Способ определения амилолитической активности ферментных препаратов Советский патент 1974 года по МПК C12D13/10 

1

Изобретение касается способа количественного определения амилолитической активности ферментов, который может применяться в области биологии, Б частности в пищевой и медицинской промышленности, а также в клинических лабораторях и в лабораториях, занимающихся исследованиями ферментов.

Известен -способ определения амилолитической активности ферментов препаратов, предусматривающий введение раствора исследуемого npeinapaTa в агаризованяый крахмальный субст|рат, инкубирование смеси при 37°С и измерение диаметров образовавшихся на субстрате бесцветных зон.

С целью разработки количественного метода определения амилолитической активности ферментов, повышения точности олределения и упрощения процесса определения по предлагаемому способу в качестве агаризованного крахмального субстрата используют смесь, содержащую 1,5% агара, 0,4% К|рахмала 0,05 М буфера и 0,05 М NaCl, а после инкубирования субстрат окрашивают йодистым реактивом.

Йодистый реактив содержит 15 г йодистого калия, 1,5 г йода и 1 л воды.

Способ определения амилолитической активности ферментных препаратов заключается в следующем. Горячий 3%-ный раствор очищенного агара смешивают с 1,6%-ным раство|ром

крахмала и с уксусно-ацетатньш буферным растваром с NaCl в таких количествах, чтобы конечная концентрация компонентов в смеси составляла 1,5% агара, 0,4% К|рахмала, 0,05 М буфера и 0,05 М NaCl.

Смесь разливают по 18 мл в чашки Петри диаметром 100 мм. В агаризованном субстрате проделывают восемь лунок диаметром 7,0 мм, вносят в каждую из них ,по 0,08 мм раствора исследуемых препаратов. Рабочим интервалом активности является 0,25-4,0 АЕ/мл. Чашки термостатируют при 37°С в течение 18 час, затем агаризованный субст1рат окрашивают йодным реактивом, содержащи.м 15 г йодистого ка.тия и 1,5 г йода в 1 л воды.

Затем измеряют зоны расщепления крахмала и по ним судят об активности исследуемых фракций, определяемой по стандартной калибровочной кривой, построенной на полулогарифмической сетке с помощью контрольного препарата с известной амилолитической активностью.

Предмет изобретения

1. Способ определения амилолитической активности фе|рментных препаратов, предусматривающий введение раствора исследуемого препарата на агаризованный крахмальный субстрат, инкубирования смеси при 37°С, изме|рение диаметров образовавшихся на суб3страте бесцветных зон и определение активности исследуемого препарата по калибровочной К|ривой, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения и упрощения процесса определения, в качестве крах-5 мального субстрата используют смесь, содер4жа-щую 1,5% araipa, 0,4% крахмала, 0,05 М буфера и 0,05 М NaCl, а после инкубирования субстрат окрашивают йодистым реактивом, 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что йодистый реактив содержит 15 г йодистого калия, 1,5 г йода и 1 л воды.