ШТАММ 268 ERWINIA CAROTOVORA, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ L-АСПАРАГИНАЗУ Советский патент 1973 года по МПК C12N1/20 C12N9/82 

1

Изобретение относится к области микробиологии.

Предложен новый штамм 268 Erwinia carotovora, продуцирующий L-аспарагиназу, характеризующийся тем, что представляет собой полиморфные палочки 0,6-0,9-2-4 мкм, конпы закруглены, расположены попарно или небольшими цепочками, граммотрицательные, капсулы и споры не образует; на мясопептонном агаре колонии серые, просвечивающиеся в проходящем свете, неправильно круглой формы, мелкие колонии имеют приподнятый центр в виде колпачка, центр слабо уплотнен; на картофельном агаре с дрол жевым экстрактом Колонии серовато-белые, слегка приподнятые с перламутровым блеском, края зазубрены, у молодых колоний центр возвышается, поверхность зернистая, колонии просвечивают; на бульоне Хоттингера равномерная муть с осадком и пленка; на глюкозе и манните слабо образует кислоту и газ, на лактозе и сахарозе образует кислоту без газа, мальтозу и сорбит не ферментирует, желатину разжижает медленно послойно, молоко слабо свертывает, нитраты восстанавливает до нитритов, аммиак че образует, быстро разрущает ломтики картофеля и моркови, выход L-аспарагиназы в полупроизводственных условиях составляет 10000-13000 МЕ/л культуральной жидкости

с активностью от 4,0 до 4,5 МЕ/мг сухого веса клеток, т. е. 8-9 МЕ/мг белка.

Штамм бактерии Erwinia carotovora 268 получен путем селекции культуры, выделенной из растительных остатков кукурузы.

Предложенный штамм 268 при культивировании при 28-30°С в колбах на качалке с 180 об/мин образует L-аспарагиназу на средах, содержащих в качестве источника азота пептон, гидролизат казеина, фосфат аммония; в качестве источника углерода - глюкозу, сахарозу, глицерин, цитрат натрия, аспарагин.

Пример 1. Посевной материал выращивают в течение 24--48 час на картофельном агаре. Состав ферментационной среды (%): Глюкоза.0,1

Гидролизат казеина0,5

Дрожжевой экстракт0,5

К2ПРО40,3

Начальное значение рН 7,7. После 18 час культивирования удельная активность L-аспарагиназы 7,1 Ме/мг белка, выход биомассы 1,55 г/л по сухому весу. При замене глюкозы на сахарозу удельная активность L-аспарагиназы составляет 6,3 Ме/мг белка, биомасса - 1,73 г/л. При замене глюкозы на L-аспарагин удельная активность L-аснарагнназы достигает 12 МЕ/мг белка, выход биомассы 1,1 г/л. В конце ферментации рН культуральной жидкости двух первых сред 8,75, среды с L-acnaрагином - 9,5.

Пример 2. Посевной материал, условия ферментации такие , как в нримере 1. Состав ферментационной среды (%): Цитрат натрия0,14

Пентон2,0

Дрожжевой экстракт0,3

К2НР040,3

Удельная активность L-аснарагиназы составляет 9,0 МЕ/мг белка, выход биомассы 1,2 г/л.

L-асцарагиназа, выделенная разрушеннем клеток ирессом или толуолизацией, нроявляет активность в широком дианазоне значений рН: от 3,7 до 10,2 и имеет онтимум действия при рН 7,25.

Предмет изобретения

Штамм 268 Erwinia carotovora продуцирующий L-аспарагиназу, характеризующийся тем, что представляет собой полнморфные палочки 0,6-0,9-2-4 мкм, концы закругленные, расположены поиарно или небольшими цепочками, граммотрицательные, капсулы и споры Мё образует; на мясопептонном агаре колонии серые, просвечивающиеся в проходящем свете, неправильно круглой формы, мелкие колонии имеют приподнятый центр в виде колпачка, центр слабо уплотнен; на картофельном агаре с дрожжевым экстрактом колонии сероватобел э1е, слегка прииодпятые с перламутровым блеском, края зазубрены, у молодых колоний

центр возвышается, поверхность зернистая, колонии просвечивают; на бульоие Хоттингера равномерная муть с осадком и пленка; па глюкозе и манните слабо образует кислоту и газ, на лактозе и сахарозе образует КИСЛОТУ

без газа, мальтозу и сорбит не ферментирует, желатину разжижает медленно послойно, молоко слабо свертывает, нитраты восстанавливает до нитритов, аммиак не образует, быстро разрушает ломтики картофеля и моркови, выход L-аспарагиназы в полупроизводственных условиях составляет 10000-13000 МЕ/л культуральной жидкости с активностью от 4,0 до 4,5 МЕ/мг сухого веса клеток, т. е. 8-9 МЕ/мг белка. ,