Способ получения раствора красителя для маркирования биологической жидкости Советский патент 1987 года по МПК C09B11/08 C07D311/86 C25B3/06 

Изобретение относится к способу получения раствора красителя для маркирования биологической жидкости, который может найти применение в медицине .

Цель изобретения - улу чшение качества целевого продукта и расширение сферы его применения,

Указанная цель достигается за счет взаимодействия флуоресци}1а с йодидом щелочного металла нри соответствующих значениях реагентов, величинах рИ и постоянном значении анодного потенциала.

Пример 1, В электролизер с платиновыми электродами вносят 1 0 М ({myopeсцина я 5 мл О, М фосфатного буферного раствора с рН 7,0, содержащего 0,9% хлористого натрия и 4,5 М йодида калия (молярное соотношение йодид калия: флуоресцин 4,5:1), Процесс электролиза проводят при величине анодного потенциала 0,5 В в течение 1 ч. Выход красителя йодированного флуоресцеина 97%.

Выход целевого продукта определяют спектрофотометрически по снижению экстинкции длинноволновой полосы исходного красителя или методом радиоактивных индикаторов с использование радионуклидов 13 или 125.

Приме р 2. Иодирование флуо- ресцина проводят аналогично примеру 1, но в качестве йодсодержащего реагента используют 40 МБк натрий йодистого (йод - 125). Дли определения выхода красителя по окончании элек- тро:п-1за пробу реакционной смеси наносят на полоску ацетатцеллюлозной пленки. Пленку номещают в ванну элек трофоретического нрибора и проводят электрофорез в течение 15 мин в 0,2М боратном буфере с рП 8,0 при 350 В. Идентификацию радиоактивных веществ на электрофореграмме осуществляют методом авторадиографии. /Активность полос определяют на гамма-счетчике.

Результаты опытов приведены в табл.1.

Примеры 3-5, Процесс осуществляют аналогично примеру 1 при других соотношениях реагентов.

П р и М е р 6. В электролизер помещают 10 мг аминофлуоресцина (2,9 ЧО М) в 8 мл 0,2 М трис-ИС1 буферного раствора с рН 7,6 и 0,1 М йодида натрия (молярное соотношение йодид натрия: аминофлуоресцин2 ,0: I )

Электролиз проводят 50 мин при величине потенциала платинового анода 0,53 В. Выход 99%.

П р и М е р ы 7, 8. Процесс осуществляют аналогично примеру 6 при других соотношениях реагентов.

Выбор диапазона рН 6,0-8,0 связан с необходимостью достижения диссоциа0 ции фенольного гидроксила молекулы флуоресцина. При значении рН меньше указанного диапазона снижается скорость реакции, а увеличение рН (больше 8,0) небезопасно для биологичес5 ких объектов. Кроме того, при рН, большем, чем 10,0, возможно протекание побочных процессов. В качестве водно-солевых растворов для проведения процесса могут быть использованы

0 неорганические буферные растворы, имеющие рН в указанном диапазоне. Оптимальным является применение фосфатных буферных растворов с величиной- рН 7,0-7,6.

5 В предлагаемом способе используется молярное соотношение йодид щелочного металла: флуоресцин, равное 2,0- 4,5:1,0. При соотношении меньшем, чем 2,0:1,0, часть исходного флуорёс0 цина остается непрореагировавшей, что приводит к снижению выхода целевого продукта, а увеличение соотношения (больше 4д5:1,0) нецелесообразно, вследствие невозможно сти введения в молекулу флуоресцина более 4,0 атомов йода,

В качестве йодидов щелочного металла предпочтительнее йодиды натрия и калия, так как ионы натрия и калия

0 не изменяют свойств биологических об1зектов.

В указанных солях йодид-ион может быть радиоактивным. Получение радиоактивного целевого продукта расшиg ряет сферу его применения в биологических исследованиях.

Биологические испытания красителей.

Полученные растворы красителей могут быть использованы непосредственно (без дополнительной очистки и выделения) в биологических исследованиях.

Раствор радиоактивного красителя,

- полученный предлагаемым способом с применением в качестве йодсодержащего реагента йодистого натрия, меченного 125,, используют в биологических исследованиях. Исследования про0

1

водят ил бел1,1Х беспородных крысах. Растпор красителя вводят в хвостовую пену. Череч определенные промежутки времени определяют содержание красителя в крови, моче и почках. fleoOxo- димость использования радиоактивного раствора красителя в данном случае вызвана невозможностью точного количественного определения красителя в таких биологических объектах, как моча, почка, печень, желчь оптическими методами.

Крысам в хвостовую вену вводят 0,1 мл раствора красителя, получен- ного по примеру 2, концентрацией

1 мг/мл, удельная радиоактивность 38 МБк/нп. Через 5, 15, 30, 60, 180 мин животных (по 3 шт.) забивают де- капитацией и определяют содержание радиоактивности в интересующих органах и тканях (кровь, печень, почки, моча). Радиоактивность определяют методом прямой радиометрии. Содержа30

35

ние красителя (% от введенной внутри- 25 средственного использования раство- венно дозы) в крови, мочи, печени и почках крыс в разные сроки после инъекции (краситель получают по примеру 2) приведено в табл.2.

