СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МОНОАМИНОКСИДАЗЫ Советский патент 1973 года по МПК C12Q1/26 

1

Изобретение О7иоси ся к области биохимии.

Известен способ определения активности моноаминоксидазы (с использованием в качестве субстрата бензиламина), основанный иа снектрофотометрическом определении при К 250 нм количества циклического хромофора, образующегося при взаимодействии продукта реакции бензальдегида с циклогексаном.

Недостатком такого способа является нестабильность получаемых результатов, а также относительно невысокая чувствительность.

С целью новышення чувствительности и специфичности способа химическую обработку бензальдегнда проводят 2,4-динитрофенилгидразином в кислой среде.

Пример. Из бензиламина в забуференной среде инкубации в присутствии моноаминоксидазы (МАО) получают бензальдегид

МАО

О + NH.,-t-HvO.,

ч-НгО + О который в кислой среде подвергают взаимо- Ю действию с избытком 2,4-динитрофенилгидразина, нри этом образуется и кристаллизуется 0+H-zN--S -/ 1 I О н ч( После центрифугирования гидразон вынадает в осадок. Осадок гидразона в щелочной среде экстра-15 гируют в полярный органический растворисоответствующий гидрофобный гидразон (бурого цвета) тель (ацетон, этанол, я-бутанол и другие). При этом образуется хромофор малиново-розового цвета. Интенсивность окраски хромофора измеряют на фотоэлектроколориметре 3 (ФЭК) или спектрофотометре при А 460 ммк; она и служит мерой активности ионоаминоксидазы в биологическом материале. Предлагаемый способ обладает высокой чувствительностью: молярный коэффициент5 экстинции хромофора - 2,4-динитрофенилгидразона бензальдегида равен 23700 (при А,460 ммк), что намного превышает коэффициент экстинции как самого бензальдегида (13000 M-IXCM-I при Я,242 ммк),Ю так и других хромофоров, используемых в известных спектрофотометрических методах определения МАО. 4 Предмет изобретения Способ определения активности мопоаминоксидазы, заключающийся в том, что в пробу добавляют бензиламин, с последующим превращением бензальдегида в хромофор и спектрофотометрированием, отличающийся тем, что, с целью повыщения чувствительности и специфичности способа, обработку бензальдегида проводят 2,4-динитрофенилгидразином в кислой среде.