Штамм 4-76 1952-продуцент антибиотика а-23/791 Советский патент 1980 года по МПК C12K1/02 

1ШЙ мицелий не образует, субстратный медово-желтый, мягкой консистенций , складчатый, среда не окрашена. При М и роскопическом исследовании мицелий - членистый, легко распадающийся йа фрагйёнты, попё рёчнйк Т,-Т,8 мк Источники углерода. Использует глюкозу, мальтозу, лактозу, маннит, галактозу, арабиноэу и лимоннокислый натрий. па.бо использует крахмал и tSaxajpoSy. Источники азота. Интенсивно испол isyet пептон, аргинин, аланйн, деЬйн, лейцин. На средах с триптофаном, мочевиной, гистидином, валином, лидином, аспарагииом, азотнокислым кальцием и калием развивается слабо. Не Уевайв1автглютаминовую и аспарагиновую кислоты. Ытамм 4-76 желатину разАижает на пятые - сутки, молОко коагулирует и частично пептониэирует, кра Мал гйдролизует интенсивно, натраты йе восстанавливает, са: сар6зуШв%3тирует, на клетчатке не растет, серовОДорОД не образует. Развивается при рН 5,5-8,5, температурный оптимум 28-30 с. Аэроб. Обладает ярковыраженной антибиотической активностью по отношении к фитопатогенным грибам Fusarium okys- porum,- Fusariura soleini, Venturia cucuraerina, PythiUm de Baryanum, Ascochyta melonis - возбудителям бог лезней растений. Полученный из биомассы штамм 4-76 антибиотик идентичен по физико-химическим свойствам антибиотику А-23/79 из Actiriomyces roseoJEIavuV Aral штам А-23/791. Оба представляют собой жел тые аморфные порошки. Их УФ-спекТр характеризуется двумя максимумами при 264 и 365 нм (в зтаноле). Хроматографичёский спектр обоих антибио тиков идентичен хроматографичёскому спектру розеофунгина. Оба айтибиотйкарастворимы в низших спиртах, водном ацетоне, водонаЬьяцённом н-бутаноле и нерастворимы в воде, серном и пё ролёййом эфиразч:. Сравнительное изучение биосинтеза антибиотика А-23/791 Act, rbseof334lavus штаммом А-23/791 и предлагаемым штаМмОм 4-76, проводят следующим образом. ,. Получение посевного материала. 600 мл питательной среды, .содержащей,%: кукурузный экстракт 1,0; глюкозу 1,0; (NH.) SO. 0,35; крахмал 1,5; мел 0,5; хлористый натрий 0,5; разливают в качалочные колбы по 100 мл и стерилизуют при 0,8 атм 30 мин. Полученную среду засевают штаммами Act. roseoflavus А-23/791 и 4-76 (по три колбы), предварительно выращенными на скошенной агаризованной питательной среде, из расчета одна пробирка на пять колб. Состав агаризованной пита1тельной среды,%: рыбная мука 1; пептон 0,5; глюкоза 2,0; лактоза 2,0; серногкислый аммоний 0,2; мел 0,5; крахмал 1,0; хлористый натрий 0,5. Посевной материал выращивают при . 27-28 С в течение 48 ч в колбах на качалке при 180 об/мин. Ферментация. 10 л среды, содержащей,%; рыбную Муку 1,0; пептон 0,5; глюкозу 2,0; лактозу 1,5; крахмал 0,5; сернокислый аммойий 0,2; мел 0,5; хлористый натрий 0,5, разливают в 100 колб по 100 мл и стерилизуют при 0,5 атм 30 мин. После стерилизации и . дёния в среды вносят посевной материал в количестве 5%. Колбы ставятся на качалку (180 об/мин). Ферментация продолжается 96 ч при 28с. Обработка культуральной жидкости. Антибиотик выделяют из мицелия (влажность 70%) экстракцией ацетоном (1:3). Ацетон упаривают в вакууме при из водного остатка, активное йачало экстрагирхпот н-бутанолом. Растворитель упаривают, антибиотик осаждают серным эфиром, осадок отфильтровывают и высушивают в вакууме до желтого орфного порошка. Активность определяют диффузионным методом с использованием в качестве тесткультуры Cand. guilliermondii. Примеры, иллюстрирующие продуктивность испытанных штаммов, приведены в таблице. Как видно из данных таблицы, штам 4-76 Act. roseoflavus образует на 1 .питательной среды 273-660 мг антибиотика. Ранее предложенный штамм А-23/791 на том же объеме питательной среды накапливает 127-222 мг антибиотика, т.е. почти в 2-3 раза меньше. Преимуществом предлагаемого штамма 4-76 является то, что продуцируемый им антибиотик обладает большой биологической активностью, что подтверждено величиной ЭК1ГТИНКЦИИ Ej (см. таблицу) . Существенным достоинством предлагаемого штамма является также;и то что штамм 4-76 более продуктивен на 1 г мицелия он накапливает от 9,5 до 26,0 мг антибиотика. При меньшем накоплений мицелия он обеспечивает больший выход целевого продукта - антибиотика, что позволяет при выделении антибиотика из мицелия снизить расход растворителей. Формула изобретения Штамм 4-76 Actinoroyces roseoflavu Aral 1952-продуцент антибиотика А-23/791. Получен при излучении естественной изменчивости штамма А-23/791. Хранится в коллекции Инсти тута микробиологии и вирусологии АН Казахской ССР за 70. Культурально-морфологические приз наки.. Синтетические среды. На средах Чапека с глюкозой, Чапека с глицерином и Гаузе 1 штамм 4-76 не образует воздушный мицелий или он очень скудный. Субстратный мицелий - желтый, среды не окрашены, При микроскопическом исследовании мицелий -: членис тый, поперечник 0,6-0,8 мк. Органические среды. На сусло-агар и среде Гаузе 2 штамм 4-76 воздушный мицелий не образует, субстратный - медово-желтый, мягкой консистенции, складчатый, среда не окрашена. При микроскопическом исследовании мицелий - членистый, легко распадающийся на фрагменты, поперечник 1,0-1,8 мк. Физиологические признаки. Источники углерода. Использует глюкозу,мальтозу, лактозу, маннит, галактозу, арабинозу и лимоннокислый натрий. Слабо использует крахмал и сахарозу. Источники азота. Интенсивно использует пептон, аргинин, аланин, серин, лейцин. На средах с триптофаном, мочев иной,гистидином, валином, лизином, аспарагином, азотнокислым кальцием и калием развивается слабо. Не усваивает глютаминовую и аспарагиновую кислоты. Желатину разжижает на 5-7 сутки, молоко коагулирует и частично пептонизирует, к-рахмаЛ гидролизует. интенсивно, нитраты не восстанавливает, сахарозу инвертирует, наклетчатке не растет, сероводород не образует. Развивается .при рН 5,5-8,5. Температурный оптимум 28-30С. Аэроб. Обладает ярковыраженной антибиотической активностью по отношению к фитопатогенным грибам FUsarium -oxysporum, Fusarimn solani,lVenturia« cucumerina,. Pythium de Baryanuni, Ascochyta melonis - возбудителям болезней растений. Штамм 4-76 Apt. roseoflavus Aral 1952 образует на литр питательной среды 273-660 мг антибиотика А-23/791 с биологической активностью 4300 - 6000 ед/мг. Оказывает стимулирующее действие на рост и развитие растений. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Родин М.Н. Общая.фитолатология. М., Высшая школа , 1978, . 320-340. 2.,Авторское свидетельство СССР 499294, кл. С 12 к 1/00, 1976.