СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГУАНОЗИН-5'-ДИФОСФАТА Советский патент 1973 года по МПК C07H19/20 

1

Изобретение относится к усовершенствованному способу выделения соединения, которое применяется в биохимических исследованиях.

Известен способ выделения гуанозин-5-дифосфата из продажного препарата, содержащего гуанозин-5-монофосфат и отщепившийся неорганический фосфат. Очистку гуанозин-5дифосфата осуществляют методом хроматографии на ионообменных смолах. Выход гуанозин-5-дифосфата составляет 70-75%.

Однако известный способ обладает рядом сундественных недостатков, важнейшим из -которых является трудоемкость процесса очистки. Кроме того, в очищенных препаратах содержится аналитически трудоопределяемые примеси, которые мешают применению гуанозин-5-дифосфата в биохимических и.сследованиях.

При осуществлении предлагаемого способа выделения гуанозин-5-дифосфата все это устраняется за счет различной растворимости кальциевых солей гуанозин-5-дифосфата, гуанозин-5-монофосфата и неорганического фосфата в спирто-солянокислом растворе.

Для упрощения технологии процесса смесь гуанозин-5-дифосфата, гуанозин - 5 - монофоссфата и неорганического фосфата подвергают

обработке солями кальция, нанример хлористым кальцием, и полученную смесь кальциевых солей подвергают дробному осаждению из солянокислого раствора спиртом. Выход достигает 84%.

Пример. Используют динатриевую соль гуанозин - 5 - дифосфата фирмы «Реанал (Венгрия). При предварительных опытах устанавливают, что в 1 г препарата содержится

417 мг (0,88 ммоль) динатриевой соли гуанозин-5-дифосфата, 223 мг (0,55 ммоль) динатриевой соли гуанозин-5-монофосфата, 40 мг (0,23 ммоль) тринатриевой соли ортофосфорной кислоты, а также «ристаллогидратная вода, влага и другие примеси. Таким образом, примесь неорганических ортофосфатов и гуанозин-5-монофосфатов, отнесенная к гуанознн-5-дифосфату, составляет 28 и 67 мол% соответственно.

1 г препарата растворяют в 30 мл 0,1 н. соля ной кислоты и к раствору прибавляют 45 дмл 0,2 М хлористого кальция в этиловом спирте. Выпавший осадок центрифугируют, промывают спиртом, растворяют в 30мл 0,1 М соляной

кислоты и переосаждают добавлением 80 мл этилового спирта. Переосаждение повторяют несколько раз. После трех пе1реосажден11й в препарате остается менее 3% гуанозин-5-монофосфата и отсутствует неорганический ортофосфат. Последующее переосаждение приводит к полному удалению монофосфатов.

Для дальнейших анализов кальциевую соль гуаНозин-5-дифосфата переводят в литиевую на катионите Дауэкс-50 (Ь1+-форма) и лиофилизуют. Собирают 330 мг (0,74 ммоль) литиевой соли гуанозин-5-дифосфата, выход составляет 84%, считая на взятый гуанозин-5дифосфат.

Предмет изобретения

Способ выделения гуанозин-5-дифосфата из его €меси с гуанозин-З-.монофосфатом и отщепившимся неорганическим фосфатом, о тличающийся тем, что, с целью упрощения технологии процесса, указанную смесь подвергают обработке солями кальция, например хлористым кальцием, и полученную смесь кальциевых солей подвергают дробному осаждению из соляиокислого раствора спиртом.