Способ получения п-нитробензойной кислоты Советский патент 1974 года по МПК C07C63/06 C12D13/00 

Изобретение относитоя к микробиологическим способам получения медицинских препаратов. Известен способ получения ги нитробензойной кислоты путем автоклавирования 1 ниагротолуола, ледяной уксусной кислоты, ацетата кобальта, ацетата марганца и броглвда аммония при высоком давлении и температуре 204°С, дальнейшего охлавдения смеси до 25 С, фильтрования, промывания осадка и высушивания целевого продукта. Для упрощения технологического процесса предлагается окисление вести с использованием щльтуры .ixi/foc-cb-i o ca- j/oe,c-t:es 1 А или культуры . счэгх( 77 А. Культура ,-i,(LtL(- spe.. I А имеет следущие культзтально морфологические признаки, на обычных питательных средах (мясопептонный агар, сусловый агар, минеральная среда с глюкозой) дат т колонии розово охристого цвета, гладкие,блестящие, выпуклые, Размер клеток при росте на мясопептонном бульоне у 24 часовоЁ культуры 0,15-1 X 8-1 Оуи , Клетки палочковидные, слегка искривленные, с неровными контурами, ангулярные формы ярко выражены, ветвление редкое, но отчетливое, На вторые-третьи сутки культура распадается на кокковидные фрагменты диаметром 0,5-1,0, Физиолого биохимические признаки культуры. Аэроб, растет при температуре 15-37 С, оптимум около . ДиапазонрН 5-9. Обладает активной каталазной актив ностьд). Твин . 40 гвдролизует. Желатину не разжижает. Крахмал, клетчатку, казеин не гидролизует, Нитраты редуцирует, Ассимил1фует без кислотообразования следущие углеводы: глюкозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, сахарозу, ма льтозу, трегалозу, лактозу, раффинозу, машшт, сорбит, Ассими лирует глицерин, этанол, ацетат. пропионат, бутират, сукцинат, цитрат, н алканы: с нонана по гептадекан, олефин, додецен 1, изо парафин, сквалан. Не ассимилирует бензоат, салицилат, никотинат, фенол, пирокатехин, резорцин, нафталин, метшширидины, В качестве источников азота усваивает нитриты, нитраты, аммонийные соли, мочевину, аспарагин пептон, гцдролизат казеина. На среде без источникбв азота не рас тет. По своим: морфологическими фи зиолого биохимическим признакам культура буНизка к -вущу ос -с а atoict Ccct НО отличается тем, ч колонии неслизистые, клетки неско лько мел7:.че, растет при 37 С, фенол не использует, трансформирует « нитротолуол в соокислительных условиях в соответствующую кислоФУКультура 77 А имеет следующие культурально морфологические признаки. На обыч ных питательных средах (мясопептонный агар, сусловый агар, минеральная среда с глюкозой) дает колонии красно розового цвета, гладкие, блестящие, выпуклые, воз душный мицелий не образует. Культура в молодом возрасте палоч коввдная (10 и более), в процес се роста распадается на короткие шаровидные палочки. Физиолого биохимические приз наки. Аэроб, растет при температуре I5-370C, оптимум 28-30°,Диапазон рН 5-9, оптимум 6,5-7,5. Ассимилирует без образования кислоты и газа следующие углеводы: глюкозу, сахарозу, мальтозу, галактозу, маннит. Не ассимилирует лактозу и ксилозу. Ассимилирует углеводороды с гексана по гептаде кан, сквалан, изооктан. Не ассими лирует ароматические и циклически углеводороды. Молоко не сбраживает, не коагулирует, желатину не разжижает, крахмал не гидролизует иддол и сероводород на образует. Ассимилирует аминокислоты: валин, лейцин, фенилаланин, норлещин, изолещин, аспарагин. Усваивает лактат, пропионат и ацетат. Не ассимилирует фенол, метилпиридины бензоат, салицилат, никотинат. В качестве источншив азота усваивает нитриты, нитраты, амглонийные соли, пептон, аспарагин. ,a- jyOS-cxJe-s Шталмы и 77 А хранятся в Лаборатории коллекции культур Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под указанными номерами. Нример. Культуру с-сгj/o-ec e штамм А выращивают на агаризованной среде Ерошина (8-d) с гексадеканом в качестве источника углерода в течение двух суток, а суспензию выросшей культуры высевают в колбы Эрленмейера на 250 мл с жидкой средой 8-f, разлитой по 50 мл. Состав среды 8- в г/л:с 5а.7 HgO - 0,8; cE- 0.5; KlfoPOA - 0,7; (Mi4)2HP04 - 1,5; вода водопроводная до 1 л, гексадекан добавляют в количестве 10 г/л, /т- нитрото- луолвносят в кавдую колбу в количестве 0,2 г. Колбы выдерживают на качалке 200 об/мин при . Процесс трансформации прослеживают с помощью хроматографии в тонком слое окиси алюминия или силикагеля. п Нитробензойная кислота образуется на вторые сутки. Ферментацшо прекращают на третьи сутки. Культуральную жидкость центрифугируют при 6000 об/мин в течение 20 мин, затем надосадочную жидкость подкисляют до рН 2,0 и упаривают на роторном испарителе. Сухой остаток пере- . кристаллизовывают из воды. Выход кислоты 80-87 на введенный в реакцию /г. нитротолуол. Т.пл. выделенной кислоты 241-242°С. Т.пл.смешанной пробы 240-2420С, Идентичность выделенной кислоты с заведомо.известным образцом установлена следующими методами: Ж-сцектроскопии, УФ-спектроскопии ( /1 м.а-1 в метаноле 270нм, в бензоле 258 нм), методом флуоромвтрии. Выделенная кислота хромотографически -чистая, имеет одинаковую хроматографическую подвижность с заведомо известным образцом jcj/ 0,60 при хроматографии в тонком слое окиси алюминия в системе метанол-аммиак-диметилформашщ 2:2:1 и на силикапеле ( fjm-4o марки .ес.ел,) 0,75 в системе растворителей бензол - диоксан уксусная кислота 90:25:4. ЮОБРЕТЕНШ Способ получения нитробензойной кислоты путем окисления )г.нитротолуола, отличащийся тем, что, с целью упрощения процесса, окисление осуществляют с использованием культуры .. sp&Uts w А культурыи сл-сл6:л й Лйй.1 f / А