СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРПУСКУЛЯРНЫХ ПРЕПАРАТОВ, Советский патент 1973 года по МПК A61K9/52 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к производству лекарственных препаратов.

Известен способ получения корпускулярных препаратов, содержащих биологическ активный низкомолекулярный компонент, например фолиевую кислоту, согласно которому фолиевую кислоту наносят на адсорбент, например активированный уголь.

Однако по такому способу возможна десорбция активного вещества по мере движения корпускулы к месту действия в организме с одновременной неспецифической сорбцией биологически а ктивных веществ, присущих самому организму.

С целью повышения избирательности действия целевого продукта в предлагаемом способе к биологически активному низкомолекулярному компоненту, например 6-меркантопурину, добавляют вещество, обладающее функционально активными группами, способными связаться с биологически активным низкомолекулярным веществом и полимером-носителем, например глутатион и йод, с последующим добавлением полимера-носителя, например белка « глутарового альдегида, до получения частип. размером 0,1 - 1 мк.

Пример 1. Получение корпускулярных препаратов на основе бычьего альбумина и 6-меркаптопурина.

Синтез проводят по известному методу, исходя из инозина. Общий выход в расчете на инозин 50%, т. пл. 211-213°С. -Найдено, %: N 19,48; S 11,36. CioHiaNbO S.

Вычислено, %: N 19,7; S 11,28. К раствору 56,8 мг рибозида 6-.меркаптопурин.а в 4 мл 0,1 М натрий-фосфатного -буферного раствора рН 7,5 добавляют 1 мл 0,5 .М раствора периодата натрия, смесь перемешивают 30 мин, добавляют 0,3 мл 1 М раствора этиленгликоля и перемещивают еще 5 мин. Затем реакционную смесь добавляют при перемещивании к раствору 268 мг бычьего

альбумина в 7 мл дистиллированной воды, поддерлчивая рЫ смеси на уровне 8,0-9,0 с помощью 5%-ного раствора углекислого калня. Перемешивание продолжают 45 мин при рН 9,0 и добавляют раствор 150 мг борпид0 рида натрия в 5 мл дистиллированной воды. Реакщ10)ную смесь оставляют на 18 час 20°С и рН 9,0-9,5 и затем наносят на колонку с сефадексом Г-25, уравновещенную 0,01 М натрий-фосфатным буферным раствором рН

5 7,0, для отделения белка от низкомолекулярных компонентов. Выделяют белковую фракцию (ириблизительно 30 мл. По данным УФ-спектроскопии и определения содержания азота по методу Кьельдаля эта фракция яв0 ляется конъюгатом бычьего альбуминя с

б-меркаптоПурином (Хмакс 314 нм и 280 нм), содержащем 18 молей меркаптопурина на 1 моль алыбумйна.

30 мл полученного раствора конъюгата концентр И(р уют до 10 мл и затем при 0°С добавляют 1 мл 25%-кого раствора глутарового .альдегида в дистиллированной воде. Реакционную смесь перемешивают 40 мин при 0°С и вводят в колонку с сефадексом Г-25, уравновешенную 0,14 М натрий-фосфатным буферным pacTBOipoM рН 7,5, для отделения корпускул я некондентрированного белка от глутарового альдегида. Фракцию, содержащую макромолекулы, подвергают гель-филь1|рации на колонке из сефарозы 2 В, ур-авновешенной тем же буферным раствором, и выделяют три фракции корпускулярных препаратов с размерами частиц: Оу1-1 мк (выход 10%); 0,1-0,05 мк, (выход 60%) и менее 0,05 мк (выход 30%). Размер частиц определяют по кривой ЭЛЮЦИ1И корпус-кул йЗ Кали.брованной (с целью определения молекулярного веса) колонки с сефарозой 2 В.

Аналогично получают корпускулярные препар.аты на основе яичного или бычьего аль.буминов с инозином, уридйном, азауридином и аденозинмо-нофоофатом.

Пример 2. Получение корпускулярных препаратов на основе яичного альбумина и смещанного дисульфида 6-меркаптопурина и глутатиона.

248 мл 6-меркаптопурина р астворяют при 45°С в 70 мл 0,01 М однозамещенного фосфата нат|рия, доведенного с помощью 5,0 М NaOH до рН Л 1,8. Раствор охлаждают до 30°С и добавляют за 2 мин при перемешивании восстановленный глутатион и по каплям раствор йода (3,5 мл 0,2 н). По окончании добавления раствора йода смесь подкисляют 85%-ной фосфорной кислотой до рН 5,,0 и затем добавляют 100 мг восстановленного глутатиона для восстановления выделившегося йода, после чего вновь подкисляют смесь до рН 5,0 с помощью 85%-ной фосфорной кислоты. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат вводят в колонку с биогелем Р-2, уравновешенную 0,01 М натрийчфосфатным буферным р-аствором рН 5,0. Элюцию ведут тем же буферным раствором при 4°С. Фракдии, содержащие дисульфид меркаптопурина и глутатиона, лиофилизируют, остаток растворяют в 0,01 М натрий-фосфатном буферном растворе рН 3,0 при 4°С, осадок отделяют и содержание смешанного дисульфида в растворе определяют с помощью УФ-спектроскоПИИ (Лмакс 280 нм). Содержание глутатиона в дисульфиде определяют при помощи реакции с нингидрином. Найдено, что весовое содержание глутатиона в дисульфиде составляет 65% (теоретическое значение 67%). Выход дисульфида 25% (в расчете на 6-меркаптопурии).

К перемешиваемому и охлажденному до 2°С раствору 100 мг -белка в 5 мл 0,01 М натрий-фосфатного буферного р-аствора (рН 7,0)

добавляют раствор 47 мг 6-меркаптопуринилглутатионилдисульфида в 4 мл того же буфера и 0,5 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида, через 35-40 мин реакционную смесь вводят в колонку с сефадексом Г-25

для отделения от глутарового альдегида, а затем белковую фрак-цию пропускают через колонку с сефарозой 2 В. Выделение фракций корпускул проводят, как описано в примере 1. Для определения количества 6-меркаптопурина в полученных корпускулах их гидролйзуют 0,2% раствором пеисина в 0,06 М соляной кислоте при 37°С в течение 16 час, затем доводят рН смеси до 8,0, добавляют 4 мг цистеина и выдерживают 30 мин; согласно данным УФ-спектра полученной смеси содержание 6-меркаптопурина (Хмакс 315 нм) в полученных корпускулах составляет 5 молей на 1 моль альбумина.

Предмет изобретения

Способ получения корпускулярных препаратов, содержащих биологически активный низкомолекулярный компонент путем нанесения последнего на носитель, отличающийся

тем, что, с целью повышения избирательности действия целевого продукта, к -биологически активному низкомолекулярному компоненту, например 6-меркаптопурину, добавляют вещество, обладающее функционально активными группа-ми, способными связаться с биологи.чески активным низкомолекулярным веществом и полимером-носителем, например глутатион и йод, с последующим добавлением полимера-иосителя, например белка и глутарового альдегида, до получения частид размером 0,1-1 мк.