Способ получения белков модифицированных изотопами йода Советский патент 1976 года по МПК C07K14/76 A61K51/00 C07K1/13 

1

Изобретение относится к улучшенному способу получения белков, модифицированных изотопами иода, которые находят широкое применение в медицине.

Способ получения белков, модифицирован ных изотопами иода путем иодирования белков в электрохимической ячейке, известен в литературе. По известному способу процесс проводят в гальваностатичес- ком режиме при плотности тока ЗОмкА/см и начальном значении потенциала 550 ыв.

При проведении процесса нaбJlIoдaeтcя повышение анодного потенциала до 0,1- - 1,2 в, при котором уже возможно окисление функциональных групп белка, например сульфигидридных, фенольных, что приводит к структурным изменениям белковой молекулы и, следоваа-ельно, к изменению биологической специфичности белка. Сохранение иодированными белками биологической

специфичности в процессе введения в нйх радиоизотопов иода является главным тре- бозанием при ях использовании.

Эта цель достигается при проведении иодирования белков в элзхтрохимической ячей-

ке при контролируемых постоянных значениях потенциала Е 450-850 мв относительно нормального водородного электрода в течение всего процесса иодирования при плотности тока не более 40 мкА/см .

Процесс проводят в буферной системе при , предпочтительно в фосфатном буферном растворе с рН 7±0,1 и ионной силой 0,1-О,3. Продукты выделяют известн1: ли способами.

Постоянное значение анодного потенциала к силы тока задают и поддерживают с помощью потенциостата. Предпочтительно количество вносимого иодоносителя должно соответствовать соотношению йод:белок 1:1.

Предлагаемый способ позволяет получать различные белки с высоким радиохимическим выходом с высокой степенью paBHLON.epности включения иода в молекулу белка при максимальном сохранении исходных наттшны CBofiCTB белка.

Пример 1. 1ОО мг альбумина сыворотки кроаи че.г овека в растворе фосфатного буфера с рН 7,0 и ионной силой 0,2

помещают в электрохимическую ячейку с платиновым электродом {объем 10 мл). За™ тэм вносят 1,45 МП раствора иоцистого натрия и раствор радиоактивнохО Vtoaai (иод-125 или иод-131. Помешают в реакционную смесь катод, отгороженный от анода, непроницаемой для белка перех ородKDK. Иодирование проводят в течение 45l5 мин при анодном, потенциале ббОДЮОм относительно хлорсеребряного электрода, приче.м плотность анодного тока не более 40 мкА/см. Выход 98 ±1%.

. р и м е р 2. Раствор гамма-глобулина {0,5%-3%) в фосфатном буфере с рН 7,0 и ионннэй силой 0,2 помещают в злекгрохимическую ячейку с платиновым электродом, добавляют раствор NcsO или N Q J и 1,45 мл. раствора носителя. В реакционную смесь помешают катод, отгороженный полупроницаемой перегородкой от анода. Процесс прово.дят при анодном потенциале Е 6501100 MB относительно хлорсеребряного электрода и плотности тока не более 30 МК.А./СМ в течение 40-60 мин. Выход 85 i 3%.

Пример 3. Навеску лизоцима {10О мг) раствораяют в 5 мл фосфатного буферного раствора с рН 7,0 и ионной сиjiofi 0,2, затем прибавляют раствор радиоактивного иода и требуемое количество но- сителя, доводят общий объем до 10 мл. Реакционную смесь помещают з элек1р -;;::-п1-ческую .ячейку с платиновым электродом а проводят иодирование при Н о50-730 л1ь отнг

45-75 мин. Вькод .. Постоянное значение анодного потенци.ал и силы тока за.аают к поддерживают с п.о-мошью потенциостата. По окончании иоди-ровакяя растворы белков очищают от иодкд- -ионов известными приемами, например с помощью анионита.. регеперируьот- хромпиком йлй методом катодБО-анодной поляризации rjDK потакциалах вы.аэленин кисларода и водорода.

Ф о р м у

о о р е т е п

л а

1.Способ получения белков, модифицированных изотопами йода путам иодирования бел.ков п электрохимической ячейке, о т л и ч а ю щ к и с я тем, что, с целью улучшения качестве целевого продукта, rtpoцесс ведут при постоянных контролируемьи

величинах потегщиада Е 450-850 мв и

плотности то.ка не выше 40 мкА/см з феркой системе.

2.Способ по п. 1, о т л и ч а ю :;ц и с я тем, что процесс зедут в буферном растворе при и кояной силе 0,1-0,3