Штамм продуцент кормогризина Советский патент 1980 года по МПК C12K1/00 

Изобретение относится к микробио Ьогической промышленности, а именно к получению нового штамма актиномице та, продуцирующего кормовой антибиотик - гризин, названный кормогризином. Известно, что многие виды актиномицетов .могут быть использованы для получения антибиотических веществ 1 В настоящее время в промышленном производстве кормогризина используют штамм Actinomycesgriseus ВНИИгенетика-115, продуцирующий 9,600 ед/м антибиотика 2, Недостатком известного штамма является относительно низкая антибиотическая активность. Целью изобретения является получение такого штамма, который обладал бы повышенным уровнем накопления гризина и был бы устойчив к литическому действию фагов Рд 56 и Рд 57. Штамм Actinomyces griseus Р-42-11 является мутантом штамма Actinomyces griseus ВНИИгенетика-115. Получен в результате многоступенчатой селекции по признаку антибиотикообразова:ния при обработке спор штамма рядом химических мутагенов с последующей селекцией с помощью антибиотика гриз на и фагов Рд 56 и Рд 57, Полученный штамм продуцирует антибиотик гризин, в количестве 12400-18430 ед/мл и устойчив к актинофагам Рд 56 и Рд 57. Штамм Actinomysec griseus Р-42-110 хранится в коллекции Института микробиологии и вирусологии АН Казахской ССР, регистрационный № 48. Морфологические признаки. Клетки мицелия нитевидной формы, спороносцы спиральные, споры овальные, размером 1,2-1,3 х 0,8-1 мкм. Культуральные и физиологические признаки. На картофельной среде образует колонии диаметром 8-10 мм, округлые, слегка выпуклые, складчатые, воздушный мицелий интенсивно серого цвета, субстратный мицелий темно-бежёВЕЛИ, растут в углублении агара. На соевой среде образует колонии диаметром 8-9 мм, округлые, слегка выпуклые, складчатые, воздушный мицелий темносерого цвета, субстратный мицелий бежево-коричневый. На мясопептонном агаре образует колонии 4-5 мм, округлые, гладкие, воздушный мицелийотсутствует, колонии бежевого цвета.

На синтетической среда Чапека с глюкозой образует колонии 10-11 мм округлые, ;слегка выпуклые, морщинистые, воздушный мицелий сероватобелый, субстратный мицелий кремовый, растут в углублении агара.

На жидкой регламентной производственной среде 48-часовая культура образует крупные сплетения мицелия из свободно растущих гиф.

Биохимические свойства. Отношение к сахарам слабо сбраживает арабинозу, маннит, хорошо сбраживает глюкозу, галактозу, ксз1лозу, рамнэзу, рафинозу, фруктозу.

Клетчатка; интенсивно растет на клетчатке.

Желатина: слабо разжижает на седьмае суткц роста,

Молоко; пептонизирует на 10 сутки роста без коагуляции.

Отношение к источникам азота: хорошо растет на синтетических питательных средах, содержёицнх минеральн источники азота, а на сложных питательных средах с органическими источниками азота.

Антагонистические свойства; подавляет грамположительные и грамотрицатепьные бактерии.

При мер 1. Колонии штеилма Actinomyses griseusР-42-110 выращивают в течение 7 суток при 28°С на картофельной агарнзованной среде и затем пересевают на косяки с этой же средой. Косяки вырадивают в термостате в тех же условиях.

Процесс выращивания посевного материала состоит из двух стадий. Первая стадия - выращивание продуцента в колбе объемом 750 мл со 100 мл молочной среды; %: кукурузная мука 2, крахмал 1,5, аммиачная селитра 0,5, мел 0,3, хлористый натрий 0,2, фосфат калия олнозамещенный 0,02

(молоко 100 мл - 1 л, рН 7,2-7,3), Споры со скошенного картофельного larapa высевают в колбы с молочной средой и выращивают в течение- 24 ч на подвесной качалке при 220 об/мин. и температуре 28°С,

