Способ получения ферментов иммобилизованных в структуре полимеризационных гелей Советский патент 1974 года по МПК C12D13/10 

1

Изобретение относится к лшкробиологической, ме.цицинсксй и пищевой промышленности.

Известен способ получения ферментов, иммобилизованных в структуре полшлеризационных гелей, путем смешивания раствора ферментов со смесью акриламида и л/, N метиленбисакрилаыида в присутствии катализаторов радикальной полимеризации

С ,нако при таком способе наблю,дается слабое связывание ферментов небольшого молекулярного веса, действующих на субстраты с большим молекулярным весом, с гелем,

Предложенный способ позволяет улучшить связывание ферментов с моле,.1екулярным весом до 50000 с полиакриламццны л гелем.

иш этого фермент пре.цварително обрабатывают растворами ангвдрвдов ненасыщенных кислот. Послед,ние целесообразно вводить в такой

концентрации, чтсбы соотношеш1е KOjm4ecTBa алшногрудп фермента и ангдцрддных групп кислоты составляло 1:(). Из ангддрцдов ненасыщенных кислот сле,дует использовать анги,дри;ды итаконовой и малеиновой кислот, а обработку ферментов растворалш целесообрано проводить при в течение 18-20 час.

Ангддрдды ненасыщенных кислот при 4 С в течение 18-20 час насыщают молекулу фермента вишмьными группш.1и без существенного снижения ферментативной активности.

Дю.дифицированные фердюнты подвергают сопол1шеризащш с акрильныщ мономералгш в присутствии ката шзаторов радикальной по шмеризации. Добавки растворов гшгидридой ненасыщенных кислот к ферментам: улучшают свойства иммобилизованных в структуре полимерЕзацирнных гелей ферментов и улучша«от структуру Ieля, делая ее более однородной, что 3 подтверждают оптические характерней тики получаемого геля, Пример. С целью насыщения фермента винильными группами составляют реакционную смесь из равных объемов раствора трипсина с активностью 8 Е/мл (определяется но методу Ансона) и раствора ангвдрвда итадоновой кислоты с концентрацией 10 мгЛлл., что соответствует соотношению амино и ангддридных групп I-(iiO-i40A, и термостати руют смесь -при 4 С в течение ночи. Активность ферментов под действием ангадрцда кислоты практически не уменьшается, Для иммобилизации ферментов составляют полимеризационную смесь следующего состава :7,6 ч, реак- циошой смеси А,. 1,4 ч, раствора акриламцда и А/,А/- метиленбисакриламида (в соотношении 90:10) и 0,5 ч, раствора /V,/V. Wyv тетраметш1еддиалшна« Смесь продувают азотом 15-30 мин для удаления кислорода, ингибирующего процесс полшеризации,Затем в смесь добавляют 0,5 ч, раствора надсернокислого аммония и продоллсают прадувание в течение 1-2 мин, В течение ; 10-15 час при образуется довольно прозрачный блок геля, облада щий ферментативной активностью, Гелевый блок измельчают, многократно пролшвают буферным раствором и определяют активность фермента в проглывных водах, В геле фиксируется 70-75/0 исходного поличества фермента. Активность ттюбилизованного фермента составляет 2,5-3 Ё/г геля, Прш,1ер 2, Соблюдают условия примера I , но в реакционную смесь А вводят раствор химотрипсйна с активностью по АТЭЭ равной 2060 Активность ш/1мобилизованного фармента составляет 323 В/г геля, 443 .. ... 902 4 Пример 3, Соблюдают условия примера I, но реакционную смесь А составляют из раствора химотрипсйна , с активностью по АТЗЭ равной 4ЬОО 5 Б/мл и раствора аш:и;дрдда малеиновой кислоты с соотношением амино и ангвдридных групп 1:40, Активность имгобилизованного фермента составляет 140 Е/г геля. ю ПРЦЩйЕТ ИЗО 2 ЕТЕНШ I. Способ получения ферментов, иммобилизованных в стру1стуре полимеризационных гелей, путем раствора фермента со смесью акриламида и л ,/ -метиленбисакриламидаВ присутствии катаяизаторов радикальной полимеризации, отличающийся тем, что, с целью лучшего связывания ферменТОБ с моле кулярням весом до 50000,. б ферменты предварительно обрабатывают растворами ангидрддов ненасыщенных кислот,.Г 2, Способ по п1, отличающийся тем,что используют такие конзо центрации растворов анги;дри,дов ненасыщенных кислот, чтобысоотношение количества аминогрупп фермента и анги;дри,дных групп кислоты. составляло I:(20-40)« 35, 3, Способ жо пп,1-2, отличающийся тем, чтtГиз анги.дрддов ненасыщенных Жслот используют ангддрдд итаконовой кислоты, 4, Способ по ппЛ-3, отличаю40 щдйся тем, что из анги;дрвдов ненасыщенных кислот используют анги,дри;д малеиновой кислоты, 5, Способ по пп, 1-4. oтJШчaющийся тем, что обработку фермента i45 растворами ангддрддов ненасыще1шых кислот осуществляют в течеше . 18-20 час при 4 С,