ПРОДУЦЕНТ ОКСИТЕТРАЦИКЛИНА Советский патент 1974 года по МПК C12P29/00 

Изобретение относится к производству антибиотиков.

Известно применение Act. rimosus в качестве продуцента окситетрациклина.

Предлагается применение культуры Act. pseudolysogenicys sp nov ВПИЙА в качестве продуцента окситетрациклина. Культура Act. pseudolysogenicys sp. nov. ВНИИА выделена в 1968 г. из почвы Средней Азии. Па питательных средах: почвенной, крахмало-аммиачной, Придхэма-Готтлиба с раффиназой, Чапека, картофельной, крахмальной. Культура образует спиральные спороносцы, которые расположены моноподиально, ложно-мутовчато, имеет овальную форму спор с шиповидной оболочкой.

На средах аспарагиио-глюкозной, аспарагино-глицернновой, минеральной N° 1 Гаузе, Красильникова с глюкозой, ЧапекаДокс (видоизмененной), Ваксмана, ПридхэмаГоттлиба с мальтозой и с арабинозой, тирозиновой, соевой, кукурузной, органической № 2 Гаузе гифы воздушного мицелия стериальные, прямые или волнистые.

Па среде Чапека воздушный мицелий слабо развит, беловатого цвета, субстратный мицелий бесцветный.

Па среде минеральной N« 1 Гаузе воздушный .мицелий слабо развит, мучнистый, белого цвета, субстратный мицелий бесцветный.

Па крахмало-аммиачной среде воздушный мицелий белого цвета, мучнистый, с возрастом становится обильно пушистым белоснежным, субстратный мицелий от бежевого до песочного цвета.

Па глицерин-аспарагиновой среде воздушный мицелий слабо развит, в виде пушка темно-непельносерого цвета, субстратный мицелий темно-пепельный.

Па овсяной среде воздушный мицелий обильный, ватообразный, белоснежный, субстратный мнцелий от темно-оливкового до тель по-орехового цвета, растворимый нигмент соответствует цвету субстратного мицелия.

Па среде Эммерсона воздушный мицелий пушистый, белоснежный, субстратный мицелий несочный, бежевый.

Па почвенной среде рост и воздушный мицелий слабо выражены, последний беловатого

цвета, субстратный мицелий бесцветный, желатину разлчижает, крахмал гидролизует, нз использованных углеводов усваивает глюкозу, мальтозу, раффинозу, арабинозу, сахарозу, инозит, образует антибиотик окситетрациклин.

Выделяют антибиотик из культуры Act. Pseudolysogenicus sp. nov. ВПИИА следуюшим образом.

Пример 1. Ферментационную среду состава (в %): кукурузный экстракт 1,0 на сырой вес; аммоний сернокислый 0,35; натрий

хлористый 0,5; мел 0,5 крахмал 1,5, глюкоза 1,0 при рН - 6,8-7,0 засевают 5% 48-65 часового вегетативного мицелия. 4,5 л культуральиой жидкости подкисляют концентрированной ЫС1 до рН 1,5. Через 30 мин перемешивания нативный раствор отфильтровывают (активность 316 у/мл), насыщают NC1, подщелачивают до рН 9-10%-ны1м раствором NaOH и антибиотики извлекают бутанолом, первое извлечение - 1 л бутанола, второе и третье - 300 мл. Объединенные бутанольные экстракты нейтрализуют 0,1 н. НС1, промывают 50 мл воды, упаривают досуха. Полученный остаток (1,2 г) взбалтывают с 10 мл 2%-ного раствора щавелевой кислоты, отфильтровывают смолистый красный осадок, раствор доводят аммиаком до рН 3,5-4 и оставляют в холодильнике. Выпавший осадок отфильтровывают, высушивают (вес 150 мг и растворяют в 16 мл метанола при подкислении концентрированной НС1 до рН 3. Раствор обрабатывают активированным углем, фильтруют, упаривают растворитель до 2 лгуг. Вьшавщий кристаллический осадок отфильтровывают, высушивают в вакууме при 60° С, т. пл. 193-200° С, (ИК-спектр см. фиг. 1). По. ЗВСд 3.00 5800

лучают гигроскопичную форму хлоргидрата о кситетрациклима.

При м-е р 2. Гигроскопичную форму хлоргидрата окситетрациклина, полученную по примеру 1, пагревают с трехкратным количеством изоцропанола при 50-55° С, реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, осадок отфильтровывают, высушивают в вакууме; т. пл. 202-208°С (ИК-спектр см. фиг. 2). Получают негигроскоиичиую форму хлоргидрата окситетрациклина.

Пример 3. Г ипрос.копич1ную форму хлоргидрата окситетрациклина, полученную по примеру 1, нагревают с трехкратным количеством смеси изопропанола с метанолом (70 : 30) при 50-55° С. После охлаждеиия до комнатной температуры осадок отфильтровывают, высушивают в вакууме, т. пл. 194- 199° С (ИК-спектр см. фиг. 3). Получают у.меренно гигроскопичную форму хлоргидрата окситетрациклина.

Предмет изобретения

Лримеиение культуры Actinomyces pseцdolysogenicLis sp. nov. ВНИИА в качестве продуцента окситетрациклина. 1SOO ПЗО 12SO WSO 80,1 70и иг i SOO 500