Способ получения полинуклеотидов Советский патент 1975 года по МПК C07D51/50 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ

ог

ОНзС/О В где X обозначает хлор, водород; Y - водород, оксигруппа; В - гетероциклическое основание; КВэ- 1С2На)з-, wQ HXN ,0 N - метилморфолин. В качестве исходных веществ можно использовать как МОНО-, так и дихлорангидриды нуклеозидмонофосфорных кислот. Преимзщество применения хлорангидридов и в том, что они лучше растворяются в органических растворителях. В отличие от известных способов при проведении процесса с дихлорангидридами реакция не слишком чувствительна к небольшим количествам воды, так как при взаимодействии дихлорангидрида с молярным количеством воды образуется также реакционноспособный монохлорангидрид. Третичные амины являются акцепторами выделяющегося хлористого водорода и активаторами хлора в хлорангидридах, они не вызывают побочных реакций. Пример 1. 4,01 г (10 мм) дихлорангидрида гуанозин-5-монофосфорной кислоты, полученного при хлорфосфорилирстании гуанозина, растворяют в 18 мл триметилфосфата. К раствору добавляют 0,018 мл (10 мм) воды и смесь перемешивают 3 час при комнатной температуре. К раствору монохлорангидрида гуанозин-5-монофосфорной кислоты при комнатной температуре добавляют 0,5 мл триэтиламина. Через час смесь обрабатывают 50 мл эфира. Осадок растворяют в 20 мл воды и переосаждают 200 мл спирта. Продукт исследован методами бумажной и ионообменной хроматографии и электрофореза на бумаге. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации. Наличие фосфодиэфирных связей доказано также методом электрометрического титрования. Пример 2. 3,62 г (10 мм) дихлорангидрида уридин-5-монофосфорной кислоты, полученного при фосфорилировании уридииа, растворяют в 15 мл триметилфосфата, растсор охлаждают до 5°С и при этой температуре добавляют 0,5 мл пиридина, оставляют час при комнатной температуре. Смесь обрабатывают 100 мл эфира, осадок растворяют в 15 мл воды, добавляют 1 мл 2 н. раствора гидроокиси натрия и переосаждают 300 мл спирта. Продукт исследуют, как описано в примере 1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации. Пример 3. 3,85 г (10 мм) дихлорангидрида дезоксигуанозИ11-5-мо11офосфорной кислоты, полученной при фосфорилировании дезоксигуанозина, растворяют в 11 мл триметилфосфата, раствор охлаждают до 10°С и при этой температуре добавляют 0,5 мл триэтиламина. Через час смесь обрабатывают 100 мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и переосаждают 300 мл спирта. Продукт исследован, как описано в примере 1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации. Пример 4. 3,67 г (10 мм) монохлорангидрида дезоксигуанозин-5-монофосфориой кислоты растворяют в 11 мл триметилфосфата, раствор охлаждают до 10°С мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и обрабатывают 100 мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и переосаждают 300 мл спирта. Продукт исследован как описано в примере 1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации. Предмет изобретения 1.Способ получения нолинуклеотидов путем химической полимеризации производных нуклеозидфосфатов, отличающийся тем, что, с целью обеспечения высокой полимеризационной способности и упрощения процесса, в качестве производных нуклеозидфосфатов применяют хлорангидриды нуклеозидмонофосфорных кислот. 2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что полимеризацию проводят в присутствии оснований, например третичных аминов.