Способ определения сульфгидрильных соединений в содержащих их продуктах Советский патент 1974 года по МПК C12D13/00 

1

Известен способ определения сульфгидрильных соединений в содержащих их продуктах путем отбора пробы исходного продукта и введения в пее реактива.

Цель изобретения - упрощение процесса и определение водорастворимых, легкоокисляющихся сульфгидрильных соединений типа восстановленного глютатиопа.

Это достигается тем, что на пробу воздействуют 1М раствором сульфосалициловой кислоты, выдерживают раствор, фильтруют, в фильтрат добавляют 5%-ный раствор сульфата кадмия и 1 н. раствор едкого натрия, затем центрифугируют, а в полученном центрифугате определяют легкоокисляющиеся сульфгидрильные соединения 4%-ным раствором сульфосалициловой кислоты и 5%-ным раствором йодистого калия с последующим расчетом этих соединений.

Пример 1. 1) В мерпую колбу на 100 мл отвешивают 10 г отобранного растительного или животного материала (бражку, промывные воды дрожжевых заводов, послеспиртовую мелассную барду и т. п.). Постепенно приливают 80 мл дистиллированной воды и взбалтывают в течение 10 мин. В хорошо перемешанную смесь медленно при постоянном помешивании добавляют 5 мл 1М раствора сульфосалициловой кислоты, еще раз перемещивают и оставляют на 5 мин.

Содержимое колбы доводят водой до метки и сильно встряхивают. Смесь фильтруют через складчатый бумажный фильтр или центрифугируют.

2) 50 мл прозрачного фильтрата или центрифугата, то есть половину первоначальной навески - 5 г, помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 40 мл 5%-ного раствора сульфата кадмия и 4 мл 1 н. раствора едкого натрия, -взбалтывают и доводят водой до метки, отстаивают 30 мин., затем центрифугируют и осторожно декантируют чтобы не захватить осадка.

3) Пипеткой Мора отбирают 50 мл прозрачного центрифугата (2) в коническую колбу на 150 мл. Это количество отвечает 2,5 г первоначальной навески. В колбу добавляют при помешивании 2,5 мл 4%-ного раствора

сульфосалициловой кислоты и 2,5 мл 5%-ного раствора йодистого калия. Йодистый калий приготовляют ежедневно и проверяют на отсутствие свободного иода (качественная реакция с крахмалом). К анализируемой

пробе прибавляют 10 капель 1%-ного раствора крахмала и титруют 0,001 н. раствором КЮз до появления устойчивой синей окраски. В случае небольшого объема раствора, идущего па титрование, пользуются микробюреткой.

В качестве контроля титруют 50 мл дистиллированной воды в условиях, идентичных с опытными. Это титрование производят для внесения поправки на чистоту реактивов, а поэтому при пользовании одними и теми же реактивами контрольное титрование можно производить только один раз; при получении новой партии реактивов, контрольное титрование следует повторить.

4) В коническую колбу на 150 мл отмеривают пипеткой Мора 25 мл прозрачного центрифугата или фильтрата, полученного до осаждения восстановленного глютатиона сульфатом кадмия (что равно 2,5 г первоначальной навески), добавляют 25 мл дистиллированной воды и поступают аналогично пробе 3.

В этом случае, как и в предыдущем, ставят контрольный опыт на чистоту реактивов.

0,001 н, раствор КЮз готовят перед определением из заранее приготовленного 0,005 н. КЮз стойкого при хранении. 50 мл 0,005 н. раствора КЮз смешивают с 22,8 мл 1 м раствора сульфосалициловой кислоты и доводят дистиллированной водой в мерной колбе на 250 мл до метки.

0,005 н. раствор КЮз готовят путем растворения 0,1783 г КЮз в дистиллированной воде в мерной колбе емкостью на 1 л и доводят водой до метки.

Формула расчета: .

где; X - количество восстановленного глютатиона, в мг 1%;

А - суммарное количество высокореакционных, легкоокисляющихся 5Я-групп до осаждения сульфатом кадмия, в условном пересчете на восстановленный глютатион, в мг %,

Б - остаточное количество легкоокисляющихся 5Я-групп после осаждения сульфатом кадмия в условном пересчете на восстановленный глютатион, в мг %. А и Б вычисляют по отдельным формулам, где А (г-г,)-12,28; Б (в-в,) 12,28;

г - количество мл 0,001 н. КЮз, пошедшее на титрование пробы 4;

Г1 - количество мл 0,001 н. КЮз, пошедшее на титрование контроля для пробы 4;

в - количество мл 0,001 н. КЮз, пошедшее на титрование пробы 3;

Б - количество мл 0,001 н. КЮз, пошедшее на титрование контроля для пробы 3; 12,28 - коэффициент пересчета на восстановленный глютатион.

В процессе определения высокореакционные, легкоокисляющиеся 5Я-группы мгновенно вступают во взаимодействие с ничтожно

малыми количествами йода, не превышающими 6 мкг, то есть 6-106 г. По окончании реакции незначительный избыток йода тотчас же обнаруживается индикатором. Другие редуцирующие вещества, кроме указанных

5Я-соединений, то есть редуцирующие сахара, альдегиды и тому подобные в описанных условиях в реакцию не вступают.

Биологическим активатором (катализатором) считается вещество, содержащее высокореакционные легкоокисляющиеся 5Ягруппы в суммарном пересчете на восстановленный глютатион от 100 до 600 мг % и выше и восстановленный глютатион от 50 до 300 мг 1% и выше.

Каталитически активное вещество вводят в подлежащую активированию массу или в производственную смесь из расчета содержания в них 0,2 мг % восстановленного глютатиона при условном пересчете сульфгидрильных групп на последний.

Предмет изобретения

Способ определения сульфгидрильных соединений в содержащих их продуктах путем отбора пробы исходного продукта и введения в нее реактива, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и возможности определения водорастворимых, легкоокисляющихся сульфгидрильных соединений типа восстановленного глютатиона, на пробу воздействует 1М раствором сульфосалициловой кислоты, выдерживают раствор, фильтруют, в фильтрат добавляют 5%-ный раствор сульфата кадмия и 1 н. раствор едкого натрия, затем центрифугируют, а в полученном центрифугате определяют легкоокисляющиеся сульфгидрильные соединения 4%-ным раствором сульфосалициловой кислоты и 5%-ным

раствором йодистого калия с последующим расчетом этих соединений.