Вторую стадию выращивания посёвйого материала проводят на мучной срде. Для ЭТО1ХЭ 5% вьфащенной кульТуральной жидкости передают в мучную среду. Вторая стадия выращивания посевного материала проводится в колбах объемом 750 мл с 50 мл мучной среды, %: кукурузная мука 4, аммиачная селитра 0,7, мел 0,5, хлористый натрий 0,29, магний сернокислый 0,05 фосфат калия однозамещенный 0,02, железо сернокислое 0,01 (рН 6,8-7,3) Посевной материал выращивается в течение 18 ч, на подвесной качалке при 220 об/мин и температуре . 10% культуральной жидкости передают в регламентную ферментационную среду следующего состава, %: кукурузная мука 2, крахмал 1,5, аммиачная селитра 0,5, мел 0,3, хлористый натрий 0,2, фосфат калия одноэамещенный 0,02, магний сернокислый 0,05, железо сернокислое 0,025 (рН 6,8-7,3 Ферментацию проводят в колбах Эрлен,мейера объемом 750 мл, содержащих 50 мл ферментационной среды, на подвесной качалке при 220 об/мин в течение 48 ч, при 28С. Содержание антибиотика в культуральной жидкости определяют методом диффузии в ага с использованием тест-культуры Вас, subtilis 6633.

На 48 ч ферментации продуцент кормогризина Actinomyces grlseus штамм 4Р-42-110 в лабораторных условиях синтезирует от 12400 до 18430 ед/мл антибиотика-кормогризина, что видно из таблицу.

Кукурузная среда с крахПр и мер2,Проверка степени фагоустойчивости мутантов осуществляется на твердой питательной среде Исследуемую культуру принимают, как устойчивую к фаггии Рд 56 и Рд 57, если при высеве на газон с данной

культурой фагов в.титре 1-10 ч/мм негативные колонии не образуются. Устойчивость культуры к фагам проводят на твердой питательной среде ПКА-5 следующего состава, %; пептон

0,5, кукурузный экстракт), 05, агарагар 1,5. Лабораторный анализ показал, что на новом штамме Р-42-110, также как и на штамме ВНИИгенетика115, актинофаги Рд 56 и Рд 57 практически не развивсшись.

Формула изобретения

Итамм Actinomyces griseus P-42-llpяродуцент кормогризина. Хранится

в коллекции культур Института кмкробиологии и вирусологии ДН Казахской ССР, регистрационный 48,

Морфология: клетки мицелия нитевидной формы, спороиосцы спиральные,

.споры овальные, разкгером 1,2-1,3 х

Ю,8-1 мкм.

Культуральные и физиологические признаки.

о

На картофельной среде образует колонии диаметром 8-10 мм, округлые, слегка выпуклые, складчатые, воздушный мицелий интенсивно серого цвета, субстратный в цeлий темно-бежевый, растут в углублении агара. На соевой среде образует колонии диаметром 8-9 мм, округлые, слегка выпуклые, складчатые, .воздушный мицелий темно-серого цвета, субстратный мицелий бежево-коричневый. На мясо-пептониом агаре образует колонии 4-5 мм округлые, гладкие, воздушный мицелий отсутствует, колонии бежевого цвета. На синтетической среде Чапека с ГЛЮКОЗОЙ о азует колонии 10-11 мм, округлые, слегка выпуклые, i-юрщйнистые, воздушный мицелий серовато-белый, субстратный мицелий кремэвый, растут в углублении агара. На жидкой регламентной производственной среде 48-часрвая культура образует крупные сплетения мицелия из свободно растушик гнф.

Биохимические свойства. Отношение к сахарам; слабо сбраживает ара бинозу, маннит, хорошо сбраживает глюкозу, галактозу, ксилозу, paiwoзу, рафинозу, фруктозу.

Клетчатка интенсивно растет на клетчатке.

Желатина слабо разжижает на седьмые сутки роста.

Молоко: пептонизнрует на 10 сутки роста без коагуляции.

o

Отношение к источникеил азота: растет на синтетических пита-. (тельных средах, содержащих етнёрш1ьные-источники азота, и иа сложныхпитательных средах с органическими 5 источниками азо-.

Антагонистические свойства: подавляет грамположителйные я грамотрицательные бактерии.

Продуцирует антибиотик-KC4JJ«oipH0 3ин, в количестве от 12400 до

18430 ед/Mrt и устойчив к актияофагам Рд 56 и Рд 57.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

0

№ 510512, кл. С 12 К 1/00, 1974 (прототип) .