - 20-40 .млрд ми кробных тел. Пробирку со смесью по.мещают в водяную баню, доводят до 100°С 41 2-3 мин. Затем иробафку с суспензией охлаждают, центрифугируют нрн 1500-2000 об/мин 5-10 мин, сливают :1адосадочную жидкость, а осадок промывают 2 фаза дистиллироваи)ой водой. С этой целью к осадку добавляют 3-5 .мл дистЧ1ллирова1 ной воды, ресусиеидируют его и взвесь цеитрифугируют. Процедуру повторяют дважды. После этого к иолучеиному осадку чаегиц зеленого цвета добавляют 1 .ил 1%-ного раствора нормальной сыворотки, ресуспендируют путе.м встряхивания, и цветной целлюлозиый аитигеи-диагиостикум готов к прпменеиию. Это будет концент|р1прованпый ЦАГ-д 1агностикум, из которого приготовляют рабочее разведение его путем доразведения в 5-10 раз тем же раствором нормальной лошадиной сыворотки.

Для постаа-ювки агглютинации применяют оба а нтигена, если используют копцептрированпый ЦАГ-Диагностикум, то он закапывается с помощью пастеровской пипетки с тонко оттянутым капиллярОМ, а в случае нрымененяя рабочего /раствора ЦАГ - его наносят обычшой ластеровской пипеткой. Препараты ЦАГ-диатностику.мов представляют собой цветную (Взвесь частиц целлюлозы со специфическими свойствамн. При стоянии они оседают, образуя достаточно плотный цветной осадо;К, надосадочная жидкость просветляется, становится прозрачной или слегка окрашенной. Перед применением цветные целлюлозные антигены ресуспенди,руют с помощью энергичного встряхиван-ня в п-роб-ирке с закрытой резиновой пробкой.

Хранение ЦАГ-диагностикумов осуществляют в пробирках (при длительном хранении целесоооразно дооазить ,в препарат мертиолат в конечной концентрации 1:10 тыс) на холоду при . Препараты длительно сохраняют свою активность.

Предмет изобретен и я

1.Способ получения целлюлозного антигена из Микробов путем гидролиза нитроцеллюлозы щелочью, добавления красителя, нейтрализации щелочи уксусной кнслотой и центрифугирования, отличающийся тем, что, с целью сох|ранения специфичности анпигенов, микробЩю массу вносят В раствор гидролизоваиной

нитроцеллюлозы после ее нейтрализации и гидролнзуют иа водяной бане.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что гидролиз микробной массы проводят при рН 5 н 100°С в течение 2-3 мин.