Данные табл.2 свидетельствуют о возможности использования раствора красителя без ei o дополнительной очистки для изучения процесса проницаемости почечных мембран.

Для цитологических исследований, основанных на оптических методах определения красителя, можно применять нерадиоактивный раствор красителя.

В условиях предлагаемого способа получают окрашенные йодпроизводными флуоресцеиновыми красителями полисахариды различно молекулярной массы. По данным гельфильтрации на ультрагелях в процессе их получения не отмечают изменения молекулярной массы полисахаридов. Максимумы поглощения исходного и полученного окрашенных полисахаридов отличаются на 9-33 нм (490 нм - оранжевый, 510-525 нм - красный), F зависимости от степени йодирования.

В прису1(:тяии радионуклида йод - 125 получают радиоактивные полисаха40

45

50

ров красителя для биологических исследований, а также в большей (на 20%) оптической плотности растворов красителей, по сравнению с известным способом при oди raкoвoй концентрации расширение сферы применения красителей в биологических исследованиях, которое выражается в возможности получения флуоресцеиновых красителей, меченных радионуклидами йода.

Формула изобретения

Способ получения раствора красителя для маркирования биологической жидкости путем взаимодействия фпуо- ресцина с йодсодержащим реагентом в водно-солевом растворе в электрохимической ячейке, отличающийся тем, что, с целью улучшения качества целевого продукта и расширения сферы его применения, в качестве йодсодержагцего реагента используют йодид щелочного металла при молярном соотношении флуоресцина и йодида щелочного металла 1:2,0- 4,5 соответственно и взаимодействие осуществляют при рН 6,0-8,0 и гтосто- янной величине анодного пoтet циaлa.

5

0

окрашенные ({ луорес.иеинси ыми красителями, которые используют для изучения их фармакокинетиьи Р дозах 0,5 i,0 веса жиротн1 1х. Изучение фармакокинетики полисахаридов, вводимых в указанных дозах иными способами, кроме использования меченных радионуклидами образцов, практически невозможно. .

При введении раствора красителя эритрозина В , полученного по известному способу той же концентрации в хвостовую вену крысам около 30% животных погибают в течение получаса, следовательно, непосредственно использование этих растворов (без дополнительной очистки) для биологических исследований невозможно.

Таким образом, использование предлагаемого способа получения растворов красителей обеспечивает улучшение качества целевого продукта, которое выражается в возможности непо

средственного использования раство-

ров красителя для биологических исследований, а также в большей (на 20%) оптической плотности растворов красителей, по сравнению с известным способом при oди raкoвoй концентрации, расширение сферы применения красителей в биологических исследованиях, которое выражается в возможности получения флуоресцеиновых красителей, меченных радионуклидами йода.

Формула изобретения

Способ получения раствора красителя для маркирования биологической жидкости путем взаимодействия фпуо- ресцина с йодсодержащим реагентом в водно-солевом растворе в электрохимической ячейке, отличающийся тем, что, с целью улучшения качества целевого продукта и расширения сферы его применения, в качестве йодсодержагцего реагента используют йодид щелочного металла при молярном соотношении флуоресцина и йодида щелочного металла 1:2,0- 4,5 соответственно и взаимодействие осуществляют при рН 6,0-8,0 и гтосто- янной величине анодного пoтet циaлa.

42,221,034,815,65,3

40,723,134,823,15,3

41,021,729,918,65,6

23,715,717,87,67,6

21.515,920,614,24,9

26.614,116,411,67,2 7,55,06,64,58,4

7,25,76,64,43,0

7.74,85,75,04,4 7,810,722,622,4

3.88,825,340,0 3,68,817,128,9

Составитель И,Дьяченк,о Редактор И,1унько Техред И.Попович Корректор Е.Рошко

Заказ 3019/23 Тираж 633Подписное

ВПИИИИ Государственного комитета СССР

ЦП ;и лам изобретений и открытий 11 ИИ ), Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производств

-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Таблица2

Изобрете 1ие относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению растнора красителя (РК) для маркирования биологической жидкости, который может найти применение в медицине. Улучшение качества РК и расширение сферы его применения достигаются использованием другого реагента и проведением процесса в других условиях. Получение РК ведут из флуоресцина и йодида щелочного металла при молярном соотношении 1:2,0- 4,5 в водно-солевом растворе в электрохимической ячейке при рН 6,0-8,0 и постоянной величине анодного потенциала. Данный способ позволяет повысить качества целевого РК, что дает возможность использовать его непосредственно для биологических исследований. В сравнении с известным полученный РК имеет лучшую оптическую плотность (на 20%) при одинаковой концентрации. Кроме того, РК позволяет получать флуоресцеиновые красители, меченные радионуклидами йода. 2 табл. i (Л 00 N5 СЛ СЛ