Способ количественного определения днк-содержащих вирусов плесневых грибов Советский патент 1975 года по МПК C12K1/00 

Полученная культуральпая жидкость имеет рЫ 6,2-6,3.

Для предуиреждения вспенивания в ферментационную среду вносят кашалотовый жир (2,5% в каждую колбу). Ферментацию ведут на круговой качалке при 24°С.

Продолжительность ферментации 2 суток для выделения вирусов и 6 суток для определения антибиотической активности.

В процессе ферментации дробно добавляют предшественник пенициллина - фенилацетамид. (Добавление четырехкратное в количестве 0,05% при передаче посевного материала и по 0,1% в последующие 3 суток ферментации, всего 0,35%, ферментация 6 суток).

При двухсуточной ферментации для выделения вирусов фенилацетамид подают в количестве 0,05% при передаче посевного материала и 0,1% на первые сутки ферментации.

Ежесуточно контролируют стерильность посевных и ферментационных колб.

Определяют антибиотическую активность методом спектрофотометрии или иодометрии.

Мицелий в количестве 10 г сырого веса отмывают 0,1 М NaCl на 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,0, и разрушают на ультразвуковом диспергаторе в течение 2 мин при охлаждении, не допуская повышения температуры выше 30°С: Затем препараты разрушенпого мицелия встряхивают с хлороформом в соотношении 1 : I в течение 5 мин, центрифугируют в течение 30 мин и титруют, добавляя экстракт мицелия в количестве 0,3-0,5 мл в -проб грку с 0,8%-ным агаром Хоттингера, в которой в качестве индикаторной культуры содержится Escherichea coli «С в количестве 0,2 мл в логарифмической фазе роста, эту смесь нрн

39-40°С выливают на чашку Петри с 15%ным агаром Хоттингера и равномерно распределяют по всей поверхности.

Через 5 час проводят подсчет негативных колоний и определяют количество вирусных частиц на 1 г сырого веса мицелия.

Инфекционная активность препаратов, полученных из мицелия Penicillium chrysogenum - штамм № 39, в отношении Escherilhea соИ «С составляет в среднем величину, равную 4,2-10.

У нтибиотическая активность штамма составляет в среднем 10000 ед/мл.

Пример 2. Штамм ЛЬ 91 устойчив к повышенной температуре 28°С.

Fia 12 сутки роста на среде Райстрика при температуре 24°С колонии светло-зеленые, быстрорастущие, с белым слегка приподнятым очень пушистым центром, с сильной радиальной складчатостью, с белым паутинистым краем. Обратная сторона колонии темно-бурая. Диаметр колонии 34-36 мм.

Культуральную жидкость и экстракты мицелия получают аналогично примеру 1. Инфекционность препаратов, полученных из мицелия Penicillium chrysogenum-штамм №91, в отношении Eseherichea coli «С практически ие обнаруживается. Антибиотическая активность штамма составляет 1000 ед/мл.

Предмет изобретения

« пособ количественного определения дезоксирибонуклеиновых кислотсодержащих вирусов плесневых грибов, отличающийся тем, что вирусы титруют на бактериальных культурах.